一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法
专利名称：一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，属于食品加工和医
药技术领域，可应用于功能性食品、保健品和医药行业。
背景技术：
心脑血管疾病严重地危害着人们健康，已成为人类死亡的第一"杀手"。世界卫生组织(WHO)公布的统计数字显示，全世界患有各种血栓性疾病的患者在1500万，其中每年约有800万患者死亡。据卫生部统计我国每年有近120万人死于心脑血栓、脑中风、脑梗塞、老年痴呆等心脑血管栓塞性疾病，而表现亚健康的人则更多。栓塞性心脑血管疾病的预防和治疗主要是通过溶栓剂，全球每年溶栓剂潜在市场20多亿美元。 目前，临床应用的溶栓剂，如尿激酶(Urokinase,區)、链激酶(Str印tokinase，SK)、葡激酶(St即hylokinase)、蛇毒抗栓酶、重组型纤溶酶原激活剂类(t-PA和scu-PA)等，大多为纤溶酶原激活剂，它们主要通过激活体内的纤溶酶原生成纤溶酶而发挥溶栓作用，存在需要静脉注射，体内半衰期短、稳定性差，无纤维蛋白特异性，需反复大剂量注射，易诱发全身纤溶亢进，易导致全身出血等毒副作用，或价格昂贵。因此研发新一代预防和治疗栓塞性疾病的保健食品和溶栓剂，已成为当前社会的迫切要求。微生物是纤溶蛋白酶的重要来源，现在已发现有些酶的纤溶活性明显优于目前临床应用的溶栓剂，因其可批量发酵生产、价格低廉、药效时间长，可以很好地弥补上述溶栓剂缺陷，是潜在的新生代预防和治疗栓塞的药物。 Bacillus subtilis DC12—33是从中国传统发酵食品中分离筛选的一株细菌，该菌株可产生强烈纤溶活性的豆豉纤溶酶(fibrinolytic subtilisin) Subtilisin FS33，Subtilisin FS33分子量为30KDa，等电点pi为8. 7±0. 2，且丝氨酸(含羟基)和色氨酸(含吲哚基团)是其酶活性中心或位于酶活性中心附近；在pH7-12范围内SubtilisinFS33生化性质较稳定，但酸性条件酶活力迅速下降；体外试验表明Subtilisin FS33在缺乏内源性溶血因子的情况下，仍能溶解血栓纤维蛋白，表现出直接降解血栓纤维蛋白能力；体内试验研究中，不同剂量Subtilisin FS33静脉注射给予受试大鼠(动物血栓模型)，其APTT、PT、TT等都明显延长(P < 0. 05， P < 0. 01)，血桨FDP的含量升高(P < 0. 01) ，D-dimer呈阳性，而机体ELT值显著降低(P < 0. 05)，表明机体的抗凝能力明显增高，纤溶能力增强，溶栓效果明显，因此Subtilisin FS33同时具有直接和间接的溶栓作用。
保健食品的功能性因子是通过胃肠道吸收而发挥其效应，尽管口服给药的生物利用度可能不如静脉注射和肌肉注射，但口服痛苦小、最方便、最易接受，所以新型口服给药系统的研究倍受世人关注。中国科学院和百奥医药集团从蚯蚓体内纯化出蚓激酶(Lumbrokinase)，并研究证明该蚓激酶可口服吸收，发挥其有效治疗效果，已经应用于临床。 生物活性多肽经肠道转运吸收，需要克服两个屏障即胃肠酶屏障和黏膜物理屏障，胃肠道和肠上皮细胞的酶降解作用是活性肽类口服生物利用度低的重要原因。脂质体
3纳米载运系统作为一种新型的传递和控释载体，作为多肽蛋白类载体显示出诸多优越性保护其不被胃酸和消化道酶分解，增加肠道上皮细胞的吸附，延长吸收时间，可以跨越生物屏障、能通过人体血液微循环、改变其体内分布。资料显示，脂质体的介质材料、制作工艺、表面电荷、粒径大小、亲疏水性、药物负载类型等因素，都影响着脂质体纳米粒的载药量和吸收率。 一般地讲，脂质体疏水性强，易于肠吸收，表面疏水性和电负性越大，越易被机体吞
噬清除。本发明采用脂质体载运系统包合载运SubtilisinFS33，并进行促肠吸收的酶蛋白改性修饰和脂质体表面修饰，提高Subtilisin FS33的肠吸收效率和生物利用度。
发明内容
本发明提供一种促肠吸收的豆豉纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，该促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体的特征是以改性修饰的豆豉纤溶酶Subtilisin FS33为包合对象，选择胆固醇和磷脂作为介质材料，PEG改性修饰酶蛋白，0-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或混合物)表面修饰载酶脂质体，优化硫酸铵梯度法制备载酶脂质体的条件，并采用蛋白酶抑制剂抑制消化道蛋白酶活性，丙烯酸树脂(Eudragit)肠溶包衣等，通过上述技术的集成制备豆豉纤溶酶载酶脂质体系统。
本发明的技术方案 本发明是一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，该纤溶酶载酶脂质体是通过选择合适介质材料(胆固醇和卵磷脂)，适当蛋白酶改性修饰(PEG作为改性剂)和
表面修饰(o-羧甲基壳聚糖或壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或混合物)作为促肠吸
收剂)，改进载酶脂质体的制备工艺，改变其表面电荷、粒径大小、亲疏水性、负载类型；冷冻干燥的纤溶酶载酶脂质体添加蛋白酶抑制剂(抑制消化道蛋白酶作用)，利用丙烯酸树脂(Eudragit，对pH敏感)作为肠溶包衣。上述技术措施的集成构建一个多层屏障和促肠上皮跨膜转运吸收体系，提高其跨生物膜通透性和生物利用度。 —种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体包合物，其包合物结构特征为，PEG改性修饰的豆豉纤溶酶Subtilisin FS33被包合在脂质体的空腔内，脂质体经0-羧甲基壳聚糖(或胆酸盐)表面修饰，形成以脂质体为主体分子、改性修饰豆豉纤溶酶Subtilisin FS33为客体分子的包合物。 本发明是通过以下技术方法实现的称取适量胆固醇和蛋黄卵磷脂(胆固醇卵磷脂=1 : 2;W/W)—无水乙醇和无水乙醚充分溶解混匀一5(TC减压蒸发抽干成脂膜一加入适量O-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或混合物)和0. 5mo1/1浓度(NH4) 2S04溶液充分水化一冰浴超声(功率450w， 20min) — 0. 22 y m微孔滤膜，整粒一加入改性Subtilisin FS33酶(0. 19mg/ml)—温度5(TC水浴孵化一制得载酶脂质体一水洗脱盐一冷冻干燥一载酶脂质体粒一蛋白酶抑制剂一丙烯酸树脂作为肠溶包衣一促肠吸收纤溶酶载酶脂质体。
本发明的技术效果 聚乙二醇(PEG)无毒、无抗原性、具有良好的溶解性，且该聚合物的生物相容性和安全性得到美国FDA的认证。PEG可将其优良性质传递到修饰的多肽和蛋白质等生物分子上，改变其生物分配行为和溶解行为；PEG可使生物膜传质能力变大，改变PEG含量可控制药物透过速度，因此PEG是一种重要的多肽修饰剂和促吸收剂。0-羧甲基壳聚糖(或胆酸盐、壳聚糖、脱氧胆酸盐、凝集素)具有脂质体表面修饰，可以实现膜黏附，延长其在肠道壁或肠道特定吸收部位的接触与转运时间，改善多肽的促肠吸收作用，促进多肽的肠吸收效率；蛋白酶抑制剂可以抑制消化道蛋白酶的作用，减弱对多肽的裂解作用；丙烯酸树脂(Eudragit)对pH敏感，可作为肠溶包衣。上述措施构成了一个多层屏障和有利于肠上皮跨膜转运吸收的体系。这些集成措施提高纤溶酶的肠吸收效率5-8倍，提高生物利用度2. 5倍，其溶栓效果被体内外的试验结论所证实。改性脂质体包被的Subtilisin FS33对温度、极端pH和模拟人工肠液及胃肠道的耐受性较未经脂质体包被酶有明显提高，并提高了纤溶酶的肠吸收效率和生物利用度。这种纤溶酶载体体系可应用于食品和保健品。
具体实施例方式
(1)以"-NH厂PEG为引发剂，阴离子开环聚合法制备PEG-Subtilisin FS33改性蛋白酶。 (2)纤溶酶载酶脂质体的制备。称取适量胆固醇和蛋黄卵磷脂(胆固醇卵磷脂=1 : 2;W/W)，用无水乙醇和无水乙醚充分溶解、混匀，5(TC减压蒸发抽干成脂膜后，加入适量0-羧甲基壳聚糖(壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或其混合物)和O. 5mol/l浓度(NH山S04溶液充分水化，在冰浴条件下超声波细胞破碎仪(450w)处理20min，然后0. 22 y m微孔滤膜过滤整粒，加入改性PEG-Subtilisin FS33酶，于5(TC水浴孵化，制得载酶脂质体。 (3)促肠吸收纤溶酶载酶脂质体制备。载酶脂质体经冷冻干燥，并加入蛋白酶抑制剂，丙烯酸树脂作为肠溶包衣，制得促肠吸收纤溶酶载酶脂质体多元复合体。该载酶脂质体的粒径50-150nm左右，活性包封率30%左右。
权利要求
一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，其特征是PEG改性修饰的豆豉纤溶酶Subtilisin FS33被包合在脂质体的空腔内，并经O-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或凝集素)表面修饰，形成以改性脂质体为主体分子、改性修饰豆豉纤溶酶SubtilisinFS33为客体分子的包合物。
2. 根据权利要求1所述的促肠吸收纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，其特征在于改进载酶脂质体的制备工艺，选择胆固醇和卵磷脂作为介质材料(其比例为l : 2—1 : 6)，PEG作为蛋白改性修饰剂，O-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或混合物)作为表面修饰和促肠吸收剂，改变其表面电荷、粒径大小、亲疏水性、负载类型和肠膜通透性。
3. 根据权利要求1所述的一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，其特征在于添加蛋白酶抑制剂抑制消化道蛋白酶作用，丙烯酸树脂(Eudragit，对pH敏感)作为肠溶包衣，集成措施制备促肠吸收纤溶酶载酶脂质体体系。
4. 一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，其特征在于胆固醇与卵磷脂的重量比为l : 2—1 : 6，溶于无水乙醇和无水乙醚，5(TC减压蒸发抽干成脂膜，加入适量0-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或或凝集素)和O. 5mol/l(NH》^(^溶液充分水化，冰浴超声，微孔滤膜整粒，加入改性Subtilisin FS33酶，5(TC水浴孵化，制得载酶脂质体。
全文摘要
本发明涉及一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，属于食品加工和医药技术领域，可应用于功能性食品、保健品和医药行业。Bacillus subtilis DC12-33是从中国传统发酵食品中分离筛选的一株细菌，该菌株可产生强烈纤溶活性的豆豉纤溶酶(fibrinolytic subtilisin)Subtilisin FS33，通过体内外的试验研究证明Subtilisin FS33同时具有直接和间接的溶栓作用。本发明以改性修饰的豆豉纤溶酶Subtilisin FS33为包合对象，选择胆固醇和磷脂作为介质材料，PEG改性修饰酶蛋白，0-羧甲基壳聚糖(或胆酸盐、壳聚糖、凝集素)表面修饰脂质体，并采用蛋白酶抑制剂抑制消化道蛋白酶活性，丙烯酸树脂(Eudragit)肠溶包衣等技术集成措施制备促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体系统，构成一个多层屏障和有利于肠上皮跨膜转运吸收的体系，提高Subtilisin FS33的肠吸收效率和生物利用度。这种纤溶酶载体体系可应用于功能食品和保健品等。
文档编号A61K9/127GK101703240SQ20091023654
公开日2010年5月12日 申请日期2009年10月30日 优先权日2009年10月30日
发明者孙宝国, 曹雁平, 王成涛, 王静 申请人:北京工商大学
技术领域：
本发明涉及一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，属于食品加工和医
药技术领域，可应用于功能性食品、保健品和医药行业。
背景技术：
心脑血管疾病严重地危害着人们健康，已成为人类死亡的第一"杀手"。世界卫生组织(WHO)公布的统计数字显示，全世界患有各种血栓性疾病的患者在1500万，其中每年约有800万患者死亡。据卫生部统计我国每年有近120万人死于心脑血栓、脑中风、脑梗塞、老年痴呆等心脑血管栓塞性疾病，而表现亚健康的人则更多。栓塞性心脑血管疾病的预防和治疗主要是通过溶栓剂，全球每年溶栓剂潜在市场20多亿美元。 目前，临床应用的溶栓剂，如尿激酶(Urokinase,區)、链激酶(Str印tokinase，SK)、葡激酶(St即hylokinase)、蛇毒抗栓酶、重组型纤溶酶原激活剂类(t-PA和scu-PA)等，大多为纤溶酶原激活剂，它们主要通过激活体内的纤溶酶原生成纤溶酶而发挥溶栓作用，存在需要静脉注射，体内半衰期短、稳定性差，无纤维蛋白特异性，需反复大剂量注射，易诱发全身纤溶亢进，易导致全身出血等毒副作用，或价格昂贵。因此研发新一代预防和治疗栓塞性疾病的保健食品和溶栓剂，已成为当前社会的迫切要求。微生物是纤溶蛋白酶的重要来源，现在已发现有些酶的纤溶活性明显优于目前临床应用的溶栓剂，因其可批量发酵生产、价格低廉、药效时间长，可以很好地弥补上述溶栓剂缺陷，是潜在的新生代预防和治疗栓塞的药物。 Bacillus subtilis DC12—33是从中国传统发酵食品中分离筛选的一株细菌，该菌株可产生强烈纤溶活性的豆豉纤溶酶(fibrinolytic subtilisin) Subtilisin FS33，Subtilisin FS33分子量为30KDa，等电点pi为8. 7±0. 2，且丝氨酸(含羟基)和色氨酸(含吲哚基团)是其酶活性中心或位于酶活性中心附近；在pH7-12范围内SubtilisinFS33生化性质较稳定，但酸性条件酶活力迅速下降；体外试验表明Subtilisin FS33在缺乏内源性溶血因子的情况下，仍能溶解血栓纤维蛋白，表现出直接降解血栓纤维蛋白能力；体内试验研究中，不同剂量Subtilisin FS33静脉注射给予受试大鼠(动物血栓模型)，其APTT、PT、TT等都明显延长(P < 0. 05， P < 0. 01)，血桨FDP的含量升高(P < 0. 01) ，D-dimer呈阳性，而机体ELT值显著降低(P < 0. 05)，表明机体的抗凝能力明显增高，纤溶能力增强，溶栓效果明显，因此Subtilisin FS33同时具有直接和间接的溶栓作用。
保健食品的功能性因子是通过胃肠道吸收而发挥其效应，尽管口服给药的生物利用度可能不如静脉注射和肌肉注射，但口服痛苦小、最方便、最易接受，所以新型口服给药系统的研究倍受世人关注。中国科学院和百奥医药集团从蚯蚓体内纯化出蚓激酶(Lumbrokinase)，并研究证明该蚓激酶可口服吸收，发挥其有效治疗效果，已经应用于临床。 生物活性多肽经肠道转运吸收，需要克服两个屏障即胃肠酶屏障和黏膜物理屏障，胃肠道和肠上皮细胞的酶降解作用是活性肽类口服生物利用度低的重要原因。脂质体
3纳米载运系统作为一种新型的传递和控释载体，作为多肽蛋白类载体显示出诸多优越性保护其不被胃酸和消化道酶分解，增加肠道上皮细胞的吸附，延长吸收时间，可以跨越生物屏障、能通过人体血液微循环、改变其体内分布。资料显示，脂质体的介质材料、制作工艺、表面电荷、粒径大小、亲疏水性、药物负载类型等因素，都影响着脂质体纳米粒的载药量和吸收率。 一般地讲，脂质体疏水性强，易于肠吸收，表面疏水性和电负性越大，越易被机体吞
噬清除。本发明采用脂质体载运系统包合载运SubtilisinFS33，并进行促肠吸收的酶蛋白改性修饰和脂质体表面修饰，提高Subtilisin FS33的肠吸收效率和生物利用度。
发明内容
本发明提供一种促肠吸收的豆豉纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，该促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体的特征是以改性修饰的豆豉纤溶酶Subtilisin FS33为包合对象，选择胆固醇和磷脂作为介质材料，PEG改性修饰酶蛋白，0-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或混合物)表面修饰载酶脂质体，优化硫酸铵梯度法制备载酶脂质体的条件，并采用蛋白酶抑制剂抑制消化道蛋白酶活性，丙烯酸树脂(Eudragit)肠溶包衣等，通过上述技术的集成制备豆豉纤溶酶载酶脂质体系统。
本发明的技术方案 本发明是一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，该纤溶酶载酶脂质体是通过选择合适介质材料(胆固醇和卵磷脂)，适当蛋白酶改性修饰(PEG作为改性剂)和
表面修饰(o-羧甲基壳聚糖或壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或混合物)作为促肠吸
收剂)，改进载酶脂质体的制备工艺，改变其表面电荷、粒径大小、亲疏水性、负载类型；冷冻干燥的纤溶酶载酶脂质体添加蛋白酶抑制剂(抑制消化道蛋白酶作用)，利用丙烯酸树脂(Eudragit，对pH敏感)作为肠溶包衣。上述技术措施的集成构建一个多层屏障和促肠上皮跨膜转运吸收体系，提高其跨生物膜通透性和生物利用度。 —种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体包合物，其包合物结构特征为，PEG改性修饰的豆豉纤溶酶Subtilisin FS33被包合在脂质体的空腔内，脂质体经0-羧甲基壳聚糖(或胆酸盐)表面修饰，形成以脂质体为主体分子、改性修饰豆豉纤溶酶Subtilisin FS33为客体分子的包合物。 本发明是通过以下技术方法实现的称取适量胆固醇和蛋黄卵磷脂(胆固醇卵磷脂=1 : 2;W/W)—无水乙醇和无水乙醚充分溶解混匀一5(TC减压蒸发抽干成脂膜一加入适量O-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或混合物)和0. 5mo1/1浓度(NH4) 2S04溶液充分水化一冰浴超声(功率450w， 20min) — 0. 22 y m微孔滤膜，整粒一加入改性Subtilisin FS33酶(0. 19mg/ml)—温度5(TC水浴孵化一制得载酶脂质体一水洗脱盐一冷冻干燥一载酶脂质体粒一蛋白酶抑制剂一丙烯酸树脂作为肠溶包衣一促肠吸收纤溶酶载酶脂质体。
本发明的技术效果 聚乙二醇(PEG)无毒、无抗原性、具有良好的溶解性，且该聚合物的生物相容性和安全性得到美国FDA的认证。PEG可将其优良性质传递到修饰的多肽和蛋白质等生物分子上，改变其生物分配行为和溶解行为；PEG可使生物膜传质能力变大，改变PEG含量可控制药物透过速度，因此PEG是一种重要的多肽修饰剂和促吸收剂。0-羧甲基壳聚糖(或胆酸盐、壳聚糖、脱氧胆酸盐、凝集素)具有脂质体表面修饰，可以实现膜黏附，延长其在肠道壁或肠道特定吸收部位的接触与转运时间，改善多肽的促肠吸收作用，促进多肽的肠吸收效率；蛋白酶抑制剂可以抑制消化道蛋白酶的作用，减弱对多肽的裂解作用；丙烯酸树脂(Eudragit)对pH敏感，可作为肠溶包衣。上述措施构成了一个多层屏障和有利于肠上皮跨膜转运吸收的体系。这些集成措施提高纤溶酶的肠吸收效率5-8倍，提高生物利用度2. 5倍，其溶栓效果被体内外的试验结论所证实。改性脂质体包被的Subtilisin FS33对温度、极端pH和模拟人工肠液及胃肠道的耐受性较未经脂质体包被酶有明显提高，并提高了纤溶酶的肠吸收效率和生物利用度。这种纤溶酶载体体系可应用于食品和保健品。
具体实施例方式
(1)以"-NH厂PEG为引发剂，阴离子开环聚合法制备PEG-Subtilisin FS33改性蛋白酶。 (2)纤溶酶载酶脂质体的制备。称取适量胆固醇和蛋黄卵磷脂(胆固醇卵磷脂=1 : 2;W/W)，用无水乙醇和无水乙醚充分溶解、混匀，5(TC减压蒸发抽干成脂膜后，加入适量0-羧甲基壳聚糖(壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或其混合物)和O. 5mol/l浓度(NH山S04溶液充分水化，在冰浴条件下超声波细胞破碎仪(450w)处理20min，然后0. 22 y m微孔滤膜过滤整粒，加入改性PEG-Subtilisin FS33酶，于5(TC水浴孵化，制得载酶脂质体。 (3)促肠吸收纤溶酶载酶脂质体制备。载酶脂质体经冷冻干燥，并加入蛋白酶抑制剂，丙烯酸树脂作为肠溶包衣，制得促肠吸收纤溶酶载酶脂质体多元复合体。该载酶脂质体的粒径50-150nm左右，活性包封率30%左右。
权利要求
一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，其特征是PEG改性修饰的豆豉纤溶酶Subtilisin FS33被包合在脂质体的空腔内，并经O-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或凝集素)表面修饰，形成以改性脂质体为主体分子、改性修饰豆豉纤溶酶SubtilisinFS33为客体分子的包合物。
2. 根据权利要求1所述的促肠吸收纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，其特征在于改进载酶脂质体的制备工艺，选择胆固醇和卵磷脂作为介质材料(其比例为l : 2—1 : 6)，PEG作为蛋白改性修饰剂，O-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或凝集素，其中之一或混合物)作为表面修饰和促肠吸收剂，改变其表面电荷、粒径大小、亲疏水性、负载类型和肠膜通透性。
3. 根据权利要求1所述的一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，其特征在于添加蛋白酶抑制剂抑制消化道蛋白酶作用，丙烯酸树脂(Eudragit，对pH敏感)作为肠溶包衣，集成措施制备促肠吸收纤溶酶载酶脂质体体系。
4. 一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，其特征在于胆固醇与卵磷脂的重量比为l : 2—1 : 6，溶于无水乙醇和无水乙醚，5(TC减压蒸发抽干成脂膜，加入适量0-羧甲基壳聚糖(或壳聚糖或胆酸盐或或凝集素)和O. 5mol/l(NH》^(^溶液充分水化，冰浴超声，微孔滤膜整粒，加入改性Subtilisin FS33酶，5(TC水浴孵化，制得载酶脂质体。
全文摘要
本发明涉及一种促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体及其制备方法，属于食品加工和医药技术领域，可应用于功能性食品、保健品和医药行业。Bacillus subtilis DC12-33是从中国传统发酵食品中分离筛选的一株细菌，该菌株可产生强烈纤溶活性的豆豉纤溶酶(fibrinolytic subtilisin)Subtilisin FS33，通过体内外的试验研究证明Subtilisin FS33同时具有直接和间接的溶栓作用。本发明以改性修饰的豆豉纤溶酶Subtilisin FS33为包合对象，选择胆固醇和磷脂作为介质材料，PEG改性修饰酶蛋白，0-羧甲基壳聚糖(或胆酸盐、壳聚糖、凝集素)表面修饰脂质体，并采用蛋白酶抑制剂抑制消化道蛋白酶活性，丙烯酸树脂(Eudragit)肠溶包衣等技术集成措施制备促肠吸收的纤溶酶载酶脂质体系统，构成一个多层屏障和有利于肠上皮跨膜转运吸收的体系，提高Subtilisin FS33的肠吸收效率和生物利用度。这种纤溶酶载体体系可应用于功能食品和保健品等。
文档编号A61K9/127GK101703240SQ20091023654
公开日2010年5月12日 申请日期2009年10月30日 优先权日2009年10月30日
发明者孙宝国, 曹雁平, 王成涛, 王静 申请人:北京工商大学
最新回复(0)