用埃坡霉素衍生物和放射进行的增殖性疾病的治疗的制作方法
专利名称：用埃坡霉素衍生物和放射进行的增殖性疾病的治疗的制作方法
技术领域：
本发明涉及与电离放射组合施用来延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤疾病的有机化合物，特别是药物组合物。
我们现已发现某些埃坡霉素衍生物当与电离放射组合来延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤疾病时是有效的。
因此，本发明提供了在需要该治疗的受试者中延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤疾病的方法，该方法包括给受试者施用有效量的游离或可药用盐形式的式I埃坡霉素衍生物以及至少一种可药用载体， 在该化合物中，A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基，且Z为O或键；与电离放射的组合。
其中A表示O、R为氢且Z为O的式I化合物称为埃坡霉素A；其中A表示O、R为甲基且Z为O的式I化合物称为埃坡霉素B；其中A表示O、R为氢且Z为键的式I化合物称为埃坡霉素C；其中A表示O、R为甲基且Z为键的式I化合物称为埃坡霉素D。
本发明还提供了式I化合物(或其可药用的盐或前药酯)在制备用于与电离放射组合来治疗增殖性疾病的药物中的用途。
另一方面，本发明提供了式I埃坡霉素衍生物(或其可药用的盐或前药酯)在与电离放射组合来治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤中的用途。
另一方面，本发明还提供了式I埃坡霉素衍生物(或其可药用的盐或前药酯)，作为活性成分用于与电离放射组合来治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤。
另一方面，本发明还提供了如下定义的包装该包装包含式I埃坡霉素衍生物(或其可药用的盐或前药酯)以及用于与电离放射组合来治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤的说明。
在本说明书的上文和其它地方，下列术语具有以下含义在上下文中提及的分别与有机基团或化合物有关的术语“低级”定义含有最多且包括7个碳原子、优选最多且包括4个碳原子的支链或直链化合物或基团。
低级烷基为支链或直链基团，含有1至7个碳原子，优选含有1至4个碳原子。低级烷基例如表示甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基或异丁基。
如本文所用的术语“延缓发展”指给处于所治疗增殖性疾病早期的患者施用该组合。
如本文所用的术语“实体瘤疾病”包括但不限于神经胶质瘤、甲状腺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌及一般的胃肠道癌、宫颈癌、肺癌且特别是小细胞肺癌和非小细胞肺癌、头颈部癌、膀胱癌、前列腺癌或Kaposi肉瘤。在本发明的一个优选实施方案中，所治疗的肿瘤疾病为神经胶质瘤、前列腺癌或甲状腺癌。该组合不仅可抑制实体瘤的生长，而且还可抑制液体肿瘤的生长。此外，肿瘤体积也会减小，这取决于肿瘤的类型和所用的具体组合。本文所公开的组合还适于防止肿瘤的转移性扩散及微小转移灶的生长或发展。
组合指施用一定量的式I埃坡霉素衍生物与施用一定量的电离放射的组合，以产生协同作用，如果施用式I埃坡霉素衍生物而没有分别、同时或依次施用电离放射，则不会获得这种作用。其中，电离放射的施用可以是连续的、依次的或散在的。或者，如果施用电离放射而没有分别、同时或依次施用式I埃坡霉素衍生物，则也不会获得这种作用，其中，施用可以是连续的、依次的或散在的。
组合优选指施用一定量的式I埃坡霉素衍生物与施用一定量的电离放射的组合，以产生协同的抗增殖作用和/或杀产克隆细胞(clonogenic cell)作用，如果如下施用则不会获得这些作用a)施用式I埃坡霉素衍生物而没有预先、同时或随后施用电离放射。其中，施用可以是连续的、依次的或散在的；b)施用电离放射而没有预先、同时或随后施用式I埃坡霉素衍生物。其中，施用可以是连续的、依次的或散在的。
在上下文中提到的术语“电离放射”指作为电磁射线(例如X-射线和γ射线)或粒子(例如α和β粒子)而发生的电离放射。电离放射应用于但不限于放射疗法，它是本领域公知的(Hellman，Principle of Radiation Therapy，Cancer，in Principles and Practice of Oncology，248-275(Devita等人，第4版，V1，1993))。
尤其在专利和专利申请WO 93/10121、US 6,194,181、WO 98/25929、WO 98/08849、WO 99/43653、WO 98/22461及WO 00/31247中，特别是在其各自的化合物权利要求和实施例的终产物中，概括地和具体地公开了如下定义的式I埃坡霉素衍生物以及制备该埃坡霉素衍生物的方法其中A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基且Z为O或键；这些文献的终产物、药物制剂和权利要求的主题在此处被引入本申请作为公开内容的参考。同样还包括在所述文献中公开的相应的立体异构体和相应的晶体变体(crystal modifications)，如溶剂化物和多晶型物。
埃坡霉素B向相应的内酰胺的转化在WO 99/02514的流程图21(第31和32页)及实施例3(第48-50页)中公开。不同于埃坡霉素B的式I化合物向相应的内酰胺的转化也可类似地完成。其中RN为低级烷基的相应的式I埃坡霉素衍生物可通过本领域已知的方法如还原烷基化反应、以其中RN为氢的埃坡霉素衍生物为原料来制备。
式I埃坡霉素衍生物，尤其是埃坡霉素B，可作为在WO 99/39694中公开的药物组合物的一部分来施用。
包含下述的组合在下文中称为本发明的组合(a)游离或可药用盐形式的式I埃坡霉素衍生物，在该化合物中，A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基，且Z为O或键，以及任选的至少一种可药用载体；和(b)电离放射。
增殖性疾病如实体瘤疾病的性质是多因子的。在某些情况下，不同作用机制的药物可以组合使用。但是，仅考虑将具有不同作用方式的药物任意组合并不一定产生具有有益作用的组合。
在本发明的组合中，式I埃坡霉素衍生物及其可药用的盐及前药衍生物优选以药物制剂的形式使用，该药物制剂含有相关治疗有效量的活性成分，任选联合或混合有适于施用的无机或有机、固态或液态的可药用载体。
在一个优选的实施方案中，每个患者接受一定剂量的电离放射，同时经静脉注射施用式I埃坡霉素衍生物，每周一次，共计三周，然后停药一周。每四周的间隔被认为是一个周期。将每个周期的第一天规定为式I埃坡霉素衍生物和电离放射的施用日。在这些研究中可以测定治疗效果，例如，在18或24周后每6周通过肿瘤放射学评价来测定。
在可选的实施方案中，电离放射作为预治疗使用，即，在用本发明的组合开始治疗之前使用；对患者单独施用一定时期的电离放射，例如，每天单独施用电离放射，共计两天或三天，或者数周。
在另一个优选的实施方案中，经静脉注射施用式I埃坡霉素衍生物，每周一次，共计三周，然后停药一周。每四周的间隔被认为是一个周期。在这些研究中可以测定治疗效果，例如，在18或24周后每6周通过肿瘤放射学评价来测定。
埃坡霉素衍生物的药物组合物可以例如是肠内施用组合物(例如口服、直肠、气雾剂吸入或鼻腔施用)、胃肠道外施用组合物(例如静脉内或皮下施用)，或者透皮施用组合物(例如被动或离子电渗)或局部施用组合物。
优选埃坡霉素衍生物的药物组合物适应于口服施用。
本发明的药物组合物可按本身已知的方法来制备，它们是适于经肠内(例如口服或直肠)和胃肠道外施用于哺乳动物(恒温动物)、包括人的那些，它们仅包含治疗有效量的至少一种具有药理活性的组合组分，或者还包含一种或多种可药用载体，尤其是适于经肠内或胃肠道外应用的载体。
新的药物组合物含有例如约10％至约100％、优选约20％至约60％的活性成分。用于组合疗法的经肠内或胃肠道外施用的药物制剂例如是单位剂型的那些，例如糖包衣片剂、片剂、胶囊剂或栓剂，此外还有安瓿剂。若无另外说明，这些药物制剂按本身已知的方法来制备，例如通过常规的混合、制粒、包糖衣、溶解或冷冻干燥方法来制备，可以理解包含在各剂型的独立剂量中的组合组分的单位含量不一定构成其有效量，因为可通过施用多个剂量单位来达到必需有效量。
在口服剂型组合物的制备中，可以使用任何常用的药物介质，例如，水、乙二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂；或者当为口服固体制剂如散剂、胶囊剂和片剂时，可以使用载体，例如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂或崩解剂等，固体口服制剂优先于液体制剂。由于片剂和胶囊剂易于施用，因此它们代表了最有利的口服剂量单位形式，在这种情形下显然使用固体药物载体。
具体而言，本发明的组合中治疗有效量的各组合组分可同时或以任何顺序依次施用，并且各组分可分别或作为固定组合施用。例如，本发明的延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病的方法包括同时或以任何顺序依次施用联合治疗有效量的、优选协同有效量的(i)第一组合组分和(ii)第二组合组分，例如以与本文所述的量相一致的日剂量或周剂量施用。本发明的组合的各组合组分可以在治疗期间的不同时间分别施用或者同时施用。此外，术语施用还涵盖使用在体内可转化为组合组分本身的式I埃坡霉素衍生物的前药。因此，本发明应当理解为涵盖所有的同时或交替治疗的方案，并且术语“施用”也相应地被解释。
电离放射和式I埃坡霉素衍生物相关联的剂量优选为产生协同作用的比例的剂量。
如果恒温动物是人类，则对成年患者而言，式I化合物的剂量优选为约0.25至75、优选0.5至50、例如2.5mg/m2，每周一次，共计二至四周，例如三周，然后停药6至8天。在本发明的一个实施方案中，埃坡霉素B按照US6,302,838中所述的治疗方案进行施用，该专利的公开内容引入本文作为参考。
式I化合物的具体施用模式和剂量可以由所参与的医师考虑患者的具体情形、尤其是年龄、体重、生活方式及活动水平等来选择。
式I埃坡霉素衍生物的剂量可取决于多种因素，例如活性成分的效能及作用持续时间、施用模式、电离放射的效能及作用持续时间，和/或待治疗受试者的性别、年龄、体重及个体情形。
电离放射的剂量可取决于多种因素，例如电离放射的效能及作用持续时间、施用模式、施用部位、式I埃坡霉素衍生物的效能及作用持续时间，和/或待治疗受试者的性别、年龄、体重及个体情形。电离放射的剂量通常以放射吸收剂量、时间及分数来定义，必须由所参与的医师谨慎地加以确定。
式I化合物中的成盐基团是具有碱性或酸性的基团或根。具有至少一个碱性基团或至少一个碱根如游离氨基、吡嗪基或吡啶基的化合物可以例如与无机酸或适宜的有机羧酸或磺酸形成酸加成盐，所述的无机酸例如是盐酸、硫酸或磷酸，所述的有机羧酸或磺酸例如是脂肪族单-或二-羧酸，例如三氟乙酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、羟基马来酸、苹果酸、酒石酸、枸橼酸或草酸，或者是氨基酸如精氨酸或赖氨酸，或者是芳香族羧酸，例如苯甲酸、2-苯氧基-苯甲酸、2-乙酰氧基-苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、芳香族-脂肪族羧酸如扁桃酸或肉桂酸、杂芳香族羧酸如烟酸或异烟酸、脂肪族磺酸如甲磺酸、乙磺酸或2-羟基乙磺酸，或者芳香族磺酸如苯磺酸、对甲苯磺酸或萘-2-磺酸。当存在数个碱性基团时，可形成单-或多元酸加成盐。
为分离或纯化的目的，以及对于还可用作中间体的化合物而言，还可能使用不可药用的盐。
然而只有可药用的无毒盐可用于治疗目的，因此优选可药用的无毒盐。
在式I化合物中，优选A表示O，R为低级烷基，例如乙基或最优选甲基，Z优选为O。
在本发明的一个优选实施方案中，组合包含埃坡霉素B和电离放射。
而且，本发明还涉及治疗患有增殖性疾病的恒温动物的方法，该方法包括对所述动物以联合治疗有效对抗增殖性疾病的方式施用本发明的组合，其中组合组分还可以以它们的可药用盐的形式存在。
此外，本发明还涉及本发明的组合在延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病中以及在制备用于延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病的药物中的用途。
在本发明的一个实施方案中，止泻剂与本发明的组合共同施用以预防、控制或消除腹泻，所述腹泻有时与施用埃坡霉素、尤其是埃坡霉素B有关。因此，本发明还涉及预防或控制与施用式I埃坡霉素衍生物有关的腹泻的方法，该方法包括对接受本发明的组合进行治疗的患者施用有效量的止泻剂。止泻剂及施用方案对本领域技术人员而言是已知的。适用于本发明的方法和组合物的止泻剂包括但不限于天然阿片样物质，例如阿片酊、鸦片樟脑酊及可待因，合成阿片样物质，例如地芬诺酯、地芬诺新及洛哌丁胺，碱式水杨酸铋，奥曲肽(例如可以以SANDOSTATINTM获得)，胃动素拮抗剂以及传统的止泻药，例如高岭土、果胶、小蘖碱及毒蕈碱剂。
下列实施例意欲解释本发明，而不意欲限制本发明。
实施例1肿瘤细胞的增殖用MTT-样alamarBlue比色测定法进行评价，该方法基于代谢产物活性的检测。为了测定产克隆细胞存活(clonogenic survival)，用指定的处理将所铺的单细胞(singular cells)的数量调节至约100个集落/皿。细胞与不同药物接触24小时后进行照射，然后生长8至10天，之后在甲醇/乙酸(75％/25％)中固定并用结晶紫染色。仅计数含有多于50个细胞/集落的集落。测定未处理细胞的平板效率(PE)并按以下公式计算PE(％)＝(集落计数/所铺细胞数)×100。接受指定处理的存活分数(SF)按以下公式测定SF＝(集落计数)/(所铺细胞数×PE/100)。产克隆试验至少进行两次，没有误差线归因于最小标准偏差。在室温下，在组织培养皿(100×100mm)或96-孔板中采用Pantak Therapax 3,300kV X-射线单位0.7Gy/分钟照射细胞培养物。剂量测定用Vigilant-剂量仪来控制。
进行最初的增殖试验以测定与电离放射治疗组合应用的埃坡霉素B的剂量范围。在埃坡霉素B的低于纳摩尔及较低的纳摩尔范围内，清楚地观察到超过72小时的对抗两种细胞系(E1A/ras转化的p53-/-MEFs；人结肠腺癌细胞系SW480)的抗增殖剂量响应。与遗传确定的致癌基因转化的MEFs相比，人SW480细胞表现出对埃坡霉素B的敏感性提高(附录埃坡霉素B-1)。用埃坡霉素B和电离放射(5Gy)组合处理显示至少是累加的抗这两种细胞系的抗增殖作用(附录埃坡霉素B-2，以埃坡霉素B的代表性浓度给出)。对于该组合处理模式，细胞在照射前用埃坡霉素B预处理24小时。
基于这些结果，产克隆细胞存活试验用埃坡霉素B与电离放射的组合来进行。产克隆试验基于来自单细胞的致密克隆的生长晕，所述单细胞以较低密度铺在培养皿中。定量并比较在不同处理条件下的克隆生长晕。
附录埃坡霉素B-3概述了用SW480和E1A/ras转化的MEFs进行的产克隆细胞存活，所述细胞系经电离放射和埃坡霉素B单独及组合处理。与增殖试验相似，SW480细胞对埃坡霉素B的敏感性比MEFs更强，组合处理再次表明在两种细胞系中有至少是累加的作用(对SW480和MEFs而言，埃坡霉素B的剂量范围是不同的，如各图中所举例说明的)。基于这些结果，组合处理的效果应当在体内用肿瘤同种异体移植物/异种移植物模型进行检验。
基于埃坡霉素B同样在(某些)耐紫杉醇的肿瘤细胞系中的令人感兴趣的抗增殖性质，我们比较了埃坡霉素B和紫杉醇与电离放射组合来对抗这两种细胞系的作用。人SW480结肠癌细胞系证明对紫杉醇有耐药性(剂量达500nM，附录4a)。
可是，在鼠纤维肉瘤细胞系中，紫杉醇和埃坡霉素B单独使用以及与电离放射组合使用以相当的程度降低了增殖活性(较低的纳摩尔范围，附录4b)。
我们还在产克隆细胞存活试验中比较了用埃坡霉素B/IR和紫杉醇/IR进行的组合处理的作用。两种细胞系均表现出对分别用埃坡霉素B/IR和紫杉醇/IR组合处理的至少是累加的作用，但是在紫杉醇耐药细胞系SW480中，只有在紫杉醇的浓度非常高时才如此(附录埃坡霉素B-5)。
对紫杉醇的耐药性通常归因于肿瘤细胞中MDR-P-糖蛋白-过表达，所述过表达可以被MDR-逆转剂维拉帕米所抑制。因此，在用维拉帕米预处理的SW480细胞中以不同处理模式进行增殖实验。低剂量的维拉帕米(5wg/ml，于紫杉醇处理前30分钟加入)使SW480细胞对单独的低剂量紫杉醇或者对电离放射组合处理模式的敏感性恢复，表明在这种细胞系中MDR-P-糖蛋白-过表达引起紫杉醇耐药作用(附录埃坡霉素B-6)。在该浓度下维拉帕米本身没有抗增殖作用，仅仅是轻微影响对埃坡霉素B的响应(未给出)。目前我们正在通过免疫印迹法探究MDR-P-糖蛋白直接存在于SW480细胞中的水平。
总而言之，这些结果表明埃坡霉素B和紫杉醇在与电离放射组合时具有至少是累加的抗增殖及杀产克隆细胞的作用。在单独以及与电离放射组合用于对紫杉醇耐药的人结肠腺癌细胞系SW480时，埃坡霉素B保持全部活性。因此，对于采用IR和微管抑制剂的组合治疗方案而言，埃坡霉素在对紫杉醇耐药的肿瘤(例如结肠直肠肿瘤)中可能是一种有希望的供选药物。在实验上，下一步将包括采用同种异体移植物/异种移植物小鼠肿瘤模型在体内测试埃坡霉素B/IR。
权利要求
1.在需要该治疗的受试者中治疗增殖性疾病的方法，该方法包括施用包含下述的组合(a)游离或可药用盐形式的式I埃坡霉素衍生物， 在该化合物中，A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基，且Z为O或键；(b)电离放射。
2.根据权利要求1的方法，该方法包括施用包含下述的组合(a)式I化合物，其中A表示O，R为低级烷基且Z为O，和(b)电离放射。
3.根据权利要求1或2的方法，该方法包括施用包含下述的组合(a)埃坡霉素B，和(b)电离放射。
4.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述的受试者是患有增殖性疾病的恒温动物，该方法包括对所述动物以联合治疗有效对抗增殖性疾病的方式施用权利要求1、2或3中任一项的组合。
5.根据权利要求1至4中任一项的方法，该方法包括施用用于与电离放射组合的联合治疗有效对抗增殖性疾病的量的式I化合物以及至少一种可药用载体。
6.根据权利要求1、2、3、4或5的方法，用于在需要该治疗的受试者中延缓增殖性疾病的发展。
7.根据权利要求1、2、3、4或5的方法，用于治疗增殖性疾病。
8.权利要求1、2或3的式I化合物在制备用于与电离放射组合来延缓增殖性疾病的发展和治疗增殖性疾病的药物中的用途。
10.根据权利要求6、7或8的方法，其中增殖性疾病是实体瘤。
11.包装，包含式I化合物(或其可药用的盐或前药酯)以及用于与电离放射组合使用来治疗增殖性疾病的说明，其中A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基且Z为O或键。
全文摘要
本发明涉及用于与电离放射组合来延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤疾病的式(I)有机化合物，特别是药物组合物。
文档编号A61P35/00GK1758908SQ200480006581
公开日2006年4月12日 申请日期2004年3月12日 优先权日2003年3月14日
发明者M·普鲁施奇 申请人:诺瓦提斯公司
技术领域：
本发明涉及与电离放射组合施用来延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤疾病的有机化合物，特别是药物组合物。
我们现已发现某些埃坡霉素衍生物当与电离放射组合来延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤疾病时是有效的。
因此，本发明提供了在需要该治疗的受试者中延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤疾病的方法，该方法包括给受试者施用有效量的游离或可药用盐形式的式I埃坡霉素衍生物以及至少一种可药用载体， 在该化合物中，A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基，且Z为O或键；与电离放射的组合。
其中A表示O、R为氢且Z为O的式I化合物称为埃坡霉素A；其中A表示O、R为甲基且Z为O的式I化合物称为埃坡霉素B；其中A表示O、R为氢且Z为键的式I化合物称为埃坡霉素C；其中A表示O、R为甲基且Z为键的式I化合物称为埃坡霉素D。
本发明还提供了式I化合物(或其可药用的盐或前药酯)在制备用于与电离放射组合来治疗增殖性疾病的药物中的用途。
另一方面，本发明提供了式I埃坡霉素衍生物(或其可药用的盐或前药酯)在与电离放射组合来治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤中的用途。
另一方面，本发明还提供了式I埃坡霉素衍生物(或其可药用的盐或前药酯)，作为活性成分用于与电离放射组合来治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤。
另一方面，本发明还提供了如下定义的包装该包装包含式I埃坡霉素衍生物(或其可药用的盐或前药酯)以及用于与电离放射组合来治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤的说明。
在本说明书的上文和其它地方，下列术语具有以下含义在上下文中提及的分别与有机基团或化合物有关的术语“低级”定义含有最多且包括7个碳原子、优选最多且包括4个碳原子的支链或直链化合物或基团。
低级烷基为支链或直链基团，含有1至7个碳原子，优选含有1至4个碳原子。低级烷基例如表示甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基或异丁基。
如本文所用的术语“延缓发展”指给处于所治疗增殖性疾病早期的患者施用该组合。
如本文所用的术语“实体瘤疾病”包括但不限于神经胶质瘤、甲状腺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠癌及一般的胃肠道癌、宫颈癌、肺癌且特别是小细胞肺癌和非小细胞肺癌、头颈部癌、膀胱癌、前列腺癌或Kaposi肉瘤。在本发明的一个优选实施方案中，所治疗的肿瘤疾病为神经胶质瘤、前列腺癌或甲状腺癌。该组合不仅可抑制实体瘤的生长，而且还可抑制液体肿瘤的生长。此外，肿瘤体积也会减小，这取决于肿瘤的类型和所用的具体组合。本文所公开的组合还适于防止肿瘤的转移性扩散及微小转移灶的生长或发展。
组合指施用一定量的式I埃坡霉素衍生物与施用一定量的电离放射的组合，以产生协同作用，如果施用式I埃坡霉素衍生物而没有分别、同时或依次施用电离放射，则不会获得这种作用。其中，电离放射的施用可以是连续的、依次的或散在的。或者，如果施用电离放射而没有分别、同时或依次施用式I埃坡霉素衍生物，则也不会获得这种作用，其中，施用可以是连续的、依次的或散在的。
组合优选指施用一定量的式I埃坡霉素衍生物与施用一定量的电离放射的组合，以产生协同的抗增殖作用和/或杀产克隆细胞(clonogenic cell)作用，如果如下施用则不会获得这些作用a)施用式I埃坡霉素衍生物而没有预先、同时或随后施用电离放射。其中，施用可以是连续的、依次的或散在的；b)施用电离放射而没有预先、同时或随后施用式I埃坡霉素衍生物。其中，施用可以是连续的、依次的或散在的。
在上下文中提到的术语“电离放射”指作为电磁射线(例如X-射线和γ射线)或粒子(例如α和β粒子)而发生的电离放射。电离放射应用于但不限于放射疗法，它是本领域公知的(Hellman，Principle of Radiation Therapy，Cancer，in Principles and Practice of Oncology，248-275(Devita等人，第4版，V1，1993))。
尤其在专利和专利申请WO 93/10121、US 6,194,181、WO 98/25929、WO 98/08849、WO 99/43653、WO 98/22461及WO 00/31247中，特别是在其各自的化合物权利要求和实施例的终产物中，概括地和具体地公开了如下定义的式I埃坡霉素衍生物以及制备该埃坡霉素衍生物的方法其中A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基且Z为O或键；这些文献的终产物、药物制剂和权利要求的主题在此处被引入本申请作为公开内容的参考。同样还包括在所述文献中公开的相应的立体异构体和相应的晶体变体(crystal modifications)，如溶剂化物和多晶型物。
埃坡霉素B向相应的内酰胺的转化在WO 99/02514的流程图21(第31和32页)及实施例3(第48-50页)中公开。不同于埃坡霉素B的式I化合物向相应的内酰胺的转化也可类似地完成。其中RN为低级烷基的相应的式I埃坡霉素衍生物可通过本领域已知的方法如还原烷基化反应、以其中RN为氢的埃坡霉素衍生物为原料来制备。
式I埃坡霉素衍生物，尤其是埃坡霉素B，可作为在WO 99/39694中公开的药物组合物的一部分来施用。
包含下述的组合在下文中称为本发明的组合(a)游离或可药用盐形式的式I埃坡霉素衍生物，在该化合物中，A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基，且Z为O或键，以及任选的至少一种可药用载体；和(b)电离放射。
增殖性疾病如实体瘤疾病的性质是多因子的。在某些情况下，不同作用机制的药物可以组合使用。但是，仅考虑将具有不同作用方式的药物任意组合并不一定产生具有有益作用的组合。
在本发明的组合中，式I埃坡霉素衍生物及其可药用的盐及前药衍生物优选以药物制剂的形式使用，该药物制剂含有相关治疗有效量的活性成分，任选联合或混合有适于施用的无机或有机、固态或液态的可药用载体。
在一个优选的实施方案中，每个患者接受一定剂量的电离放射，同时经静脉注射施用式I埃坡霉素衍生物，每周一次，共计三周，然后停药一周。每四周的间隔被认为是一个周期。将每个周期的第一天规定为式I埃坡霉素衍生物和电离放射的施用日。在这些研究中可以测定治疗效果，例如，在18或24周后每6周通过肿瘤放射学评价来测定。
在可选的实施方案中，电离放射作为预治疗使用，即，在用本发明的组合开始治疗之前使用；对患者单独施用一定时期的电离放射，例如，每天单独施用电离放射，共计两天或三天，或者数周。
在另一个优选的实施方案中，经静脉注射施用式I埃坡霉素衍生物，每周一次，共计三周，然后停药一周。每四周的间隔被认为是一个周期。在这些研究中可以测定治疗效果，例如，在18或24周后每6周通过肿瘤放射学评价来测定。
埃坡霉素衍生物的药物组合物可以例如是肠内施用组合物(例如口服、直肠、气雾剂吸入或鼻腔施用)、胃肠道外施用组合物(例如静脉内或皮下施用)，或者透皮施用组合物(例如被动或离子电渗)或局部施用组合物。
优选埃坡霉素衍生物的药物组合物适应于口服施用。
本发明的药物组合物可按本身已知的方法来制备，它们是适于经肠内(例如口服或直肠)和胃肠道外施用于哺乳动物(恒温动物)、包括人的那些，它们仅包含治疗有效量的至少一种具有药理活性的组合组分，或者还包含一种或多种可药用载体，尤其是适于经肠内或胃肠道外应用的载体。
新的药物组合物含有例如约10％至约100％、优选约20％至约60％的活性成分。用于组合疗法的经肠内或胃肠道外施用的药物制剂例如是单位剂型的那些，例如糖包衣片剂、片剂、胶囊剂或栓剂，此外还有安瓿剂。若无另外说明，这些药物制剂按本身已知的方法来制备，例如通过常规的混合、制粒、包糖衣、溶解或冷冻干燥方法来制备，可以理解包含在各剂型的独立剂量中的组合组分的单位含量不一定构成其有效量，因为可通过施用多个剂量单位来达到必需有效量。
在口服剂型组合物的制备中，可以使用任何常用的药物介质，例如，水、乙二醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂；或者当为口服固体制剂如散剂、胶囊剂和片剂时，可以使用载体，例如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂或崩解剂等，固体口服制剂优先于液体制剂。由于片剂和胶囊剂易于施用，因此它们代表了最有利的口服剂量单位形式，在这种情形下显然使用固体药物载体。
具体而言，本发明的组合中治疗有效量的各组合组分可同时或以任何顺序依次施用，并且各组分可分别或作为固定组合施用。例如，本发明的延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病的方法包括同时或以任何顺序依次施用联合治疗有效量的、优选协同有效量的(i)第一组合组分和(ii)第二组合组分，例如以与本文所述的量相一致的日剂量或周剂量施用。本发明的组合的各组合组分可以在治疗期间的不同时间分别施用或者同时施用。此外，术语施用还涵盖使用在体内可转化为组合组分本身的式I埃坡霉素衍生物的前药。因此，本发明应当理解为涵盖所有的同时或交替治疗的方案，并且术语“施用”也相应地被解释。
电离放射和式I埃坡霉素衍生物相关联的剂量优选为产生协同作用的比例的剂量。
如果恒温动物是人类，则对成年患者而言，式I化合物的剂量优选为约0.25至75、优选0.5至50、例如2.5mg/m2，每周一次，共计二至四周，例如三周，然后停药6至8天。在本发明的一个实施方案中，埃坡霉素B按照US6,302,838中所述的治疗方案进行施用，该专利的公开内容引入本文作为参考。
式I化合物的具体施用模式和剂量可以由所参与的医师考虑患者的具体情形、尤其是年龄、体重、生活方式及活动水平等来选择。
式I埃坡霉素衍生物的剂量可取决于多种因素，例如活性成分的效能及作用持续时间、施用模式、电离放射的效能及作用持续时间，和/或待治疗受试者的性别、年龄、体重及个体情形。
电离放射的剂量可取决于多种因素，例如电离放射的效能及作用持续时间、施用模式、施用部位、式I埃坡霉素衍生物的效能及作用持续时间，和/或待治疗受试者的性别、年龄、体重及个体情形。电离放射的剂量通常以放射吸收剂量、时间及分数来定义，必须由所参与的医师谨慎地加以确定。
式I化合物中的成盐基团是具有碱性或酸性的基团或根。具有至少一个碱性基团或至少一个碱根如游离氨基、吡嗪基或吡啶基的化合物可以例如与无机酸或适宜的有机羧酸或磺酸形成酸加成盐，所述的无机酸例如是盐酸、硫酸或磷酸，所述的有机羧酸或磺酸例如是脂肪族单-或二-羧酸，例如三氟乙酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、羟基马来酸、苹果酸、酒石酸、枸橼酸或草酸，或者是氨基酸如精氨酸或赖氨酸，或者是芳香族羧酸，例如苯甲酸、2-苯氧基-苯甲酸、2-乙酰氧基-苯甲酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、芳香族-脂肪族羧酸如扁桃酸或肉桂酸、杂芳香族羧酸如烟酸或异烟酸、脂肪族磺酸如甲磺酸、乙磺酸或2-羟基乙磺酸，或者芳香族磺酸如苯磺酸、对甲苯磺酸或萘-2-磺酸。当存在数个碱性基团时，可形成单-或多元酸加成盐。
为分离或纯化的目的，以及对于还可用作中间体的化合物而言，还可能使用不可药用的盐。
然而只有可药用的无毒盐可用于治疗目的，因此优选可药用的无毒盐。
在式I化合物中，优选A表示O，R为低级烷基，例如乙基或最优选甲基，Z优选为O。
在本发明的一个优选实施方案中，组合包含埃坡霉素B和电离放射。
而且，本发明还涉及治疗患有增殖性疾病的恒温动物的方法，该方法包括对所述动物以联合治疗有效对抗增殖性疾病的方式施用本发明的组合，其中组合组分还可以以它们的可药用盐的形式存在。
此外，本发明还涉及本发明的组合在延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病中以及在制备用于延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病的药物中的用途。
在本发明的一个实施方案中，止泻剂与本发明的组合共同施用以预防、控制或消除腹泻，所述腹泻有时与施用埃坡霉素、尤其是埃坡霉素B有关。因此，本发明还涉及预防或控制与施用式I埃坡霉素衍生物有关的腹泻的方法，该方法包括对接受本发明的组合进行治疗的患者施用有效量的止泻剂。止泻剂及施用方案对本领域技术人员而言是已知的。适用于本发明的方法和组合物的止泻剂包括但不限于天然阿片样物质，例如阿片酊、鸦片樟脑酊及可待因，合成阿片样物质，例如地芬诺酯、地芬诺新及洛哌丁胺，碱式水杨酸铋，奥曲肽(例如可以以SANDOSTATINTM获得)，胃动素拮抗剂以及传统的止泻药，例如高岭土、果胶、小蘖碱及毒蕈碱剂。
下列实施例意欲解释本发明，而不意欲限制本发明。
实施例1肿瘤细胞的增殖用MTT-样alamarBlue比色测定法进行评价，该方法基于代谢产物活性的检测。为了测定产克隆细胞存活(clonogenic survival)，用指定的处理将所铺的单细胞(singular cells)的数量调节至约100个集落/皿。细胞与不同药物接触24小时后进行照射，然后生长8至10天，之后在甲醇/乙酸(75％/25％)中固定并用结晶紫染色。仅计数含有多于50个细胞/集落的集落。测定未处理细胞的平板效率(PE)并按以下公式计算PE(％)＝(集落计数/所铺细胞数)×100。接受指定处理的存活分数(SF)按以下公式测定SF＝(集落计数)/(所铺细胞数×PE/100)。产克隆试验至少进行两次，没有误差线归因于最小标准偏差。在室温下，在组织培养皿(100×100mm)或96-孔板中采用Pantak Therapax 3,300kV X-射线单位0.7Gy/分钟照射细胞培养物。剂量测定用Vigilant-剂量仪来控制。
进行最初的增殖试验以测定与电离放射治疗组合应用的埃坡霉素B的剂量范围。在埃坡霉素B的低于纳摩尔及较低的纳摩尔范围内，清楚地观察到超过72小时的对抗两种细胞系(E1A/ras转化的p53-/-MEFs；人结肠腺癌细胞系SW480)的抗增殖剂量响应。与遗传确定的致癌基因转化的MEFs相比，人SW480细胞表现出对埃坡霉素B的敏感性提高(附录埃坡霉素B-1)。用埃坡霉素B和电离放射(5Gy)组合处理显示至少是累加的抗这两种细胞系的抗增殖作用(附录埃坡霉素B-2，以埃坡霉素B的代表性浓度给出)。对于该组合处理模式，细胞在照射前用埃坡霉素B预处理24小时。
基于这些结果，产克隆细胞存活试验用埃坡霉素B与电离放射的组合来进行。产克隆试验基于来自单细胞的致密克隆的生长晕，所述单细胞以较低密度铺在培养皿中。定量并比较在不同处理条件下的克隆生长晕。
附录埃坡霉素B-3概述了用SW480和E1A/ras转化的MEFs进行的产克隆细胞存活，所述细胞系经电离放射和埃坡霉素B单独及组合处理。与增殖试验相似，SW480细胞对埃坡霉素B的敏感性比MEFs更强，组合处理再次表明在两种细胞系中有至少是累加的作用(对SW480和MEFs而言，埃坡霉素B的剂量范围是不同的，如各图中所举例说明的)。基于这些结果，组合处理的效果应当在体内用肿瘤同种异体移植物/异种移植物模型进行检验。
基于埃坡霉素B同样在(某些)耐紫杉醇的肿瘤细胞系中的令人感兴趣的抗增殖性质，我们比较了埃坡霉素B和紫杉醇与电离放射组合来对抗这两种细胞系的作用。人SW480结肠癌细胞系证明对紫杉醇有耐药性(剂量达500nM，附录4a)。
可是，在鼠纤维肉瘤细胞系中，紫杉醇和埃坡霉素B单独使用以及与电离放射组合使用以相当的程度降低了增殖活性(较低的纳摩尔范围，附录4b)。
我们还在产克隆细胞存活试验中比较了用埃坡霉素B/IR和紫杉醇/IR进行的组合处理的作用。两种细胞系均表现出对分别用埃坡霉素B/IR和紫杉醇/IR组合处理的至少是累加的作用，但是在紫杉醇耐药细胞系SW480中，只有在紫杉醇的浓度非常高时才如此(附录埃坡霉素B-5)。
对紫杉醇的耐药性通常归因于肿瘤细胞中MDR-P-糖蛋白-过表达，所述过表达可以被MDR-逆转剂维拉帕米所抑制。因此，在用维拉帕米预处理的SW480细胞中以不同处理模式进行增殖实验。低剂量的维拉帕米(5wg/ml，于紫杉醇处理前30分钟加入)使SW480细胞对单独的低剂量紫杉醇或者对电离放射组合处理模式的敏感性恢复，表明在这种细胞系中MDR-P-糖蛋白-过表达引起紫杉醇耐药作用(附录埃坡霉素B-6)。在该浓度下维拉帕米本身没有抗增殖作用，仅仅是轻微影响对埃坡霉素B的响应(未给出)。目前我们正在通过免疫印迹法探究MDR-P-糖蛋白直接存在于SW480细胞中的水平。
总而言之，这些结果表明埃坡霉素B和紫杉醇在与电离放射组合时具有至少是累加的抗增殖及杀产克隆细胞的作用。在单独以及与电离放射组合用于对紫杉醇耐药的人结肠腺癌细胞系SW480时，埃坡霉素B保持全部活性。因此，对于采用IR和微管抑制剂的组合治疗方案而言，埃坡霉素在对紫杉醇耐药的肿瘤(例如结肠直肠肿瘤)中可能是一种有希望的供选药物。在实验上，下一步将包括采用同种异体移植物/异种移植物小鼠肿瘤模型在体内测试埃坡霉素B/IR。
权利要求
1.在需要该治疗的受试者中治疗增殖性疾病的方法，该方法包括施用包含下述的组合(a)游离或可药用盐形式的式I埃坡霉素衍生物， 在该化合物中，A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基，且Z为O或键；(b)电离放射。
2.根据权利要求1的方法，该方法包括施用包含下述的组合(a)式I化合物，其中A表示O，R为低级烷基且Z为O，和(b)电离放射。
3.根据权利要求1或2的方法，该方法包括施用包含下述的组合(a)埃坡霉素B，和(b)电离放射。
4.根据权利要求1、2或3的方法，其中所述的受试者是患有增殖性疾病的恒温动物，该方法包括对所述动物以联合治疗有效对抗增殖性疾病的方式施用权利要求1、2或3中任一项的组合。
5.根据权利要求1至4中任一项的方法，该方法包括施用用于与电离放射组合的联合治疗有效对抗增殖性疾病的量的式I化合物以及至少一种可药用载体。
6.根据权利要求1、2、3、4或5的方法，用于在需要该治疗的受试者中延缓增殖性疾病的发展。
7.根据权利要求1、2、3、4或5的方法，用于治疗增殖性疾病。
8.权利要求1、2或3的式I化合物在制备用于与电离放射组合来延缓增殖性疾病的发展和治疗增殖性疾病的药物中的用途。
10.根据权利要求6、7或8的方法，其中增殖性疾病是实体瘤。
11.包装，包含式I化合物(或其可药用的盐或前药酯)以及用于与电离放射组合使用来治疗增殖性疾病的说明，其中A表示O或NRN，其中RN为氢或低级烷基，R为氢或低级烷基且Z为O或键。
全文摘要
本发明涉及用于与电离放射组合来延缓增殖性疾病的发展或治疗增殖性疾病、尤其是实体瘤疾病的式(I)有机化合物，特别是药物组合物。
文档编号A61P35/00GK1758908SQ200480006581
公开日2006年4月12日 申请日期2004年3月12日 优先权日2003年3月14日
发明者M·普鲁施奇 申请人:诺瓦提斯公司
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