一种预充式重组人干扰素注射剂的制作方法

专利名称：：一种预充式重组人干扰素注射剂的制作方法
技术领域：
：本发明属于干扰素制剂领域，具体涉及一种稳定的重组人干扰素注射剂。
背景技术：
：重组人干扰素具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抑制细胞增殖以及提高免疫功能等作用，是治疗急慢性病毒性肝炎的首选治疗药物。目前重组人干扰素的剂型中应用最广泛的为冻干粉针剂和小容量注射剂，其中注射剂使用起来较方便，但要求其处方能保护干扰素分子在水溶液状态下长期稳定，通常选用人血白蛋白作为干扰素的稳定剂。但是人血白蛋白有其自身的缺陷，作为血液制品，患者使用时有感染血液疾病的危险，而且出口门槛高。目前，除了人血白蛋白外，羟乙基淀粉钠、氨基酸、琥珀酰明胶、明胶和二糖等也被用来作为干扰素液体剂型的稳定剂。中国专利CN1222315C公开了一种由干扰素和氨基酸、pH4.0_7.0的缓冲体系制成的稳定的干扰素制剂，氨基酸可以是选自精氨酸或甘氨酸或精氨酸的盐酸盐，缓冲体系可以是磷酸盐缓冲体系或乙酸-乙酸盐缓冲体系，优选为乙酸-乙酸盐缓冲体系。但由于玻璃容器的表面吸附作用，制成的干扰素制剂因装入表面涂有化学惰性材料如经硅氧烷处理的注射器中，在玻璃小瓶中，会有较多的蛋白聚集。中国专利CN1993139A公开了一种稳定的干扰素液体制剂，包含干扰素、缓冲液、氨基酸和抗氧化剂，干扰素为干扰素e-la，氨基酸为可以是精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸或其盐。在该专利中，处方还可进一步包括表面活性剂，表面活性剂可以是选自吐温、PluronicF_77、PluronicF_87、PluronicF_88、PluronicF-68，表面活性剂的用量为0.01mg/mL-10mg/mL，优选用量为0.5mg/mL，表面活性剂优选为PluronicF68。
发明内容为了解决干扰素注射剂装在玻璃小瓶中产生蛋白聚集而影响干扰素效价的问题，而又尽量减少辅料的种类及用量，本发明提供了一种由干扰素、缓冲体系、氨基酸和吐温-80制成的干扰素注射剂，其中吐温-80的量小于0.lmg/mL。本发明研究人员发现，在干扰素注射剂中加入少量的吐温-80，可以很好地起到防止蛋白在玻璃小瓶中因表面吸附而产生的蛋白聚集现象。本发明的具体处方组成为100-1000万IU/mL的干扰素；pH为4.0-7.5范围内的缓冲体系;5-45mg/mL的盐酸精氨酸或盐酸赖氨酸；含量为大于等于0.005mg/mL而小于0.lmg/mL的吐温-80;注射用水。本发明中，干扰素为选自重组人干扰素alb、a2a、a2b、重组人干扰素Y、重组人干扰素A或重组人干扰素13中的任意一种或多种，优选为重组人干扰素a2b。本发明中，所用的缓冲体系，可以是pH为7.0-7.5的磷酸盐缓冲体系，也可以是pH为4.5-5.5的乙酸-乙酸盐缓冲体系，还可以是诸如柠檬酸盐缓冲体系、琥珀酸盐缓冲体系、酒石酸盐缓冲体系、乳酸盐缓冲体系等，本发明中优选为pH为4.5-5.5的乙酸-乙酸盐缓冲体系(乙酸_三水合乙酸钠)。本发明中，吐温-80的含量优选为0.01-0.08mg/mL，优选为0.05mg/mL。本发明中，重组人干扰组注射剂可以是制成注射剂后直接装入玻璃小瓶中，玻璃瓶预装干扰素注射剂的量为0.l-lmL，优选为0.3mL或0.5mL;本发明干扰素注射剂也可制成成品后直接装入预充式注射器中，制成预充式干扰素注射剂，预充式干扰素注射器中干扰素注射液的预装量为0.1-1.OmL，优选为0.3mL或0.5mL。本发明中，预装入玻璃小瓶或预充式注射器中的干扰素注射液，其干扰素的量为IOOO万IU/mL。本发明中，氨基酸优选为侧链带电荷的氨基酸，如可以是精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸或谷氨酸中的任意一种或两种，这些氨基酸可以是其游离形式的氨基酸，也可以是其盐的形式，如盐酸盐。本发明中，氨基酸更优选为精氨酸或赖氨酸或其盐酸盐。当然，除了侧链带电荷的氨基酸，还可以是其它形式的氨基酸，如甘氨酸。本发明中，注射制剂氨基酸的量为5_45mg/mL。本发明中，加入的吐温-80的量为大于等于0.005mg/mL而小于0.lmg/mL，优选为0.01-0.08mg/mL，更优选为0.05mg/mL。本发明中，装入玻璃小瓶或预充式注射器中的注射液体的量为0.1-1.OmL，优选为0.3mL或0.5mL，干扰素为1000万IU/mL，本发明中，优选的为将注射液装入预充式注射器中，制成预充式重组人干扰素注射剂，更便于给药，优选的给药方式为皮下注射给药。本发明制成的干扰素注射剂，即可装入玻璃小瓶中，也可装入预充式注射器中。本发明所指的玻璃小瓶，是指规格为lmL或1.5mL的玻璃小瓶。为了使新处方既可以从根本上解决干扰素注射制剂在玻璃小瓶中储存而引起的蛋白聚集，以保证干扰素制剂的稳定性，又尽量少地减少其它赋形剂的加入，申请人进行了大量的处方筛选及投料量实验，最终确定了盐酸精氨酸或盐酸赖氨酸与吐温80联合应用的用量范围。所得试验如下表l处方筛选表处方名称处方l处方2处方3处方4重组人干扰素a2b(IU)2.5X1092.5X1092.5X1092.5X109冰醋酸125mg125mg125rag125mg4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>按照表1处方，依照实施1的方式配制各处方，对四个处方进行4(TC加速试验，检定项目为生物学活性和可见异物，每隔5天取样检测。表2处方筛选生物学活性测定结果表(注射液装入玻璃小瓶中)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>从表中可以看出，处方l(吐温SO)生物活性下降明显，处方2在4(TC放置30天后，生物学活性已降为约初始值的74.6%，而处方3(吐温80+氨基酸组)的结果与处方4的走势十分接近，在4(TC存放30天的条件下，生物学活性分别下降了约17.9%(处方3)和16.6%(处方4)，其生物活性分别为初始值的82.1%(处方3)和83.4%(处方4)，从结果可以看出，本发明加入吐温-80后，在玻璃小瓶中，4(TC加速实验30天后，干扰素活性要强于处方2，与多加入抗氧剂的处方4活性相当(并且，处方3中表面活性剂的用量也要明显较处方4的用量少)。对四个处方，将制备得到的注射制剂装入预充式注射器中，在4(TC条件下存放60天后检测其效价。表3四个处方注射剂装入预充式注射器中60天后活性测定结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>在预充式注射器中，处方1蛋白活性下降明显，处方2在30天后蛋白活性为起始活性的80.7%，处方3约为起始活性的83.6%，处方4约为起始活性的84.7%，处方3及4的活性也要强于处方2，处方3和4活性下降量相差不明显；60天后，处方2的蛋白活性为起始活性的72.4%，处方3的活性为起始活性的75.2%，处方4的活性为起始活性的起始活性的76.0%，处方3蛋白活性的下降要低于处方2，与处方4相当。表4玻璃小瓶装的干扰素注射剂可见异物检查结果表<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>装入玻璃小瓶中的干扰素注射剂，在4(TC条件下加速实验30天后，处方1的可见异物不合格数量较多，处方3和处方4不合格数量相当，但都要少于处方2的总不合格数具体实施例以下从具体实施方式来进一步说明制备本发明重组人干扰素注射剂的实施方式，需要说明的是，所列举的具体实施方式中，各原料及原料药的给定用量并不是要限制本发明原料及原料药的量，而仅仅是一种非限制性说明，本领域的技术人员，可以根据本发明允许的范围内，作出原料及原料药的量的改变。实施例1处方重组人干扰素a2b:2.5X109(IU)，三水合乙酸钠395mg，冰醋酸125mg，盐酸精氨酸7900mg，吐温-8012.5mg，注射用水加至250mL;配置方法(1)称取处方量原料，盐酸精氨酸、三水合乙酸钠、冰醋酸以无菌无热源注射用水溶解；(2)称取吐温-80，加入到上述溶解好的原料液中；(3)量取处方量的重组人干扰素a2b加入到步骤(2)所得溶液中，混匀；(4)注射用水定容至250mL，过0.22ym孔径的微孔滤膜，保存于8士2t:冰箱中，取样做无菌和热源检查；(5)将步骤(4)中检验合格的注射液，分装于规格为lmL的西林瓶中，每瓶装0.5mL，即得。实施例2处方重组人干扰素a2b:2.5X109(IU)，三水合乙酸钠395mg，冰醋酸125mg，盐酸精氨酸7900mg，吐温-8012.5mg，注射用水加至250mL;配置方法(1)称取处方量原料，盐酸精氨酸、三水合乙酸钠、冰醋酸以无菌无热源注射用水溶解；(2)称取吐温-80，加入到上述溶解好的原料液中；(3)量取处方量的重组人干扰素a2b加入到步骤(2)所得溶液中，混匀；(4)注射用水定容至250mL，过0.22ym孔径的微孔滤膜，保存于8士2t:冰箱中，取样做无菌和热源检查；(5)将步骤(4)中检验合格的注射液，分装于预充式注射器中，每个注射器装入0.5mL，即得预充式重组人干扰素a2b注射剂。实施例3处方重组人干扰素a2b:1.5X10、IU)，三水合乙酸钠237mg，冰醋酸75mg，盐酸赖氨酸4740mg，吐温-8012mg，注射用水加至150mL;配置方法(1)称取处方量原料，盐酸赖氨酸、三水合乙酸钠、冰醋酸以无菌无热源注射用水溶解；(2)称取吐温-80，加入到上述溶解好的原料液中；(3)量取处方量的重组人干扰素a2b加入到步骤(2)所得溶液中，混匀；(4)注射用水定容至150mL，过0.22ym孔径的微孔滤膜，保存于8士2t:冰箱中，取样做无菌和热源检查；(5)将步骤(4)中检验合格的注射液，分装于规格为lmL的西林瓶中，每瓶装0.3mL，即得。实施例4处方重组人干扰素a2b:1.5X10、IU)，三水合乙酸钠237mg，冰醋酸75mg，盐酸赖氨酸4740mg，吐温-804.5mg，注射用水加至150mL;配置方法(1)称取处方量原料，盐酸赖氨酸、三水合乙酸钠、冰醋酸以无菌无热源注射用水溶解；(2)称取吐温-80，加入到上述溶解好的原料液中；(3)量取处方量的重组人干扰素a2b加入到步骤(2)所得溶液中，混匀；(4)注射用水定容至150mL，过0.22ym孔径的微孔滤膜，保存于8士2t:冰箱中，取样做无菌和热源检查；(5)将步骤(4)中检验合格的注射液，分装于预充式注射器中，每支注射器装量为0.3ml，即得预充式重组人干扰素a2b注射剂。实施例5处方重组人干扰素a2a:1.5X10、IU)，三水合乙酸钠237mg，冰醋酸75mg，盐酸赖氨酸3000mg，吐温-807.3mg，注射用水加至150mL;配置方法同实施4实施例6处方重组人干扰素a2b:4.5X108(IU)，三水合乙酸钠237mg，冰醋酸75mg，盐酸精氨酸6000mg，吐温-801.5mg，注射用水加至150mL;配置方法同实施例4实施例7处方重组人干扰素alb:1.5X109(IU)，磷酸二氢钠90mg，磷酸氢二钠685mg，盐酸赖氨酸2500mg，吐温-8015mg，注射用水加至250mL;配置工艺同实施例l。权利要求一种重组人干扰素注射剂，其特征是包括如下组分100-1000万IU/mL的干扰素；pH为4.0-7.5范围内的缓冲体系；5-45mg/mL的盐酸精氨酸或盐酸赖氨酸；含量为大于等于0.005mg/mL而小于0.1mg/mL的吐温-80；注射用水。2.根据权利要求1所述的重组人干扰素注射剂，其特征是所述的干扰素为选自重组人干扰素alb、a2a、a2b、重组人干扰素Y、重组干扰素A或重组人干扰素P中的任意一种或多种。3.根据权利要求2所述的重组人干扰素注射剂，其特征是所述的干扰素为重组人干扰素a2b。4.根据权利要求l所述的重组人干扰素注射剂，其特征是所述的缓冲体系为pH为7.0-7.5的磷酸盐缓冲体系或pH为4.5-5.5的乙酸-乙酸盐缓冲体系。5.根据权利要求4所述的重组人干扰素注射剂，其特征是所述的缓冲体系为pH为4.5-5.5的乙酸-乙酸盐缓冲体系。6.根据权利要求1所述的重组人干扰素注射剂，其特征是所述的吐温-80的含量为0.01-0.08mg/mL。7.根据权利要求1-6中任意一权利要求所述的重组人干扰素注射剂，其特征是所述的注射剂为预充式重组人干扰素注射剂或普通的玻璃小瓶注射液。8.根据权利要求7所述的重组人干扰素注射剂，其特征是所述的预充式重组人干扰素注射剂规格为每支0.1-1.Oml，重组人干扰素为1000万IU/ml。9.根据权利要求7所述的重组人干扰素注射剂，其特征是所述的预充式重组人干扰素注射剂规格为每支0.3ml或0.5ml，重组人干扰素为1000万IU/ml。10.根据权利要求8或9所述的重组人干扰素注射剂，其特征是所述的预充式重组人干扰素注射剂的给药途径为皮下注射。全文摘要本发明涉及一种预充式重组人干扰素注射剂，本发明注射剂是由重组人干扰素、盐酸精氨酸或盐酸赖氨酸、pH4.5-5.5的乙酸-乙酸盐缓冲液和吐温-80制成，本发明处方制成的注射剂，即可灌装入玻璃小瓶中以供注射时使用，也可直接装入预充式注射器中，本发明注射剂灌装入玻璃小瓶中，解决了因玻璃小瓶存在的表面吸附作用而引起大量蛋白聚集从而导致干扰素效价大幅下降的问题，长时间保存后干扰素仍保留较高的效价。文档编号A61K47/34GK101780033SQ20091024291公开日2010年7月21日申请日期2009年12月21日优先权日2009年12月21日发明者关晶华,张春丽,张晓溪,袁京云,许晓,陈新玲申请人:北京凯因科技股份有限公司;北京凯因生物技术有限公司