一种小牛血去蛋白提取物组合物注射液及其制备方法

专利名称：：一种小牛血去蛋白提取物组合物注射液及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及医药领域，具体的说，涉及一种小牛血去蛋白提取物组合物注射液及其制备方法。
背景技术：
：小牛血去蛋白提取物注射液为新鲜小牛血或血清经去蛋白、浓縮、超滤或透析等工艺制得的含有无机物及小分子有机物的无菌水溶液，为淡黄色的澄明液体。该注射液可增强组织细胞对氧及葡萄糖摄取与利用，改善细胞缺氧状态。适用于脑缺血、脑痴呆、脑外伤及大脑功能不全等脑细胞代谢障碍性疾病的治疗。目前已公开的制备方法有，譬如专利96120777公开了采幼牛静脉血，分离出血清，用乙醇去蛋白，减压去除乙醇，加入复合蛋白酶水解，离心分离留上清液，将上清液中的乙醇浓縮，除菌，冻干。所得到的产品中，无机离子比例为60%，核苷酸、氨基酸、小分子肽、酮酸等比例含量为40%。专利申请200410013509.6公开了将小牛血或小牛血清，调酸性pH值至3.05.5，再调碱性pH值至8.010.5，调中性后，加热至3080°C，去沉淀，然后用超滤膜超滤，截留分子量为500010000道尔顿，收集滤液即为小牛血或小牛血清去蛋白提取物溶液。所制备的小牛血去蛋白提取物固形物含总氯重量份为0.100.90、游离氨基酸0.010.40，pH值应为3.09.O，分子量为500010000，茚三酮反应为阳性。专利申请200410062657.7公开了采集小牛血液，离心后加水、冻溶，然后再离心，上清液巴氏消毒，用截留分子量5IO万道尔顿的超滤膜超滤，再用截留分子量O.51.5万道尔顿超滤膜超滤，滤液用对一价阳离子截留率达8090%的芳香聚酰胺膜脱盐，再使用对一价阳离子截留率达9499%的芳香聚酰胺膜反渗透浓縮，最后用医用活性碳脱色后即得。所得的小牛血去蛋白提取物呼吸活力为6.30iU02/mgh，剌激指数为5.40。专利申请200410013643.6公开了取小牛血调pH值至碱性，离心，上清液调pH值至7.58，离心，上清液调pH值至6.57.5，于709(TC热处理，离心，608(TC减压浓縮，浓縮液超滤，截留分子量为500010000道尔顿，得小牛血去蛋白提取物溶液，取渗透压调节剂，加水溶解后加活性碳加热，过滤得渗透压调节剂溶液，再将上述小牛血去蛋白提取物溶液和渗透压调节溶液混合，加注射用水搅匀即得。所制备的小牛血去蛋白提取物输液中含重量份数氨基酸20.030.O，总氮12.518.75，渗透压调节剂50100，pH值应为5.58.0。专利申请200510076914.7公开了将小牛血或血清搅拌，加入枸橼酸钠，搅匀后04t:保存130h，撇去表层油膜，收集血浆，血浆过珠状壳聚糖层析柱，收集过柱后的血浆，加入乙醇，搅拌离心，上清液7585t:下回收乙醇，加蛋白酶酶解1038h，向酶解液加0.40.6倍蒸馏水，加热至7585t:，过壳聚糖改性活性碳柱过滤，滤液浓縮后再过活性碳柱，过微孔滤膜，灌装灭菌即得。所得的小牛血去蛋白提取物注射液每毫升含固形物4160mg，其中固形物中5565%重量为无机物，3545%重量为有机活性物质。专利申请200510084246.2公开了将小牛血或血清低温下离心分离，取上清液加入枸橼酸钠搅匀后于04t:冷藏保存130小时，撇去油膜，血清过珠状壳聚糖层析柱，收集过柱血清，加入乙醇，搅拌，静置20min2h后离心，上清液浓縮除乙醇，加蛋白酶酶解1038h，酶解液加入蒸馏水，用活化好的壳聚糖改性活性碳柱过滤，滤液浓縮后微孔滤膜过滤，滤液微孔超滤器截留分子量小于6000道尔顿以下的组分，灌装灭菌后冻干。所制得的注射液每毫升总固形物含量0.0350.055g，游离氨基酸含量0.61.5mg，多肽含量0.43.Omg，注射液pH值为6.08.0。专利申请200610018709.X公开了取无菌新鲜幼牛全血和纯化水混合后升温至5095°C，搅拌保温51000min，冷却至常温，加95%乙醇，搅拌0.510h，澄清124h得提取液，提取液用液膜蒸发器浓縮，浓縮液倒入菲尔特澄清过滤器趁热澄清过滤，滤液加活性碳加热至6095t:保温30min，用0.8um微孔滤膜过滤，滤液用液膜蒸发器再进行浓縮并以5000道尔顿富士滤膜超滤得到小牛血去蛋白提取物。专利申请200610080520.3公开了将幼牛静脉血，分离出血清，用乙醇去蛋白，减压除乙醇，加复合蛋白酶水解，水解后离心，上清液超滤，超滤液先以葡聚糖G-15凝胶层析脱盐，收集280nm处有特异吸收的洗脱部分，再以DEAE-S印hadex-50凝胶层析分离，收集第二个280nm处有特异吸收的洗脱部分，再用微孔膜过滤和紫外线照射进行病毒灭活，得到小牛血清去蛋白提取物。上述方法制备的小牛血去蛋白提取物均存在活性成分含量低，保存时间短的缺陷，有鉴于此，特提出本发明。
发明内容本发明第一发明目的在于提供一种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，本发明所提供的这种注射液中小牛血去蛋白提取物组合物注射液稳定性更高。本发明第二发明目的在于提供一种用于制备上述小牛血去蛋白提取物组合物注射液的方法，所述的方法能够进一步提高小牛血去蛋白提取物中活性成分的含量。为了实现上述发明目的，本发明采取如下技术方案—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，所述的注射液每毫升含有如下物质总固形物160200mg，其中重量份数为氨基酸1020份、多肽2535份、无机盐1525份；木糖醇100150mg;e-聚赖氨酸60100mg。根据前面所述的小牛血去蛋白提取物组合物注射液，所述的注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽30份、无机盐20份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸80mg。—种前面所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液的制备方法，所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备(1)取小牛血加入枸橼酸钠，加水35倍，搅拌下升温至506(TC，保温搅拌4060min，搅拌下迅速降温至-100°C，降温时间为25min，在-100"C保温搅拌24h，离心，取上清液；(2)将上步制得的上清液调节pH值为34，加入上清液重量4%5%的胃蛋白酶酶解，过滤，调节pH值为7.08.5，加入上清液重量1%1.5%的枯草杆菌蛋白酶酶解，过滤得滤液；(3)将上步得到的滤液加入乙醇水溶液搅拌，离心，取上清液；(4)将上清液过活性碳柱，合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇100150mg，e-聚赖氨酸60100mg，优选木糖醇120mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；(5)超滤液分装灌装后紫外灭菌，包装即得。根据前面所述的制备方法，步骤(1)中枸橼酸钠用量为小牛血重量的0.10.2倍，优选0.15倍；所述离心为转速23krpm，时间3040min。根据前面所述的制备方法，步骤(2)加入胃蛋白酶酶解为在556(TC下酶解1020min，优选为在58。C下酶解15min;加入枯草杆菌蛋白酶酶解为在304(TC下酶解1520min，优选为在35。C下酶解17min。根据前面所述的制备方法，步骤(3)所述的乙醇水溶液为滤液重量35倍的80%乙醇水溶液，所述的搅拌为405(TC下搅拌1020分钟。根据前面所述的制备方法，步骤(4)所述的活性碳柱为取所述上清液重量12倍，优选i.5倍的医用活性碳，柱长径比为4:15:1，优选4.5:i。根据前面所述的制备方法，步骤(4)所述的过活性碳柱为将步骤(3)得到的上清液倒入活性碳柱中，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附1020min，优选15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，按照上述步骤反复操作至放入全部上清液，然后用80%乙醇水溶液洗脱，重量用量为上清液重量的2倍，再用70%乙醇水溶液洗脱，重量用量为上清液重量的1倍。根据前面所述的制备方法，步骤(4)中所述的80%乙醇水溶液洗脱为洗脱时间2030min，优选25min;所述的70%乙醇水溶液洗脱为洗脱时间4050min，优选45min。根据前面所述的制备方法，步骤(5)所述的紫外灭菌为在5058t:以波长为230260nm的紫外光照射2030min，优选在54°C以波长为240nm的紫外光照射25min。下面对本发明技术方案详细阐述—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，所述的注射液每毫升含有如下物质总固形物160200mg，其中重量份数为氨基酸1020份、多肽2535份、无机盐1525份；木糖醇100150mg;e-聚赖氨酸60100mg。本发明在所述的小牛血去蛋白提取物组合物注射液中添加了木糖醇，可以用于调节渗透压，使得本发明的小牛血去蛋白提取物注射液可以直接用于注射。更进一步的，申请人还发现，添加了木糖醇的小牛血去蛋白提取物组合物注射液稳定性大大增加，这表明木糖醇对于这种提取物具有特殊的稳定作用。此外，本发明还进一步添加了e-聚赖氨酸以更好的提高其保存时间。当所述的注射液每毫升含有总固形物160200mg，木糖醇100150mg时，尤其可以提高这种注射液的稳定性。当本发明所述的小牛血去蛋白提取物组合物注射液更进一步优选注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，木糖醇120mg时，稳定性达到最佳值。而所述的总固形物中可以优选重量份数为氨基酸15份、多肽30份、无机盐20份。本发明所提供的小牛血去蛋白提取物组合物注射液固形物中氨基酸和多肽的含量大于无机盐含量，可以更好的发挥作用。上述具有更为稳定性的小牛血去蛋白提取物组合物注射液的实现，可以采用现有技术任何方法提取的小牛血去蛋白提取物，譬如可以参考
背景技术：
中所列举的那些制备方法。但是本发明为了进一步提高小牛血去蛋白提取物中活性成分的含量，优选了如下的制备方法—种前面所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液的制备方法，所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备(1)取小牛血加入枸橼酸钠，加水35倍，搅拌下升温至506(TC，保温搅拌4060min，搅拌下迅速降温至-100°C，降温时间为25min，在-100"C保温搅拌24h，离心，取上清液；本发明采取冷冻的方式，可以破坏血液内细胞结构，释放出细胞内的物质，这种方式制备的提取物活性要高于常规方法仅从血清中提取得到的提取物。但是通常的冷冻，降温速度慢，细胞外的水分子缓慢结晶，细胞内物质不能得以全部释放。而本发明采用迅速降温冷冻，可以使得血液细胞内的水分子结晶，从细胞内部更加彻底的破坏细胞膜，释放出细胞内物质，使得提取液中有效成分含量大大增加。其中枸橼酸钠用量可以参考现有技术中类似提取方法时枸橼酸钠的用量，而本发明所采取的优选为小牛血重量的0.10.2倍，更优选0.15倍。所述的离心也可参考现有技术类似提取方法的离心操作，本发明优选采用的是按照转速23krpm离心3040min。(2)将上步制得的上清液调节pH值为34，加入上清液重量4%5%的胃蛋白酶酶解，过滤，调节pH值为7.08.5，加入上清液重量1%1.5%的枯草杆菌蛋白酶酶解，过滤得滤液；本发明采用两种不同的蛋白酶酶解，是在众多的蛋白水解酶中通过大量试验筛选而得到。根据蛋白水解酶水解目标的专一性，本发明首先采用大量的专一性更强的胃蛋白酶水解，然后再采用少量的位点专一性差，而对氨基酸酸碱性更敏感的枯草杆菌蛋白酶水解，可以更进一步优化产品中氨基酸种类，使得这种提取物活性有了更为显著的提高。本发明的酶解温度和时间可以参考现有技术这种蛋白酶的水解操作，而本发明优选采用的是胃蛋白酶酶解为在556(TC下酶解1020min，更优选为在58。C下酶解15min;枯草杆菌蛋白酶酶解为在304(TC下酶解1520min，优选为在35。C下酶解17min。(3)将上步得到的滤液加入乙醇水溶液搅拌，离心，取上清液；本发明所述加入乙醇水溶液搅拌可以参考现有技术中类似的操作，譬如加入95%乙醇O.5倍搅拌5分钟；而本发明优选为加入滤液重量35倍的80%乙醇水溶液，在4050。C下搅拌1020分钟。所述的离心为本领域常用操作，本领域技术人员无需为此付出更多的创造性劳动，而本发明优选采用的离心为以23krpm离心510min。(4)将上清液过活性碳柱，合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇100150mg，e-聚赖氨酸60100mg，优选木糖醇120mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；为了进一步提高产品中有效成分的纯度，去除血液中的其他杂质，本发明尝试了多种柱层析或者其他纯化手段，最后发现使用活性碳柱进行柱层析，不但可以降低其他杂质的含量，而且能够最大程度的避免对于有效成分的吸附。本发明所述的活性碳柱层析可以参考现有技术中类似柱层析的操作，而本发明优选采用的是，所述的活性碳用量为所述上清液重量12倍，更优选1.5倍，优选采用医用活性碳，柱长径比优选为4:i5:1，更优选4.5:i。这种规格的活性碳柱可以进一步提高过柱效率。本发明还可以再进一步优选所述的过活性碳柱为将步骤(3)得到的上清液倒入活性碳柱中，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附1020min，优选15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，按照上述步骤反复操作至放入全部上清液，然后用80%乙醇水溶液洗脱，重量用量为活性碳重量的0.5倍，再用70%乙醇水溶液洗脱，重量用量为活性碳重量的1倍。其中还可以再为优选的是，所述的80%乙醇水溶液洗脱为洗脱时间2030min，更优选25min;所述的70%乙醇水溶液洗脱优选为洗脱时间4050min，更优选45min。所述的微孔滤膜可以参考现有技术中其它小牛血去蛋白提取物制备时所采用的微孔滤膜，本领域技术人员通常知晓使用何种孔径的滤膜能够保留适当分子量的有效成分，并去除大分子量的其它杂质。而本发明优选采用的微孔滤膜截留分子量40007000道尔顿，优选为50006000道尔顿。(5)超滤液分装灌装后紫外灭菌，包装即得。所述的紫外灭菌可以参考任何注射液的紫外灭菌操作，也就是紫外灭菌操作的具体参数不会影响本发明目的的实现。但是本发明优选采用的是在5058°C以波长为230260nm的紫外光照射2030min，更优选在54°C以波长为240nm的紫外光照射25min。经实验检测，本发明所提供的小牛血去蛋白提取物呼吸活力可达到68iU*02/mgh，优选为6.57.5iil02/mgh，更优选为6.87.2yl02/mgh;剌激指数为57.5，优选为5.57，更优选为66.5。本发明的技术方案具有如下优势(1)本发明所提供的小牛血去蛋白提取物组合物注射液具有更高的稳定性，进一步提高了患者的用药安全性。(2)本发明提供的小牛血去蛋白提取物组合物注射液具有更高的活性，进一步提高了产品的有效性。(3)本发明所提供的制备方法简便易行，成本低廉。(4)本发明所提供的制备方法可以更进一步提高产品中有效成分的含量。具体实施例方式以下用实施例对本发明的技术方案作进一步的说明，将有助于对本发明的技术方案的优点，效果有更进一步的了解，实施例不限定本发明的保护范围，本发明的保护范围由权利要求来决定。实施例1—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽30份、无机盐20份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7ill02/mgh，剌激指数为6.3。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水4倍，搅拌下升温至55°C，保温搅拌50min，搅拌下迅速降温至_5°C，降温时间为3min，保温搅拌3h，以2.5krpm离心35min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5%的胃蛋白酶，在58t:下酶解15min，过滤，调节pH值为7.5，加入重量为上清液重量1%的枯草杆菌蛋白酶，在35t:下酶解17min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.5kpm离心7min，取上清液；取上清液重量1.5倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为25min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为45min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54°C以波长为240nm的紫外光照射25min紫外灭菌，包装即得。实施例2—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽30份、无机盐20份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7iU02/mgh，剌激指数为6.3。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水4倍，搅拌下升温至55°C，保温搅拌50min，搅拌下迅速降温至-5°C，降温时间为3min，保温搅拌3h，以2krpm离心35min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5%的胃蛋白酶，在57t:下酶解17min，过滤，调节pH值为8，加入重量为上清液重量1.5%的枯草杆菌蛋白酶，在32t:下酶解17min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2kpm离心7min，取上清液；取上清液重量1.5倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为25min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为42min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54t:以波长为240nm的紫外光照射25min紫外灭菌，包装即得。实施例3—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽30份、无机盐20份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸70mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7ill02/mgh，剌激指数为6.3。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水3倍，搅拌下升温至50°C，保温搅拌55min，搅拌下迅速降温至_5°C，降温时间为3min，保温搅拌3h，以2.5krpm离心35min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5%的胃蛋白酶，在55t:下酶解10min，过滤，调节pH值为7.5，加入重量为上清液重量1.2%的枯草杆菌蛋白酶，在35t:下酶解16min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量3倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.5kpm离心9min，取上清液；取上清液重量1倍的医用活性碳装柱，柱长径比4:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附12min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附12min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为23min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为44min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸70mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在52°C以波长为240nm的紫外光照射23min紫外灭菌，包装即得。实施例4—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽30份、无机盐20份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7iU02/mgh，剌激指数为6.2。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水4倍，搅拌下升温至60°C，保温搅拌5min，搅拌下迅速降温至_5°C，降温时间为3min，保温搅拌3h，以2.5krpm离心40min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4的胃蛋白酶，在58t:下酶解14min，过滤，调节pH值为8.5，加入重量为上清液重量1.4%的枯草杆菌蛋白酶，在35t:下酶解17min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量3倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.3kpm离心5min，取上清液；取上清液重量1.5倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.2:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附13min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附13min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为26min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为48min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在57t:以波长为230nm的紫外光照射24min紫外灭菌，包装即得。实施例5—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽30份、无机盐20份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7ill02/mgh，剌激指数为6.3。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.1倍的枸橼酸钠，加水3倍，搅拌下升温至55°C，保温搅拌50min，搅拌下迅速降温至0°C，降温时间为3min，保温搅拌3h，以3krpm离心30min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.2%的胃蛋白酶，在59t:下酶解12min，过滤，调节pH值为7，加入重量为上清液重量1.5%的枯草杆菌蛋白酶，在35t:下酶解17min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速3kpm离心8.5min，取上清液；取上清液重量1.5倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.7:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附17min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附17min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为28min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为45min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e_聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54°C以波长为240nm的紫外光照射21min紫外灭菌，包装即得。实施例6—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽32份、无机盐20份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸90mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7iU02/mgh，剌激指数为6.4。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水5倍，搅拌下升温至55°C，保温搅拌40min，搅拌下迅速降温至-8°C，降温时间为4min，保温搅拌3h，以3krpm离心35min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.8%的胃蛋白酶，在55t:下酶解18min，过滤，调节pH值为8.5，加入重量为上清液重量1%的枯草杆菌蛋白酶，在37t:下酶解15min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.5kpm离心10min，取上清液；取上清液重量2倍的医用活性碳装柱，柱长径比5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附19min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附19min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为22min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为47min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸90mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在53t:以波长为250nm的紫外光照射27min紫外灭菌，包装即得。实施例7—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸14份、多肽28份、无机盐19份；木糖醇115mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为6.8iil02/mgh，剌激指数为6.1。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.2倍的枸橼酸钠，加水4倍，搅拌下升温至60°C，保温搅拌55min，搅拌下迅速降温至-3°C，降温时间为5min，保温搅拌2h，以2krpm离心35min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量5%的胃蛋白酶，在58t:下酶解19min，过滤，调节pH值为7，加入重量为上清液重量1%的枯草杆菌蛋白酶，在4(TC下酶解18min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量5倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.7kpm离心6min，取上清液；取上清液重量1倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.8:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为25min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为49min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇115mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在5rC以波长为240nm的紫外光照射20min紫外灭菌，包装即得。实施例8—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸13份、多肽30份、无机盐17份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸90mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为6.8iil02/mgh，剌激指数为6.0。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水3倍，搅拌下升温至50°C，保温搅拌60min，搅拌下迅速降温至-9"，降温时间为5min，保温搅拌4h，以3krpm离心40min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5%的胃蛋白酶，在57t:下酶解20min，过滤，调节pH值为7.5，加入重量为上清液重量1.3%的枯草杆菌蛋白酶，在3(TC下酶解19min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量5倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.5kpm离心5min，取上清液；取上清液重量2倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为22min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度得洗脱时间为45min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸90mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在57°C以波长为250nm的紫外光照射25min紫外灭菌，包装即得。实施例9—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽34份、无机盐22份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸70mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7.2ill02/mgh，剌激指数为6.5。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水3倍，搅拌下升温至55°C，保温搅拌52min，搅拌下迅速降温至-l(TC，降温时间为2min，保温搅拌2h，以2.5krpm离心38min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5%的胃蛋白酶，在57°C下酶解15min，过滤，调节pH值为8，加入重量为上清液重量1.5%的枯草杆菌蛋白酶，在32t:下酶解17min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.2kpm离心7min，取上清液；取上清液重量1.5倍的医用活性碳装柱，柱长径比5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附20min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附20min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为21min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为45min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸70mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54°C以波长为260nm的紫外光照射29min紫外灭菌，包装即得。实施例10—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸16份、多肽31份、无机盐20份；木糖醇130mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7.2iU02/mgh，剌激指数为6.4。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.1倍的枸橼酸钠，加水4倍，搅拌下升温至60°C，保温搅拌57min，搅拌下迅速降温至-5"，降温时间为4min，保温搅拌3h，以2.5krpm离心32min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.9%的胃蛋白酶，在59°C下酶解15min，过滤，调节pH值为7，加入重量为上清液重量1%的枯草杆菌蛋白酶，在37t:下酶解18min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.5kpm离心10min，取上清液；取上清液重量1.5倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为28min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为43min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇130mg，e-聚赖氨酸80!^，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54°C以波长为240nm的紫外光照射25min紫外灭菌，包装即得。实施例11—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物170mg，其中重量份数为氨基酸17份、多肽29份、无机盐21份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为6.3iU02/mgh，剌激指数为5.7。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.2倍的枸橼酸钠，加水5倍，搅拌下升温至60°C，保温搅拌55min，搅拌下迅速降温至_5°C，降温时间为3min，保温搅拌3h，以2.5krpm离心30min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量5%的胃蛋白酶，在6(TC下酶解17min，过滤，调节pH值为8.5，加入重量为上清液重量1%的枯草杆菌蛋白酶，在35t:下酶解20min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量3倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.5kpm离心7min，取上清液；取上清液重量2倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附14min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附14min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为26min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为45min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在53°C以波长为230nm的紫外光照射30min紫外灭菌，包装即得。实施例12—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物160mg，其中重量份数为氨基酸14份、多肽30份、无机盐23份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为6.0iU02/mgh，剌激指数为5.0。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.2倍的枸橼酸钠，加水5倍，搅拌下升温至50°C，保温搅拌50min，搅拌下迅速降温至-2。C，降温时间为3min，保温搅拌4h，以2krpm离心35min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.6%的胃蛋白酶，在56t:下酶解18min，过滤，调节pH值为7.5，加入重量为上清液重量1.4%的枯草杆菌蛋白酶，在39t:下酶解17min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速3kpm离心7min，取上清液；取上清液重量1.5倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附18min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附18min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为25min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为43min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在55t:以波长为240nm的紫外光照射25min紫外灭菌，包装即得。实施例13—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物190mg，其中重量份数为氨基酸18份、多肽30份、无机盐19份；木糖醇150mg;e-聚赖氨酸90mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7.8iU02/mgh，剌激指数为7.2。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.1倍的枸橼酸钠，加水4倍，搅拌下升温至50°C，保温搅拌52min，搅拌下迅速降温至-rC，降温时间为4min，保温搅拌2h，以3krpm离心35min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.4%的胃蛋白酶，在57t:下酶解15min，过滤，调节pH值为8，加入重量为上清液重量1.1%的枯草杆菌蛋白酶，在34t:下酶解19min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.7kpm离心7min，取上清液；取上清液重量1倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.2:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附19min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附19min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为25min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为48min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇150mg，e-聚赖氨酸90!^，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在57°C以波长为240nm的紫外光照射25min紫外灭菌，包装即得。实施例14—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物185mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽27份、无机盐18份；木糖醇130mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7.5iU02/mgh，剌激指数为6.8。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水3倍，搅拌下升温至60°C，保温搅拌58min，搅拌下迅速降温至-5°C，降温时间为5min，保温搅拌4h，以2.5krpm离心35min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5%的胃蛋白酶，在58°C下酶解15min，过滤，调节pH值为7，加入重量为上清液重量1.5%的枯草杆菌蛋白酶，在35t:下酶解15min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.5kpm离心8min，取上清液；取上清液重量1.5倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为30min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为45min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇130mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54t:以波长为260nm的紫外光照射28min紫外灭菌，包装即得。实施例15—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物165mg，其中重量份数为氨基酸10份、多肽32份、无机盐16份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸100mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为6.1ill02/mgh，剌激指数为5.2。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水5倍，搅拌下升温至55°C，保温搅拌51min，搅拌下迅速降温至-7"，降温时间为2min，保温搅拌3h，以3krpm离心40min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5%的胃蛋白酶，在57t:下酶解16min，过滤，调节pH值为7，加入重量为上清液重量1%的枯草杆菌蛋白酶，在37t:下酶解16min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量5倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2kpm离心5min，取上清液；取上清液重量2倍的医用活性碳装柱，柱长径比5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附15min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为25min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为50min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e_聚赖氨酸100mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54°C以波长为240nm的紫外光照射29min紫外灭菌，包装即得。实施例16—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物175mg，其中重量份数为氨基酸12份、多肽30份、无机盐20份；木糖醇140mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为6.6iU02/mgh，剌激指数为5.4。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.2倍的枸橼酸钠，加水3倍，搅拌下升温至60°C，保温搅拌48min，搅拌下迅速降温至-8°C，降温时间为3min，保温搅拌3h，以3krpm离心40min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量5%的胃蛋白酶，在55t:下酶解20min，过滤，调节pH值为8，加入重量为上清液重量1%的枯草杆菌蛋白酶，在39t:下酶解17min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速3kpm离心8min，取上清液；取上清液重量1.7倍的医用活性碳装柱，柱长径比4:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附13min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附13min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为25min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为42min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇140mg，e_聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54°C以波长为240nm的紫外光照射25min紫外灭菌，包装即得。实施例17—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸14份、多肽30份、无机盐22份；木糖醇110mg;e-聚赖氨酸60mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7.1iU02/mgh，剌激指数为6.4。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.1倍的枸橼酸钠，加水3倍，搅拌下升温至60°C，保温搅拌43min，搅拌下迅速降温至-l(TC，降温时间为4min，保温搅拌2h，以3krpm离心40min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4%的胃蛋白酶，在55°C下酶解13min，过滤，调节pH值为8.5，加入重量为上清液重量1.4%的枯草杆菌蛋白酶，在35t:下酶解20min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量3倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.9kpm离心6min，取上清液；取上清液重量1.8倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.2:1，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附17min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附17min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为27min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为45min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇110mg，e-聚赖氨酸60mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在5『C以波长为260nm的紫外光照射30min紫外灭菌，包装即得。实施例18—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物175mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽25份、无机盐24份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸80mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为6.5iU02/mgh，剌激指数为5.4。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水5倍，搅拌下升温至55°C，保温搅拌45min，搅拌下迅速降温至-5°C，降温时间为5min，保温搅拌4h，以2krpm离心30min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5%的胃蛋白酶，在58t:下酶解20min，过滤，调节pH值为8，加入重量为上清液重量1%的枯草杆菌蛋白酶，在4(TC下酶解17min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2.5kpm离心8min，取上16清液；取上清液重量1.3倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.7:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附18min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附18min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为24min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为47min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54t:以波长为240nm的紫外光照射25min紫外灭菌，包装即得。实施例19—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物185mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽34份、无机盐21份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸90mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为7.6iU02/mgh，剌激指数为7丄所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水4倍，搅拌下升温至55°C，保温搅拌60min，搅拌下迅速降温至-2°C，降温时间为5min，保温搅拌2h，以2krpm离心35min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5X的胃蛋白酶，在6(TC下酶解12min，过滤，调节pH值为7，加入重量为上清液重量1%的枯草杆菌蛋白酶，在35t:下酶解18min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量4倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速3kpm离心7min，取上清液；取上清液重量1.5倍的医用活性碳装柱，柱长径比4.5:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附20min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附20min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为25min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为45min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇120mg，e-聚赖氨酸90!^，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在54t:以波长为240nm的紫外光照射25min紫外灭菌，包装即得。实施例20—种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，注射液每毫升含有如下物质总固形物200mg，其中重量份数为氨基酸20份、多肽35份、无机盐25份；木糖醇100mg;e-聚赖氨酸70mg。所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液呼吸活力为8.0iil02/mgh，剌激指数为7.5。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加入重量为小牛血重量的0.15倍的枸橼酸钠，加水4倍，搅拌下升温至55°C，保温搅拌50min，搅拌下迅速降温至_5°C，降温时间为4min，保温搅拌3h，以3.5krpm离心45min，取上清液；上清液调节pH值为34，加入重量为上清液重量4.5%的胃蛋白酶，在57t:下酶解15min，过滤，调节pH值为7.5，加入重量为上清液重量1.2X的枯草杆菌蛋白酶，在35t:下酶解17min，过滤得滤液；将滤液加入重量为滤液重量5倍的80%乙醇水溶液，搅拌，按照转速2kpm离心10min，取上清液；取上清液重量1倍的医用活性碳装柱，柱长径比4:l，将上清液放入活性碳柱，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附10min，放出穿流液，再放入剩余上清液，至液面与活性碳上表面相平，静置吸附10min，放出穿流液，反复操作至全部上清液通过活性碳柱，用重量为上清液2倍的80%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为25min，再用重量为上清液1倍的70%乙醇水溶液洗脱，控制洗脱速度使得洗脱时间为45min;合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇100mg，e-聚赖氨酸70mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；超滤液分装灌装后在57t:以波长为260nm的紫外光照射26min紫外灭菌，包装即得。本发明还提供了如下的试验例，以进一步对本发明进行说明[OH8]试验例1由于中国药典2005版第三部对生物制剂的长期性和稳定性考察并未做规定，故本实验参照中国药典2005版第二部附录XIXC的关于药物制剂的稳定性和长期性考察的实验操作。表1、小牛血去蛋白提取物稳定性长期实验考察<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>本试验例考察了本发明所提供的小牛血去蛋白提取物的稳定性。其中1为实施例1产品；2为实施例11的产品；3为实施例11的方法制备，并按照实施例11的配比，区别在于去除了e-聚赖氨酸；4为实施例20的产品；为5为按照专利申请200510084246.2的方法制备，并按照实施例1的配比加入木糖醇和e-聚赖氨酸；6为按照专利申请200410062657.7实施例1的方法制备的产品。其中多肽是以产品中初始多肽含量为100%，然后检测其后多肽含量相对其初始含量的百分比。从本表中可以看出，本发明添加了木糖醇和e-聚赖氨酸可以大大增加小牛血去蛋白提取物制剂的稳定性。譬如编号1、2的产品，多肽成分变化很小。而编号3的产品没有加入e-聚赖氨酸，但是依然保持较为稳定的多肽含量，证实木糖醇具有一定的稳定性作用。编号4的产品虽然具有更高含量的多肽及更高的剌激指数，但由于提取时活性成分保留过多，从而可能残留了更多的杂质，而使得有效成分和剌激指数降低较快。编号5为按照现有技术方法制备，但是加入了木糖醇和e-聚赖氨酸，其产品同样能够实现更好的稳定性。编号6为完全按照现有技术制备的产品，其稳定性相对较差。试验例2本试验例考察了制备方法对于产品性能的影响。表2、制备方法影响<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>其中编号1为完全按照实施例1操作进行，编号2为按照实施例13操作进行。通过上述试验发现，采取本发明所述的迅速冷冻降温和分别两次不同蛋白酶酶解，可以大大增加有效成分的含量。经过试验，发现本发明其他实施例所制备的产品也都符合上述试验例趋势，具有同实施例1、11、13相类似的效果。本发明不再一一复述。权利要求一种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，其特征在于，所述的注射液每毫升含有如下物质总固形物160～200mg，其中重量份数为氨基酸10～20份、多肽25～35份、无机盐15～25份；木糖醇100～150mg；ε-聚赖氨酸60～100mg。2.根据权利要求1所述的小牛血去蛋白提取物组合物注射液，其特征在于，所述的注射液每毫升含有如下物质总固形物180mg，其中重量份数为氨基酸15份、多肽30份、无机盐20份；木糖醇120mg;e-聚赖氨酸80mg。3.—种权利要求1或2所述小牛血去蛋白提取物组合物注射液的制备方法，其特征在于，所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备(1)取小牛血加入枸橼酸钠，加水35倍，搅拌下升温至5060°C，保温搅拌4060min，搅拌下迅速降温至-100°C，降温时间为25min，在-100"保温搅拌24h，离心，取上清液；(2)将上步制得的上清液调节pH值为34，加入上清液重量4%5%的胃蛋白酶酶解，过滤，调节pH值为7.08.5，加入上清液重量1%1.5%的枯草杆菌蛋白酶酶解，过滤得滤液；(3)将上步得到的滤液加入乙醇水溶液搅拌，离心，取上清液；(4)将上清液过活性碳柱，合并洗脱液和穿流液，然后浓縮至无乙醇味，浓縮液加入木糖醇，并加水稀释至每毫升溶液中含木糖醇100150mg，e-聚赖氨酸60100mg，优选木糖醇120mg，e-聚赖氨酸80mg，稀释后的溶液微孔滤膜超滤得超滤液；(5)超滤液分装灌装后紫外灭菌，包装即得。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中枸橼酸钠用量为小牛血重量的0.10.2倍，优选0.15倍；所述离心为转速23krpm，时间3040min。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)加入胃蛋白酶酶解为在556(TC下酶解1020min，优选为在58。C下酶解15min;加入枯草杆菌蛋白酶酶解为在3040。C下酶解1520min，优选为在35。C下酶解17min。6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的乙醇水溶液为滤液重量35倍的80%乙醇水溶液，所述的搅拌为405(TC下搅拌1020分钟。7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述的活性碳柱为取所述上清液重量i2倍，优选i.5倍的医用活性碳，柱长径比为4:15:1，优选4.5:i。8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述的过活性碳柱为将步骤(3)得到的上清液倒入活性碳柱中，至上清液液面与活性碳上表面相平，静置吸附1020min，优选15min，放出穿流液，再放入剩余上清液，按照上述步骤反复操作至放入全部上清液，然后用80%乙醇水溶液洗脱，重量用量为上清液重量的2倍，再用70%乙醇水溶液洗脱，重量用量为上清液重量的1倍。9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述的80%乙醇水溶液洗脱为洗脱时间2030min，优选25min;所述的70%乙醇水溶液洗脱为洗脱时间4050min，优选45min。10.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述的紫外灭菌为在5058°C以波长为230260nm的紫外光照射2030min，优选在54°C以波长为240nm的紫外光照射25min。全文摘要本发明涉及一种小牛血去蛋白提取物组合物注射液，所述的注射液每毫升含有如下物质总固形物160～200mg，其中重量份数为氨基酸10～20份、多肽25～35份、无机盐15～25份；木糖醇100～150mg；ε-聚赖氨酸60～100mg。所述小牛血去蛋白提取物按照如下步骤制备取小牛血加枸橼酸钠，加水搅拌升温，搅拌下迅速降温至-10～0℃，离心，上清液调节pH值，加入胃蛋白酶酶解，过滤，调节pH值，加入枯草杆菌蛋白酶酶解，过滤；滤液加入乙醇水溶液搅拌，离心，上清液过活性炭柱，合并洗脱液和穿流液，浓缩至无乙醇味，浓缩液加入木糖醇和ε-聚赖氨酸，加水稀释，超滤；超滤液分装灌装后紫外灭菌，包装即得。文档编号A61P25/28GK101697977SQ20091024671公开日2010年4月28日申请日期2009年11月26日优先权日2009年11月26日发明者罗诚申请人:罗诚