烷烃磺酸苯氧基苯基酯的制作方法
专利名称：烷烃磺酸苯氧基苯基酯的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的烷烃磺酸苯氧基苯基酯，其制备方法，其在制备用于治疗和/或预防疾病、特别是用于治疗疼痛和神经变性病症的药物中的应用。
在大麻类植物(大麻(Cannabis sativa))的成分当中，在药理方面最重要的是Δ9-四氢大麻酚酸(Δ9-THC)，其引起影响人中枢神经系统(CNS)的特发性大麻作用。大麻产品的可能的历史和现在的治疗应用特别包括治疗疼痛、呕吐、厌食、青光眼和运动障碍。
迄今为止，已经鉴定出了大麻素受体的两种亚型和一种剪接变体。CB1和CB2受体具有7个跨膜区域，并属于G蛋白偶联受体家族。CB1受体和剪接变体CB1a主要位于中枢神经系统中。CB2受体主要是在周围组织、尤其是白细胞、脾和巨噬细胞中发现的。
迄今为止，已经公开了大麻素受体激动剂的几类结构典型的大麻素例如Δ9-THC，非典型大麻素例如氨基烷基吲哚和类花生酸(Eicosanoide)。后者包括内源性CB1受体激动剂Anandamid。
WO-A-98/37061、WO-A-00/10967和WO-A-00/10968描述了一些作为大麻素受体激动剂用于治疗神经变性病症的烷烃磺酸芳氧基苯基酯化合物。
U.S.专利3,462,473，Biochem.Pharmacol.1972，21，1127-1134，Fed.Pr0c.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.1971，30，841-847和J.Pharm.Sci.1973，62，1780-1784公开了一些烷烃磺酸对苯氧基苯基酯及其血胆固醇过少或促使血清脂质减少的作用。
此外，一些烷烃磺酸苯氧基苯基酯化合物及其作为除草剂(1)、抗微生物剂(2)、润滑剂(3)、热敏纸的敏化剂(4)和合成中间体(5)的应用是已知的(1)EP-A-0 023 725；U.S.-A-3,929,903；U.S.-A-4,415,354；Chem.Abstr.1979，91，175034(JP-A-54066631)；Chem.Abstr.1981，94，156552(JP-A-55154953)；Chem.Abstr.1981，95，168773(JP-A-56046859)；Chem.Abstr.1981，95，168789(JP-A-56079665)；Chem.Abstr.1989，111，2678(JP-A-63104903)；(2)DE-A-14 93 776；DE-A-21 31 754；U.S.-A-3,629,477；U.S.-A-3,772,445；U.S.-A-3,850,972；CH-B-450 347；CH-B-459 656；Chem.Abstr.1975，83，72725(JP-B-50003375)；(3)U.S.-A-3,346,612；(4)U.S.-A-4,837,197；(5)Chem.Abstr.1997，127，26629 (JP-A-09087210)；Tetrahedr.1990，46.4161-4164，J.Am.Chem.Soc.1998，39，435-436。
本发明的目的是提供具有改善的作用的大麻素受体激动剂。
本发明的新化合物实现了该目的。
因此，本发明涉及通式(I)新化合物， 其中R1代表氢、C1-C4-烷基、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R2代表卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R3代表C4-C7-烷基，其中所述烷基可被氟或氯取代一次或多次，R4代表氢或卤素，且A代表氧或NH。
本发明化合物可以以立体异构的形式存在，它们成像和镜像关系(对映异构体)，或者不成像和镜像关系(非对映异构体)。本发明涉及对映异构体和非对映异构体及其各自的混合物。这些对映异构体和非对映异构体的混合物可以用已知的方式拆分为立体异构的单一组分。
本发明的化合物还可以以其盐的形式存在。一般来说，可以在此处提及的为与有机或无机碱或酸形成的盐。
在本发明中，优选生理可接受的盐。本发明化合物的生理可接受盐可以是本发明物质与无机酸、羧酸或磺酸形成的盐。例如，特别优选的实例是与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、枸椽酸、富马酸、马来酸或苯甲酸形成的盐。
生理可接受盐还可以是本发明化合物的金属盐或铵盐。例如，特别优选钠、钾、镁或钙盐，以及由氨或有机胺衍生的铵盐，例如，有机胺为乙胺、二乙胺和三乙胺、二乙醇胺和三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、精氨酸、赖氨酸、乙二胺或2-苯基乙胺。
本发明还包括可通过烷基化反应由游离的胺转化制备的铵化合物。
在本发明中，取代基一般具有下列含义在本发明范围内，(C1-C4)-烷基代表具有1-4个碳原子的直链或支链烷基。可提及的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。在本发明范围内，(C4-C7)-烷基代表具有4-7的碳原子的直链或支链烷基。可提及的实例是正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、正戊基、己基或庚基。正丁基、正戊基和正己基是优选的。
在本发明范围内，卤素包括氟、氯、溴和碘。氯或氟是优选的。
定义如下的通式(I)化合物是优选的，其中R1代表氢、氟、氯、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R2代表氟、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R3代表正丁基、正戊基、4，4，4-三氟丁-1-基或5，5，5-三氟戊-1-基，R4代表氢，且A代表氧。
定义如下的通式(I)化合物是特别优选的，其中R1、R2、R3、R4和A具有上述含义，且在被R1和R2取代的苯环的4-位有氢原子。
这样的化合物可通过下式表示
定义如下的通式(I)化合物是非常特别优选的，其中R1、R2、R3、R4和A具有上述含义，且R1和R2在苯环的2和3-位。
R1和R2在苯环上的位置可通过下式表示 定义如下的通式(I)化合物也是非常特别优选的，其中R1、R2、R3、R4和A具有上述含义，且A在苯基的c-位。
A在苯环上的位置通过下式表示 定义如下的通式(I)化合物是非常特别优选的，其中R1、R2、R3、R4和A具有上述含义，R1和R2在苯环的2和3-位，且A在苯基的c-位。
R1、R2和A的位置可通过下式表示 或 此外，已经发现了制备通式(I)化合物的方法，其特征在于在惰性溶剂中，在合适的碱存在下，以及如果适当的话，在相转移催化剂存在下，将通式(II)化合物 其中R1、R2、R4和A具有上述含义，与通式(III)化合物反应X1-SO2-R3(III)，其中X1代表合适的离去基团，且R3具有上述含义。
通式(II)化合物是新的，并且可以按照类似于通常已知的方法的方法以下述方式制得首先在惰性溶剂中，在合适的碱存在下，以及如果适当的话在铜(I)或铜(II)化合物存在下，将通式(IV)化合物与通式(V)化合物反应 其中R1、R2和R4具有上述含义，a)Y代表羟基，且X代表合适的离去基团，或者相反b)Y代表合适的离去基团，且X代表羟基，且E代表硝基或式-O-R5所示基团，其中R5代表合适的羟基保护基，以生成通式(VI)化合物 其中R1、R2、R4和E具有上述含义，然后，[A]当E代表硝基时，在合适的条件下通过常规方法将其还原，以获得通式(IIa)化合物 其中R1、R2和R4具有上述含义，或者[B]当E代表式-O-R5所示基团时，在合适的条件下通过常规方法除去保护基R5，以生成通式(IIb)化合物 其中R1、R2和R4具有上述含义。
通式(II)化合物还可以这样制得在惰性溶剂中，在合适的碱存在下，以及如果适当的话在铜(I)或铜(II)化合物存在下，将通式(IV)化合物与通式(VII)化合物反应 其中R1、R2、R4、A、X和Y具有上述含义。
本发明方法可通过下述反应路线图表示 在本发明中，惰性溶剂是在所选的反应条件下不改变或仅有轻微改变的溶剂。
适用于方法(II)+(III)→(I)的惰性溶剂是例如醚，例如乙醚、乙二醇一甲醚或二甲醚、二氧杂环己烷或四氢呋喃，或烃，例如苯、甲苯、二甲苯、环己烷或石油馏分或卤代烃，例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳，或二甲亚砜，二甲基甲酰胺、六甲基磷三酰胺、乙酸乙酯、吡啶、三乙胺或甲基吡啶。还可以使用所述溶剂的混合物，如果适当的话与水混合。二氯甲烷、二氯甲烷/水、四氢呋喃、二氧杂环己烷和二氧杂环己烷/水是特别优选的。
适于反应(II)+(III)→(I)的碱是有机胺，特别是三-(C1-C6)-烷基胺，例如三乙胺或二异丙基乙胺或杂环，例如吡啶、甲基哌啶、哌啶或N-甲基吗啉，碱金属和碱土金属氢氧化物或碳酸盐，例如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾或醇化物，例如甲醇钠或乙醇钠。三乙胺、吡啶和氢氧化钠是优选的。
各按通式(II)化合物的量为1摩尔计，碱通常以0.1摩尔-5摩尔的量、优选1摩尔-3摩尔的量使用。
如果适当的话，方法(II)+(III)→(I)也可以在相转移催化剂存在下进行。例如，季铵盐，优选溴化四丁基铵是合适的相转移催化剂。
合适的离去基团X1是例如卤素，优选氯。
这些反应可在常压下进行，但是也可以在升压下或减压条件下(例如0.5-3巴)进行。通常在常压下反应。
方法(II)+(III)→(I)在0℃-100℃、优选0℃-30℃的温度下进行。
已被证实适于方法(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VII)→(II)的惰性溶剂的实例是下列溶剂有机溶剂，例如醚，如乙醚、乙二醇一甲醚或二甲醚、二氧杂环己烷或四氢呋喃，或烃，例如苯、甲苯、二甲苯、环己烷或石油馏分或卤代烃，例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳，或二甲亚砜，二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、六甲基磷三酰胺、乙酸乙酯、吡啶、三乙胺或甲基吡啶。还可以使用所述溶剂的混合物，如果适当的话与水混合。吡啶、N-甲基吡咯烷酮、二甲基甲酰胺和二甲亚砜是特别优选的。
如果适当的话，方法(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VII)→(II)也可以在铜(I)或铜(II)化合物存在下进行。碘化铜(I)和氧化铜(II)是优选的。
适于方法(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VII)→(II)的碱是碱金属碳酸盐和碳酸氢盐，特别是碳酸钠和碳酸钾，碱金属氢氧化物，特别是氢氧化钠，或有机胺，特别是三-(C1-C6)-烷基胺，例如三乙胺。氢氧化钾、氢氧化钠和碳酸钾是特别优选的。
各按通式(IV)或(V)化合物的量为1摩尔计，碱通常以0.1摩尔-5摩尔的量、优选1摩尔-3摩尔的量使用。
在方法(IV)+(V)→(VI)变型a)中的合适离去基团X或方法(IV)+(V)→(VI)变型b)中的合适离去基团Y是例如卤素或磺酸酯基例如三氟甲磺酸酯。氟、氯或溴是优选的。
这些反应可在常压下进行，但是也可以在升压下或减压条件下(例如0.5-5巴)进行。通常在常压下反应。
这些反应在20℃-200℃、优选100℃-160℃的温度下进行。
关于步骤(VI)→(IIa)还原芳族硝基的方法是已知的(例如R.C.Larock，″Comprehensive Organic Transformations″，New York，1989，411-415页以及其中所引用的文献)。
引入羟基保护基及其除去方法是已知的(例如T.W.Greene，P.G.M.Wuts，″Protective Groups in Organic Synthesis″，2ndEd.，NewYork，1991以及其中所引用的文献；J.Org.Chem.1999，64，9719-9721)。
对于反应(IV)+(V)→(VI)→(IIb)，合适的保护基R5的实例有甲基、苄基、烯丙基、甲氧基甲基、2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基或三甲基甲硅烷基。甲基和苄基是优选的。
通式(III)化合物可商购获得，是文献中已知的，或者可按照类似于文献中已知的方法合成(参见例如J.Chem.Soc.C1968，1265；Chem.Ber.1967，100，1696；氟代烷烃磺酰氯可按照例如WO-A-98/37061或DE-A-19 422 64中描述的方法制得)。
通式(IV)、(V)和(VII)化合物是已知的或者可按照已知方法制得。
通式(IV)和(V)化合物可商购获得，是文献中已知的，或者可按照类似于文献中已知的方法合成(参见例如J.March，″AdvancedOrganic Chemistry″，4thEd.，Wiley，1992，531-534页和1295以及其中所引用的文献；Synthesis 1990，1145-1147)。
令人惊奇的是，本发明化合物表现出有价值的不可预测到的药理作用谱。
它们的突出之处在于，它们是高效的大麻素受体激动剂，具有高的代谢稳定性和高的口服生物利用度。因此它们特别适于口服治疗。
它们可单独使用，或者与用于预防和治疗下列疾病的其它药物联合使用急性和/或慢性疼痛(关于分类参见″Classification ofChronic Pain，Descriptions of Chronic Pain Syndromes andDefinitions of Pain Terms″，第2版，Meskey and Begduk，Hrsg.；IASP-Press，Seattle，1994)和神经变性疾病，特别是癌症引起的疼痛和慢性神经病性疼痛，例如与神经病性糖尿病、带状疱疹后神经痛、周围神经损害、中枢疼痛(例如脑缺血所致的中枢疼痛)和三叉神经痛有关的慢性疼痛，和其它慢性疼痛，例如腰痛、背痛(低背痛)或风湿性疼痛。此外，这些物质还适于治疗任何起源的原发性急性疼痛和由其导致的继发性疼痛，以及用于治疗以前是急性的、但是已变成慢性的疼痛。
适于与本发明化合物联合使用来治疗急性和/或慢性疼痛的药物是例如镇静剂，如曲马多、吗啉、双氢可待因、右旋丙氧吩，三环类抗抑郁剂，例如阿米替林，抗惊厥剂，例如卡马西平、加巴喷丁，非甾族抗炎药物(NSAID)例如阿司匹林、布洛芬、萘普生，包括COX-2抑制剂；例如Rofecoxib、Celecoxib。
本发明化合物还适于治疗脑的原发性和/或继发性病症，例如脑血管痉挛期间或之后、偏头痛、痉挛状态、开始原因不明的低氧症或缺氧症、周期性窒息、自身免疫性疾病、可与脑损害有关的代谢和器质性病症、和作为原发性脑病症例如癫痫和动脉粥样硬化和/或动脉硬化性改变的后果的脑损害。本发明化合物也适于治疗慢性或精神病病症，例如抑郁症、胃溃疡、神经变性病症，例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病或亨廷顿氏舞蹈病、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、由于急性和/或慢性病毒或细菌感染引起的神经变性和多梗塞性痴呆。
它们也可用于治疗下列疾病的药物中呕吐、恶心、青光眼、哮喘、厌食、惊厥、风湿病、镇静和运动性病症。
本发明的物质还适于治疗细菌和/或病毒感染引起的疾病，这些疾病基于免疫系统的直接和/或间接的改变或基于免疫系统参与的免疫调节障碍，例如，局部或系统性自身免疫性疾病(例如，所有变型的红斑狼疮)、炎症和/或与自身免疫有关的关节疾病(例如，类风湿性关节炎、与外伤有关的炎症)、与炎症和/或自身免疫有关的骨骼和肌肉系统疾病、与炎症和/或自身免疫有关的内部器官的病理过程(如局限性回肠炎、肾小球性肾炎)、外部器官的病理过程(如由于在空气中吸入抗原造成的过敏反应)、中枢神经系统的病理过程(如多发性硬化、早老性痴呆、神经病)、及感觉器官的病理过程、造血系统的原发性和/或继发性和/或自身免疫性疾病的病理过程以及免疫系统本身的病理过程(如排斥反应、AIDS)、还有人或动物炎症和/或免疫性皮肤病。这些物质还作用于这些疾病的间接症状，如疼痛。
本发明化合物优选用于治疗疼痛、痉挛、脑缺血和颅脑创伤。
可通过下列生物测定来证实本发明化合物在体外对大麻素受体的作用1.大鼠CB1萤光素酶报道基因测试通过WO-A-98/37061第55页及以下中描述的方法制备大鼠CHOCB1报道细胞系的贮备培养物。
使用下述测试方案进行物质筛选在37℃、10％二氧化碳下，将贮存培养物在含有10％FCS的50％Dulbecco改性Eagle培养基/50％F-12(DMEM/F12)中培养，2至3天后每种情况都1∶10分裂。将测试培养物以每孔5000个细胞接种到96-孔板中，并在37℃培养70小时。然后，用磷酸缓冲盐水小心洗涤此培养物，并用不含血清的Ultra-CHO培养基(Bio-Whittaker)重新配制。将溶解于DMSO中的测试物在培养基中进行1×稀释，并吸移到测试培养物中(在测试混合物中DMSO的最大浓度为0.5％)。20分钟后，加入毛喉萜，然后将此培养物在培养箱中于37℃培养3小时。然后，除去上清液并通过加入25μl溶解试剂(25mM三磷酸盐，pH7.8，含有2mM DTT，10％甘油，3％Triton×100)将细胞溶解。之后立即加入萤光素酶底物溶液(2.5mM ATP，0.5mM荧光素，0.1mM辅酶A，10mM麦黄酮(Tricin)，1.35mM硫酸镁，15mM DTT，pH7.8)，简单地摇动并用Hamamatzu照相系统检测萤光素酶活性。
为了灭活G1蛋白，测试前用5ng/ml(终浓度)的百日咳毒素将测试培养物处理16小时。
用GraphPadPrismTM程序(Hill方程，特别针对一点竞争)计算IC50值。
在该测试中，实施例17表现出的IC50为0.81nM。2.hCB2萤光素酶报道基因测试用人CB2受体将CHOluc9细胞稳定地转染。转染、克隆选择和测试进行是按照类似于大鼠CB1受体的操作进行的。使用下述测试方案来测定细胞的药理特征和进行物质测试在37℃、10％二氧化碳下，将贮存培养物在含有10％FCS的50％Dulbecco改性Eagle培养基/50％F-12(DMEM/F12)中培养，2至3天后每种情况都1∶10分裂。在含有5％FCS的DMEM/F12培养基中将测试培养物以每孔5000个细胞接种到96-孔板中，并于37℃培养70小时。然后，取出培养物，用不含血清的Ultra-CHO培养基(Bio-Whittaker)替代。将溶解于DMSO(200×终浓度)中的所述物质吸移到测试培养物中(在测试混合物中DMSO的最大浓度为0.5％)。20分钟后，加入毛喉萜，然后将此培养物在培养箱中于37℃培养3.5小时。然后，除去上清液并通过加入25μl溶解试剂(25mM三磷酸盐，pH7.8，含有2mMDTT，10％甘油，3％Triton×100)将细胞溶解。之后立即加入50μl浓度成双倍的萤光素酶底物溶液(5mM ATP，1mM荧光素，0.2mM辅酶A，10mM麦黄酮，1.35mM硫酸镁，15mM DTT，pH7.8)，简单地摇动并用光电倍增管照相测定系统(Hamamatsu)检测萤光素酶活性。
用GraphPadPrismTM程序(Hill方程，特别针对一点竞争)计算IC50值。3.与大鼠皮层膜结合通过标准方法由不同的组织和细胞制备膜蛋白。通过吸移将缓冲液、标记的配位体、DMSO或测试物混合在一起，然后加入100μg蛋白，将该混合物充分混合，并在30℃的水浴中培养60分钟。该培养时间结束后，通过向每个管中加入冰冷的培养缓冲液来停止该反应。过滤，然后用3/4ml培养缓冲液洗涤。将滤器转移到小瓶(minivials)内，并在液体闪烁计数器中测定放射性。
可在下列体外测定中发现本发明化合物的代谢稳定性4.微粒体稳定性测定可在大鼠肝脏微粒体中测定本发明化合物的代谢稳定性(按照类似于J.Pharmacol.Exp.Ther.1997，283.46-58中描述的方法)。
为了测定微粒体稳定性和外推出由于肝脏的首过效应(first-pass)(一期反应)所致的最大可能生物利用度(Fmax)，加入辅因子，将测试物以低浓度与微粒体蛋白于37℃培养15分钟。
培养和取样是在得自Canberra Packard的改进的自动吸移器上进行的。
通过与WO-A-98/37061的实施例相比可发现，本发明化合物在该测试中具有更强的代谢稳定性表1
可通过下列方法在体内测定本发明化合物的生物利用度以及其它药动学参数5.在大鼠中的药动学a)静脉内输注用15分钟将测试物经由侧尾静脉中的Braunüle直接输注到血流内。使用校准的20ml注射器来准确地施用所选的剂量和体积。使用Braun Melsungen No.152440/1泵来进行输注。b)口服给药通过管饲法将测试物作为大丸剂施用。c)取样和后处理血液和血浆从插入导管的动物(颈静脉)采集血样并置于肝素化的管中。将血液离心，并以合适的方法制备血浆以进行分析(LC-MS-MS)。将血浆在＜-15℃贮存直至分析。d)药动学结果微粒体数据(大鼠肝脏微粒体)预测最高达100％的最大可能利用度。
从体内实验(大鼠)得到的实施例22的药动学参数是口服数据(剂量3mg/kg)AUC标准0.102kg*h/l，C最大，标准0.0198kg/l，t最大2.29h，t1/22.36h，F33％。静脉内给药数据(剂量0.3mg/kg)AUC标准0.307kg*h/l，C最大，标准0.5978kg/l，Vss4.121/kg，t1/21.6h。
它们在本文中的含义是AUC标准血浆浓度/时间曲线下的标准化至1mg/kg剂量的面积；C最大，标准标准化至1mg/kg剂量的单次给药后的最大血浆浓度；t最大单次给药后的达到最大血浆浓度的时间；t1/2最终的半衰期；F生物利用度；这里，是与可全身利用的静脉内施用的剂量相比所获得的百分比；Vss在稳定状态的表观分布体积。
本发明化合物的体内作用可在例如下列动物模型中证实6.降体温(大鼠)在大鼠降体温测定中测试对CB1受体的体内激动作用。
通过食管温度探针测定基础体温5分钟后，将测试物给药(口服给药)。对照组仅口服接受测试物的溶剂(Cremophors EL 1-10％+蒸馏水)。口服给药120和240分钟后测定体温。每一剂量的组大小是5-7只动物(大鼠)。大鼠降体温激动测试
a)将体温降低1℃的有效剂量可在下列动物模型中证实本发明化合物治疗疼痛的适当性7.大鼠坐骨神经分支的轴突切开术(Axotomie vonIschiasverzweigungen)(慢性疼痛模型)在戊巴比妥麻醉下，将坐骨神经的三叉暴露，将邻近轴突切开位点的神经结扎后，把腓骨和胫骨神经分支的轴突切开。对照动物接受假手术。手术后，轴突切开的动物发展成慢性机械性痛觉过敏。借助于压力传感器(electronic von Frey anesthesiometer，IITC Inc.-Life Science Instruments，Woodland Hills，CA.，USA)测试该痛觉过敏，与假手术的动物相比。
在疼痛测试之前在不同时间通过不同的给药途径(i.v.、i.p.、口服、i.t.、i.c.v.、透皮)施用测试物。
实施例22的化合物以1mg/kg的最小有效口服剂量(测试前60分钟快速给药)减轻了模型中的痛觉过敏。
本发明化合物例如治疗神经变性病症的适当性可在大鼠持久病灶性脑缺血模型(MCA-O)或大鼠硬膜下血肿模型(SDH)(WO-A-98/37061，p.60及以下)中证实。
可通过已知方法，使用惰性无毒可药用载体或溶剂将本发明的新活性物质转化成常规制剂，例如片剂、包衣片剂、丸剂、粒剂、气雾剂、糖浆剂、乳剂、悬浮液和溶液。在这些制剂中，治疗活性化合物应当分别以占整个混合物重量约0.5-90％的浓度存在，也就是说，以足以达到所规定的剂量范围的量存在。
制剂是通过用溶剂和/或载体，如果适当的话使用乳化剂和/或分散剂将活性物质扩展来制得的，例如当使用水作为稀释剂时，如果适当的话可使用有机溶剂作为辅助溶剂。
给药是以常规方法进行，优选通过口服、透皮或非胃肠道给药途径进行，特别是经舌或静脉内给药。然而，还可以通过经由口或鼻子吸入，例如借助于喷雾经由口或鼻子吸入来进行，或者经由皮肤局部给药。
通常，已经证实，对于口服给药，为了获得有效结果，施用约0.001-10mg/kg、优选约0.005-1mg/kg体重的量是有利的。
然而，如果适当的话，可能必须偏离所述的量，这特别取决于体重和给药途径，个体对药物的反应，制剂的性质以及进行给药的时间或间隔。因此，在某些情况下，使用低于上述最小量的剂量可能就已足够，而在另外一些情况下，必须超过上述最大的量。在更大量施用的情况下，在一天期间将这些剂量分成几个单独剂量可能是合适的。
通过HPLC原料化合物和制备实施例的保留时间是在下列条件下测定的柱Kromasil C18 60*2；注射体积1.00μl；流速0.75ml/分钟；洗脱剂A＝0.01M aq H3PO7，B＝CH3CN；梯度[t(分钟):A/B)]0:90/10；0.5:90/10；4.5:10/90；6.5:10/90；7.5:90/10。缩写aq. 含水的CH 环己烷TLC 薄层色谱法DCI 直接化学电离(在MS中)DCM 二氯甲烷EA 乙酸乙酯EI 电子冲击电离(在MS中)ESI 电子喷雾电离(在MS中)HPLC高压-，高效液相色谱法Me 甲基MW 分子量MS 质谱NMR 核磁共振色谱法Rf保留指数(在TLC中)Rt保留时间(在HPLC中)原料化合物下列实施例V-XIII是按照相当于原料化合物的方法A和B的类似方法制得的表I
除去溶剂后，获得了1.27g(99％，HPLC纯度95％)目标化合物。Rf0.28(环己烷/乙酸乙酯5∶1)MS(EI)270([M]+)HPLC保留时间＝4.78分钟1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ/ppm＝4.97(s，1H)，6.53(t，J＝2Hz，1H)，6.56-6.67(m，2H)，6.85-7.01(m，3H)，7.22(t，J＝8Hz，1H)，7.34(t，J＝8Hz，1H)。
按照相当于方法A、C或D的类似方法制备下列实施例XVIII-XXV表II
按照相当于制备实施例方法A、B和C的类似方法由合适的原料化合物制备下列实施例4-24表3
上述实施例化合物表现出下列1H-NMR光谱表权利要求
1.通式(I)化合物， 其中R1代表氢、C1-C4-烷基、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R2代表卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R3代表C4-C7-烷基，其中所述烷基可被氟或氯取代一次或多次，R4代表氢或卤素，且A代表氧或NH。
2.权利要求1的化合物，其中R1代表氢、氟、氯、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R2代表氟、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R3代表正丁基、正戊基、4，4，4-三氟丁-1-基或5，5，5-三氟戊-1-基，R4代表氢，且A代表氧。
3.权利要求1或2的化合物，其中R1、R2、R3、R4和A具有权利要求1或2所述的含义，且在被R1和R2取代的苯环的4-位有氢原子。
4.权利要求1或2的化合物，其中R1、R2、R3、R4和A具有权利要求1或2所述的含义，且R1和R2在苯环的2和3-位。
5.权利要求1-3任一项的化合物，其中R1、R2、R3、R4和A具有权利要求1-4任一项所述的含义，且A在苯基的c位。
6.制备权利要求1的化合物的方法，其特征在于，在惰性溶剂中，在合适的碱存在下，以及如果适当的话，在相转移催化剂存在下，将通式(II)化合物 其中R1、R2、R3、R4和A具有权利要求1所述含义，与通式(III)化合物反应X1-SO2-R3(III)，其中X1代表合适的离去基团，且R3具有上述含义。
7.根据权利要求6中的通式(II)化合物。
8.用于治疗和/或预防疾病的权利要求1-5任一项的化合物。
9.药物，其中含有至少一种权利要求1-5任一项的化合物和与其混合的至少一种基本上无毒的可药用载体或赋形剂。
10.权利要求1-5任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防疼痛和/或神经变性病症的药物中的应用。
11.权利要求1-5任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防帕金森氏病的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及式(I)烷烃磺酸苯氧基苯基酯，其中A代表氧或NH，且R
文档编号A61K31/255GK1476427SQ01819527
公开日2004年2月18日 申请日期2001年9月13日 优先权日2000年9月26日
发明者M·黑尔, H·梅尔, P·纳尔布, A·维尔斯特, J·－M·－V·德弗里, D·登策尔, F·毛勒, K·卢斯蒂, J·－B·伦费尔斯, , M 黑尔, V 德弗里, ぢ追讯 , 叨, 固, 沟 申请人:拜尔公司
技术领域：
本发明涉及新的烷烃磺酸苯氧基苯基酯，其制备方法，其在制备用于治疗和/或预防疾病、特别是用于治疗疼痛和神经变性病症的药物中的应用。
在大麻类植物(大麻(Cannabis sativa))的成分当中，在药理方面最重要的是Δ9-四氢大麻酚酸(Δ9-THC)，其引起影响人中枢神经系统(CNS)的特发性大麻作用。大麻产品的可能的历史和现在的治疗应用特别包括治疗疼痛、呕吐、厌食、青光眼和运动障碍。
迄今为止，已经鉴定出了大麻素受体的两种亚型和一种剪接变体。CB1和CB2受体具有7个跨膜区域，并属于G蛋白偶联受体家族。CB1受体和剪接变体CB1a主要位于中枢神经系统中。CB2受体主要是在周围组织、尤其是白细胞、脾和巨噬细胞中发现的。
迄今为止，已经公开了大麻素受体激动剂的几类结构典型的大麻素例如Δ9-THC，非典型大麻素例如氨基烷基吲哚和类花生酸(Eicosanoide)。后者包括内源性CB1受体激动剂Anandamid。
WO-A-98/37061、WO-A-00/10967和WO-A-00/10968描述了一些作为大麻素受体激动剂用于治疗神经变性病症的烷烃磺酸芳氧基苯基酯化合物。
U.S.专利3,462,473，Biochem.Pharmacol.1972，21，1127-1134，Fed.Pr0c.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.1971，30，841-847和J.Pharm.Sci.1973，62，1780-1784公开了一些烷烃磺酸对苯氧基苯基酯及其血胆固醇过少或促使血清脂质减少的作用。
此外，一些烷烃磺酸苯氧基苯基酯化合物及其作为除草剂(1)、抗微生物剂(2)、润滑剂(3)、热敏纸的敏化剂(4)和合成中间体(5)的应用是已知的(1)EP-A-0 023 725；U.S.-A-3,929,903；U.S.-A-4,415,354；Chem.Abstr.1979，91，175034(JP-A-54066631)；Chem.Abstr.1981，94，156552(JP-A-55154953)；Chem.Abstr.1981，95，168773(JP-A-56046859)；Chem.Abstr.1981，95，168789(JP-A-56079665)；Chem.Abstr.1989，111，2678(JP-A-63104903)；(2)DE-A-14 93 776；DE-A-21 31 754；U.S.-A-3,629,477；U.S.-A-3,772,445；U.S.-A-3,850,972；CH-B-450 347；CH-B-459 656；Chem.Abstr.1975，83，72725(JP-B-50003375)；(3)U.S.-A-3,346,612；(4)U.S.-A-4,837,197；(5)Chem.Abstr.1997，127，26629 (JP-A-09087210)；Tetrahedr.1990，46.4161-4164，J.Am.Chem.Soc.1998，39，435-436。
本发明的目的是提供具有改善的作用的大麻素受体激动剂。
本发明的新化合物实现了该目的。
因此，本发明涉及通式(I)新化合物， 其中R1代表氢、C1-C4-烷基、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R2代表卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R3代表C4-C7-烷基，其中所述烷基可被氟或氯取代一次或多次，R4代表氢或卤素，且A代表氧或NH。
本发明化合物可以以立体异构的形式存在，它们成像和镜像关系(对映异构体)，或者不成像和镜像关系(非对映异构体)。本发明涉及对映异构体和非对映异构体及其各自的混合物。这些对映异构体和非对映异构体的混合物可以用已知的方式拆分为立体异构的单一组分。
本发明的化合物还可以以其盐的形式存在。一般来说，可以在此处提及的为与有机或无机碱或酸形成的盐。
在本发明中，优选生理可接受的盐。本发明化合物的生理可接受盐可以是本发明物质与无机酸、羧酸或磺酸形成的盐。例如，特别优选的实例是与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、枸椽酸、富马酸、马来酸或苯甲酸形成的盐。
生理可接受盐还可以是本发明化合物的金属盐或铵盐。例如，特别优选钠、钾、镁或钙盐，以及由氨或有机胺衍生的铵盐，例如，有机胺为乙胺、二乙胺和三乙胺、二乙醇胺和三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、精氨酸、赖氨酸、乙二胺或2-苯基乙胺。
本发明还包括可通过烷基化反应由游离的胺转化制备的铵化合物。
在本发明中，取代基一般具有下列含义在本发明范围内，(C1-C4)-烷基代表具有1-4个碳原子的直链或支链烷基。可提及的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。在本发明范围内，(C4-C7)-烷基代表具有4-7的碳原子的直链或支链烷基。可提及的实例是正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、正戊基、己基或庚基。正丁基、正戊基和正己基是优选的。
在本发明范围内，卤素包括氟、氯、溴和碘。氯或氟是优选的。
定义如下的通式(I)化合物是优选的，其中R1代表氢、氟、氯、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R2代表氟、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R3代表正丁基、正戊基、4，4，4-三氟丁-1-基或5，5，5-三氟戊-1-基，R4代表氢，且A代表氧。
定义如下的通式(I)化合物是特别优选的，其中R1、R2、R3、R4和A具有上述含义，且在被R1和R2取代的苯环的4-位有氢原子。
这样的化合物可通过下式表示
定义如下的通式(I)化合物是非常特别优选的，其中R1、R2、R3、R4和A具有上述含义，且R1和R2在苯环的2和3-位。
R1和R2在苯环上的位置可通过下式表示 定义如下的通式(I)化合物也是非常特别优选的，其中R1、R2、R3、R4和A具有上述含义，且A在苯基的c-位。
A在苯环上的位置通过下式表示 定义如下的通式(I)化合物是非常特别优选的，其中R1、R2、R3、R4和A具有上述含义，R1和R2在苯环的2和3-位，且A在苯基的c-位。
R1、R2和A的位置可通过下式表示 或 此外，已经发现了制备通式(I)化合物的方法，其特征在于在惰性溶剂中，在合适的碱存在下，以及如果适当的话，在相转移催化剂存在下，将通式(II)化合物 其中R1、R2、R4和A具有上述含义，与通式(III)化合物反应X1-SO2-R3(III)，其中X1代表合适的离去基团，且R3具有上述含义。
通式(II)化合物是新的，并且可以按照类似于通常已知的方法的方法以下述方式制得首先在惰性溶剂中，在合适的碱存在下，以及如果适当的话在铜(I)或铜(II)化合物存在下，将通式(IV)化合物与通式(V)化合物反应 其中R1、R2和R4具有上述含义，a)Y代表羟基，且X代表合适的离去基团，或者相反b)Y代表合适的离去基团，且X代表羟基，且E代表硝基或式-O-R5所示基团，其中R5代表合适的羟基保护基，以生成通式(VI)化合物 其中R1、R2、R4和E具有上述含义，然后，[A]当E代表硝基时，在合适的条件下通过常规方法将其还原，以获得通式(IIa)化合物 其中R1、R2和R4具有上述含义，或者[B]当E代表式-O-R5所示基团时，在合适的条件下通过常规方法除去保护基R5，以生成通式(IIb)化合物 其中R1、R2和R4具有上述含义。
通式(II)化合物还可以这样制得在惰性溶剂中，在合适的碱存在下，以及如果适当的话在铜(I)或铜(II)化合物存在下，将通式(IV)化合物与通式(VII)化合物反应 其中R1、R2、R4、A、X和Y具有上述含义。
本发明方法可通过下述反应路线图表示 在本发明中，惰性溶剂是在所选的反应条件下不改变或仅有轻微改变的溶剂。
适用于方法(II)+(III)→(I)的惰性溶剂是例如醚，例如乙醚、乙二醇一甲醚或二甲醚、二氧杂环己烷或四氢呋喃，或烃，例如苯、甲苯、二甲苯、环己烷或石油馏分或卤代烃，例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳，或二甲亚砜，二甲基甲酰胺、六甲基磷三酰胺、乙酸乙酯、吡啶、三乙胺或甲基吡啶。还可以使用所述溶剂的混合物，如果适当的话与水混合。二氯甲烷、二氯甲烷/水、四氢呋喃、二氧杂环己烷和二氧杂环己烷/水是特别优选的。
适于反应(II)+(III)→(I)的碱是有机胺，特别是三-(C1-C6)-烷基胺，例如三乙胺或二异丙基乙胺或杂环，例如吡啶、甲基哌啶、哌啶或N-甲基吗啉，碱金属和碱土金属氢氧化物或碳酸盐，例如氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾或醇化物，例如甲醇钠或乙醇钠。三乙胺、吡啶和氢氧化钠是优选的。
各按通式(II)化合物的量为1摩尔计，碱通常以0.1摩尔-5摩尔的量、优选1摩尔-3摩尔的量使用。
如果适当的话，方法(II)+(III)→(I)也可以在相转移催化剂存在下进行。例如，季铵盐，优选溴化四丁基铵是合适的相转移催化剂。
合适的离去基团X1是例如卤素，优选氯。
这些反应可在常压下进行，但是也可以在升压下或减压条件下(例如0.5-3巴)进行。通常在常压下反应。
方法(II)+(III)→(I)在0℃-100℃、优选0℃-30℃的温度下进行。
已被证实适于方法(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VII)→(II)的惰性溶剂的实例是下列溶剂有机溶剂，例如醚，如乙醚、乙二醇一甲醚或二甲醚、二氧杂环己烷或四氢呋喃，或烃，例如苯、甲苯、二甲苯、环己烷或石油馏分或卤代烃，例如二氯甲烷、氯仿、四氯化碳，或二甲亚砜，二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、六甲基磷三酰胺、乙酸乙酯、吡啶、三乙胺或甲基吡啶。还可以使用所述溶剂的混合物，如果适当的话与水混合。吡啶、N-甲基吡咯烷酮、二甲基甲酰胺和二甲亚砜是特别优选的。
如果适当的话，方法(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VII)→(II)也可以在铜(I)或铜(II)化合物存在下进行。碘化铜(I)和氧化铜(II)是优选的。
适于方法(IV)+(V)→(VI)和(IV)+(VII)→(II)的碱是碱金属碳酸盐和碳酸氢盐，特别是碳酸钠和碳酸钾，碱金属氢氧化物，特别是氢氧化钠，或有机胺，特别是三-(C1-C6)-烷基胺，例如三乙胺。氢氧化钾、氢氧化钠和碳酸钾是特别优选的。
各按通式(IV)或(V)化合物的量为1摩尔计，碱通常以0.1摩尔-5摩尔的量、优选1摩尔-3摩尔的量使用。
在方法(IV)+(V)→(VI)变型a)中的合适离去基团X或方法(IV)+(V)→(VI)变型b)中的合适离去基团Y是例如卤素或磺酸酯基例如三氟甲磺酸酯。氟、氯或溴是优选的。
这些反应可在常压下进行，但是也可以在升压下或减压条件下(例如0.5-5巴)进行。通常在常压下反应。
这些反应在20℃-200℃、优选100℃-160℃的温度下进行。
关于步骤(VI)→(IIa)还原芳族硝基的方法是已知的(例如R.C.Larock，″Comprehensive Organic Transformations″，New York，1989，411-415页以及其中所引用的文献)。
引入羟基保护基及其除去方法是已知的(例如T.W.Greene，P.G.M.Wuts，″Protective Groups in Organic Synthesis″，2ndEd.，NewYork，1991以及其中所引用的文献；J.Org.Chem.1999，64，9719-9721)。
对于反应(IV)+(V)→(VI)→(IIb)，合适的保护基R5的实例有甲基、苄基、烯丙基、甲氧基甲基、2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基或三甲基甲硅烷基。甲基和苄基是优选的。
通式(III)化合物可商购获得，是文献中已知的，或者可按照类似于文献中已知的方法合成(参见例如J.Chem.Soc.C1968，1265；Chem.Ber.1967，100，1696；氟代烷烃磺酰氯可按照例如WO-A-98/37061或DE-A-19 422 64中描述的方法制得)。
通式(IV)、(V)和(VII)化合物是已知的或者可按照已知方法制得。
通式(IV)和(V)化合物可商购获得，是文献中已知的，或者可按照类似于文献中已知的方法合成(参见例如J.March，″AdvancedOrganic Chemistry″，4thEd.，Wiley，1992，531-534页和1295以及其中所引用的文献；Synthesis 1990，1145-1147)。
令人惊奇的是，本发明化合物表现出有价值的不可预测到的药理作用谱。
它们的突出之处在于，它们是高效的大麻素受体激动剂，具有高的代谢稳定性和高的口服生物利用度。因此它们特别适于口服治疗。
它们可单独使用，或者与用于预防和治疗下列疾病的其它药物联合使用急性和/或慢性疼痛(关于分类参见″Classification ofChronic Pain，Descriptions of Chronic Pain Syndromes andDefinitions of Pain Terms″，第2版，Meskey and Begduk，Hrsg.；IASP-Press，Seattle，1994)和神经变性疾病，特别是癌症引起的疼痛和慢性神经病性疼痛，例如与神经病性糖尿病、带状疱疹后神经痛、周围神经损害、中枢疼痛(例如脑缺血所致的中枢疼痛)和三叉神经痛有关的慢性疼痛，和其它慢性疼痛，例如腰痛、背痛(低背痛)或风湿性疼痛。此外，这些物质还适于治疗任何起源的原发性急性疼痛和由其导致的继发性疼痛，以及用于治疗以前是急性的、但是已变成慢性的疼痛。
适于与本发明化合物联合使用来治疗急性和/或慢性疼痛的药物是例如镇静剂，如曲马多、吗啉、双氢可待因、右旋丙氧吩，三环类抗抑郁剂，例如阿米替林，抗惊厥剂，例如卡马西平、加巴喷丁，非甾族抗炎药物(NSAID)例如阿司匹林、布洛芬、萘普生，包括COX-2抑制剂；例如Rofecoxib、Celecoxib。
本发明化合物还适于治疗脑的原发性和/或继发性病症，例如脑血管痉挛期间或之后、偏头痛、痉挛状态、开始原因不明的低氧症或缺氧症、周期性窒息、自身免疫性疾病、可与脑损害有关的代谢和器质性病症、和作为原发性脑病症例如癫痫和动脉粥样硬化和/或动脉硬化性改变的后果的脑损害。本发明化合物也适于治疗慢性或精神病病症，例如抑郁症、胃溃疡、神经变性病症，例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病或亨廷顿氏舞蹈病、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、由于急性和/或慢性病毒或细菌感染引起的神经变性和多梗塞性痴呆。
它们也可用于治疗下列疾病的药物中呕吐、恶心、青光眼、哮喘、厌食、惊厥、风湿病、镇静和运动性病症。
本发明的物质还适于治疗细菌和/或病毒感染引起的疾病，这些疾病基于免疫系统的直接和/或间接的改变或基于免疫系统参与的免疫调节障碍，例如，局部或系统性自身免疫性疾病(例如，所有变型的红斑狼疮)、炎症和/或与自身免疫有关的关节疾病(例如，类风湿性关节炎、与外伤有关的炎症)、与炎症和/或自身免疫有关的骨骼和肌肉系统疾病、与炎症和/或自身免疫有关的内部器官的病理过程(如局限性回肠炎、肾小球性肾炎)、外部器官的病理过程(如由于在空气中吸入抗原造成的过敏反应)、中枢神经系统的病理过程(如多发性硬化、早老性痴呆、神经病)、及感觉器官的病理过程、造血系统的原发性和/或继发性和/或自身免疫性疾病的病理过程以及免疫系统本身的病理过程(如排斥反应、AIDS)、还有人或动物炎症和/或免疫性皮肤病。这些物质还作用于这些疾病的间接症状，如疼痛。
本发明化合物优选用于治疗疼痛、痉挛、脑缺血和颅脑创伤。
可通过下列生物测定来证实本发明化合物在体外对大麻素受体的作用1.大鼠CB1萤光素酶报道基因测试通过WO-A-98/37061第55页及以下中描述的方法制备大鼠CHOCB1报道细胞系的贮备培养物。
使用下述测试方案进行物质筛选在37℃、10％二氧化碳下，将贮存培养物在含有10％FCS的50％Dulbecco改性Eagle培养基/50％F-12(DMEM/F12)中培养，2至3天后每种情况都1∶10分裂。将测试培养物以每孔5000个细胞接种到96-孔板中，并在37℃培养70小时。然后，用磷酸缓冲盐水小心洗涤此培养物，并用不含血清的Ultra-CHO培养基(Bio-Whittaker)重新配制。将溶解于DMSO中的测试物在培养基中进行1×稀释，并吸移到测试培养物中(在测试混合物中DMSO的最大浓度为0.5％)。20分钟后，加入毛喉萜，然后将此培养物在培养箱中于37℃培养3小时。然后，除去上清液并通过加入25μl溶解试剂(25mM三磷酸盐，pH7.8，含有2mM DTT，10％甘油，3％Triton×100)将细胞溶解。之后立即加入萤光素酶底物溶液(2.5mM ATP，0.5mM荧光素，0.1mM辅酶A，10mM麦黄酮(Tricin)，1.35mM硫酸镁，15mM DTT，pH7.8)，简单地摇动并用Hamamatzu照相系统检测萤光素酶活性。
为了灭活G1蛋白，测试前用5ng/ml(终浓度)的百日咳毒素将测试培养物处理16小时。
用GraphPadPrismTM程序(Hill方程，特别针对一点竞争)计算IC50值。
在该测试中，实施例17表现出的IC50为0.81nM。2.hCB2萤光素酶报道基因测试用人CB2受体将CHOluc9细胞稳定地转染。转染、克隆选择和测试进行是按照类似于大鼠CB1受体的操作进行的。使用下述测试方案来测定细胞的药理特征和进行物质测试在37℃、10％二氧化碳下，将贮存培养物在含有10％FCS的50％Dulbecco改性Eagle培养基/50％F-12(DMEM/F12)中培养，2至3天后每种情况都1∶10分裂。在含有5％FCS的DMEM/F12培养基中将测试培养物以每孔5000个细胞接种到96-孔板中，并于37℃培养70小时。然后，取出培养物，用不含血清的Ultra-CHO培养基(Bio-Whittaker)替代。将溶解于DMSO(200×终浓度)中的所述物质吸移到测试培养物中(在测试混合物中DMSO的最大浓度为0.5％)。20分钟后，加入毛喉萜，然后将此培养物在培养箱中于37℃培养3.5小时。然后，除去上清液并通过加入25μl溶解试剂(25mM三磷酸盐，pH7.8，含有2mMDTT，10％甘油，3％Triton×100)将细胞溶解。之后立即加入50μl浓度成双倍的萤光素酶底物溶液(5mM ATP，1mM荧光素，0.2mM辅酶A，10mM麦黄酮，1.35mM硫酸镁，15mM DTT，pH7.8)，简单地摇动并用光电倍增管照相测定系统(Hamamatsu)检测萤光素酶活性。
用GraphPadPrismTM程序(Hill方程，特别针对一点竞争)计算IC50值。3.与大鼠皮层膜结合通过标准方法由不同的组织和细胞制备膜蛋白。通过吸移将缓冲液、标记的配位体、DMSO或测试物混合在一起，然后加入100μg蛋白，将该混合物充分混合，并在30℃的水浴中培养60分钟。该培养时间结束后，通过向每个管中加入冰冷的培养缓冲液来停止该反应。过滤，然后用3/4ml培养缓冲液洗涤。将滤器转移到小瓶(minivials)内，并在液体闪烁计数器中测定放射性。
可在下列体外测定中发现本发明化合物的代谢稳定性4.微粒体稳定性测定可在大鼠肝脏微粒体中测定本发明化合物的代谢稳定性(按照类似于J.Pharmacol.Exp.Ther.1997，283.46-58中描述的方法)。
为了测定微粒体稳定性和外推出由于肝脏的首过效应(first-pass)(一期反应)所致的最大可能生物利用度(Fmax)，加入辅因子，将测试物以低浓度与微粒体蛋白于37℃培养15分钟。
培养和取样是在得自Canberra Packard的改进的自动吸移器上进行的。
通过与WO-A-98/37061的实施例相比可发现，本发明化合物在该测试中具有更强的代谢稳定性表1
可通过下列方法在体内测定本发明化合物的生物利用度以及其它药动学参数5.在大鼠中的药动学a)静脉内输注用15分钟将测试物经由侧尾静脉中的Braunüle直接输注到血流内。使用校准的20ml注射器来准确地施用所选的剂量和体积。使用Braun Melsungen No.152440/1泵来进行输注。b)口服给药通过管饲法将测试物作为大丸剂施用。c)取样和后处理血液和血浆从插入导管的动物(颈静脉)采集血样并置于肝素化的管中。将血液离心，并以合适的方法制备血浆以进行分析(LC-MS-MS)。将血浆在＜-15℃贮存直至分析。d)药动学结果微粒体数据(大鼠肝脏微粒体)预测最高达100％的最大可能利用度。
从体内实验(大鼠)得到的实施例22的药动学参数是口服数据(剂量3mg/kg)AUC标准0.102kg*h/l，C最大，标准0.0198kg/l，t最大2.29h，t1/22.36h，F33％。静脉内给药数据(剂量0.3mg/kg)AUC标准0.307kg*h/l，C最大，标准0.5978kg/l，Vss4.121/kg，t1/21.6h。
它们在本文中的含义是AUC标准血浆浓度/时间曲线下的标准化至1mg/kg剂量的面积；C最大，标准标准化至1mg/kg剂量的单次给药后的最大血浆浓度；t最大单次给药后的达到最大血浆浓度的时间；t1/2最终的半衰期；F生物利用度；这里，是与可全身利用的静脉内施用的剂量相比所获得的百分比；Vss在稳定状态的表观分布体积。
本发明化合物的体内作用可在例如下列动物模型中证实6.降体温(大鼠)在大鼠降体温测定中测试对CB1受体的体内激动作用。
通过食管温度探针测定基础体温5分钟后，将测试物给药(口服给药)。对照组仅口服接受测试物的溶剂(Cremophors EL 1-10％+蒸馏水)。口服给药120和240分钟后测定体温。每一剂量的组大小是5-7只动物(大鼠)。大鼠降体温激动测试
a)将体温降低1℃的有效剂量可在下列动物模型中证实本发明化合物治疗疼痛的适当性7.大鼠坐骨神经分支的轴突切开术(Axotomie vonIschiasverzweigungen)(慢性疼痛模型)在戊巴比妥麻醉下，将坐骨神经的三叉暴露，将邻近轴突切开位点的神经结扎后，把腓骨和胫骨神经分支的轴突切开。对照动物接受假手术。手术后，轴突切开的动物发展成慢性机械性痛觉过敏。借助于压力传感器(electronic von Frey anesthesiometer，IITC Inc.-Life Science Instruments，Woodland Hills，CA.，USA)测试该痛觉过敏，与假手术的动物相比。
在疼痛测试之前在不同时间通过不同的给药途径(i.v.、i.p.、口服、i.t.、i.c.v.、透皮)施用测试物。
实施例22的化合物以1mg/kg的最小有效口服剂量(测试前60分钟快速给药)减轻了模型中的痛觉过敏。
本发明化合物例如治疗神经变性病症的适当性可在大鼠持久病灶性脑缺血模型(MCA-O)或大鼠硬膜下血肿模型(SDH)(WO-A-98/37061，p.60及以下)中证实。
可通过已知方法，使用惰性无毒可药用载体或溶剂将本发明的新活性物质转化成常规制剂，例如片剂、包衣片剂、丸剂、粒剂、气雾剂、糖浆剂、乳剂、悬浮液和溶液。在这些制剂中，治疗活性化合物应当分别以占整个混合物重量约0.5-90％的浓度存在，也就是说，以足以达到所规定的剂量范围的量存在。
制剂是通过用溶剂和/或载体，如果适当的话使用乳化剂和/或分散剂将活性物质扩展来制得的，例如当使用水作为稀释剂时，如果适当的话可使用有机溶剂作为辅助溶剂。
给药是以常规方法进行，优选通过口服、透皮或非胃肠道给药途径进行，特别是经舌或静脉内给药。然而，还可以通过经由口或鼻子吸入，例如借助于喷雾经由口或鼻子吸入来进行，或者经由皮肤局部给药。
通常，已经证实，对于口服给药，为了获得有效结果，施用约0.001-10mg/kg、优选约0.005-1mg/kg体重的量是有利的。
然而，如果适当的话，可能必须偏离所述的量，这特别取决于体重和给药途径，个体对药物的反应，制剂的性质以及进行给药的时间或间隔。因此，在某些情况下，使用低于上述最小量的剂量可能就已足够，而在另外一些情况下，必须超过上述最大的量。在更大量施用的情况下，在一天期间将这些剂量分成几个单独剂量可能是合适的。
通过HPLC原料化合物和制备实施例的保留时间是在下列条件下测定的柱Kromasil C18 60*2；注射体积1.00μl；流速0.75ml/分钟；洗脱剂A＝0.01M aq H3PO7，B＝CH3CN；梯度[t(分钟):A/B)]0:90/10；0.5:90/10；4.5:10/90；6.5:10/90；7.5:90/10。缩写aq. 含水的CH 环己烷TLC 薄层色谱法DCI 直接化学电离(在MS中)DCM 二氯甲烷EA 乙酸乙酯EI 电子冲击电离(在MS中)ESI 电子喷雾电离(在MS中)HPLC高压-，高效液相色谱法Me 甲基MW 分子量MS 质谱NMR 核磁共振色谱法Rf保留指数(在TLC中)Rt保留时间(在HPLC中)原料化合物下列实施例V-XIII是按照相当于原料化合物的方法A和B的类似方法制得的表I
除去溶剂后，获得了1.27g(99％，HPLC纯度95％)目标化合物。Rf0.28(环己烷/乙酸乙酯5∶1)MS(EI)270([M]+)HPLC保留时间＝4.78分钟1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ/ppm＝4.97(s，1H)，6.53(t，J＝2Hz，1H)，6.56-6.67(m，2H)，6.85-7.01(m，3H)，7.22(t，J＝8Hz，1H)，7.34(t，J＝8Hz，1H)。
按照相当于方法A、C或D的类似方法制备下列实施例XVIII-XXV表II
按照相当于制备实施例方法A、B和C的类似方法由合适的原料化合物制备下列实施例4-24表3
上述实施例化合物表现出下列1H-NMR光谱表权利要求
1.通式(I)化合物， 其中R1代表氢、C1-C4-烷基、卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R2代表卤素、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R3代表C4-C7-烷基，其中所述烷基可被氟或氯取代一次或多次，R4代表氢或卤素，且A代表氧或NH。
2.权利要求1的化合物，其中R1代表氢、氟、氯、甲基、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R2代表氟、三氟甲基、三氟甲氧基、氰基或硝基，R3代表正丁基、正戊基、4，4，4-三氟丁-1-基或5，5，5-三氟戊-1-基，R4代表氢，且A代表氧。
3.权利要求1或2的化合物，其中R1、R2、R3、R4和A具有权利要求1或2所述的含义，且在被R1和R2取代的苯环的4-位有氢原子。
4.权利要求1或2的化合物，其中R1、R2、R3、R4和A具有权利要求1或2所述的含义，且R1和R2在苯环的2和3-位。
5.权利要求1-3任一项的化合物，其中R1、R2、R3、R4和A具有权利要求1-4任一项所述的含义，且A在苯基的c位。
6.制备权利要求1的化合物的方法，其特征在于，在惰性溶剂中，在合适的碱存在下，以及如果适当的话，在相转移催化剂存在下，将通式(II)化合物 其中R1、R2、R3、R4和A具有权利要求1所述含义，与通式(III)化合物反应X1-SO2-R3(III)，其中X1代表合适的离去基团，且R3具有上述含义。
7.根据权利要求6中的通式(II)化合物。
8.用于治疗和/或预防疾病的权利要求1-5任一项的化合物。
9.药物，其中含有至少一种权利要求1-5任一项的化合物和与其混合的至少一种基本上无毒的可药用载体或赋形剂。
10.权利要求1-5任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防疼痛和/或神经变性病症的药物中的应用。
11.权利要求1-5任一项的化合物在制备用于治疗和/或预防帕金森氏病的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及式(I)烷烃磺酸苯氧基苯基酯，其中A代表氧或NH，且R
文档编号A61K31/255GK1476427SQ01819527
公开日2004年2月18日 申请日期2001年9月13日 优先权日2000年9月26日
发明者M·黑尔, H·梅尔, P·纳尔布, A·维尔斯特, J·－M·－V·德弗里, D·登策尔, F·毛勒, K·卢斯蒂, J·－B·伦费尔斯, , M 黑尔, V 德弗里, ぢ追讯 , 叨, 固, 沟 申请人:拜尔公司
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