一种强抗氧化活性的组合物及其应用的制作方法
专利名称：一种强抗氧化活性的组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种仿刺参多肽(Apostichopus japonicus)和香菇 (Lentinulaedodes)多糖的组合物及其制备方法，特别是仿刺参多肽作为功能性食品在抗 氧化，延缓衰老方面的应用；以及香菇多糖对仿刺参肽抗氧化活性的促进作用和香菇多糖 本身在增强机体免疫力方面的功能。
背景技术：
生物体内自由基可与DNA、蛋白质和多不饱和脂肪酸作用，造成DNA链氧化性损 伤、蛋白质-蛋白质交换、蛋白质-DNA交联和脂质过氧化。脂质过氧化是造成生物体氧化 损伤的主要原因，可以引发各种心血管疾病、癌症与老化现象。仿刺参多肽具有较强的总抗氧化活性，分子量在500 3000Da范围内的多肽都具 有抗氧化性，能清除生物体内自由基，保护生物体膜生物大分子免受损害，延缓衰老。而且， 仿刺参酶解液中还含有丰富的仿刺参多糖、仿刺参皂苷等多种生物活性物质。刺参多糖主 要分为两类一类是糖胺聚糖，即黏多糖；另一类是岩藻多糖，是由L-岩藻糖构成的直链多 糖。刺参多糖具有抗凝血、抗癌、增强免疫力、延缓衰老、降血脂等功效；刺参的皂苷元为仿 刺参留烷醇，是仿刺参特有的皂苷元。刺参中还存在非仿刺参留烷醇三萜类苷元，主要为刺 参苷A、A1及C。刺参皂苷的主要活性有抗肿瘤及免疫调解、溶血作用、抗菌作用等；香菇多糖(Lentinan，LNT)是一种天然人体免疫调节剂，具有抗肿瘤、抗感染和调 节免疫力等作用。香菇浸提液中除了含有香菇多糖，还含有较为丰富的氨基酸，其中有组氨 酸、谷氨酸、丙氨酸等18种氨基酸，其中人体必需氨基酸就有7种。香菇中还含有香菇素、 胆碱、亚油酸、香菇多糖及30多种酶。这些营养成分对脑功能的正常发挥有重要的促进作 用。
发明内容
本发明将海洋来源的仿刺参多肽与陆地来源的香菇多糖相结合提供了一种安全、 无毒副作用的强抗氧化活性的组合物。本发明采用南京建成生物工程研究所试剂盒(T-AOC)测定酶解液总抗氧化活性。 结果发现木瓜蛋白酶水解后的仿刺参酶解液抗氧化活性明显增强，由最初的10. 08单位/ mg蛋白增至27. 59单位/mg蛋白；将无抗氧化活性的香菇多糖浸提液按照不同比例和仿刺 参酶解液混合后，组合物的抗氧化活性进一步提升，当仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液质 量比为1 100时，抗氧化活性达到最高值84. 09单位/mg蛋白，相应对照组的抗氧化活性 则为47. 54单位/mg蛋白。研究结果表明木瓜蛋白酶水解可以增强仿刺参的抗氧化活性， 而香菇多糖浸提液又可进一步增强仿刺参酶解产物的抗氧化活性。本发明可用于具有增强 机体抗氧化活性、延缓衰老的功能性食品的开发。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种强抗氧化活性的组合物，包括仿刺参多肽和香菇多糖，它们间质量比是
31 1-100 ；最好为 1 6-32。所述仿刺参多肽为仿刺参的蛋白酶酶解液(又可称之为仿刺参酶解液)，按照下 述方法制备仿刺参勻浆后加1-5倍质量的水调pH4. 8-6. 2，加入仿刺参质量的木瓜 蛋白酶，50-70°C酶解2-5h，85-100°C水浴15_30min，降至室温后4000r/min离心15min，取 上清液为仿刺参酶解液；所述香菇多糖为香菇水的浸提液(又可称之为香菇多糖浸提液)，按照下述方法 制备的干燥香菇粉碎后加入20-50倍质量的水，80-100°C水浴浸提100-200min，过滤，滤 液即为香菇多糖浸提液；仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液体积比是1 0.1-5;最好为1 0.25-4。所述组合物配制时，将上述二种物质按不同比例混合均勻即可。本发明的优点是将来源于海八珍之一的仿刺参与来源于陆地的被称为“植物皇 后”的香菇结合作为保健食品，具有较好的抗氧化活性。本发明将仿刺参多肽的多种保健功能(易消化吸收，生物效价高；抗氧化，延缓衰 老；降血压，预防心脑血管疾病抗疲劳，增强体力；提高免疫力，抗肿瘤等)，与香菇多糖的 多种保健功能(提高人体免疫力，抗癌；缓解便秘、消化不良症等)有效地结合，使海洋来源 的仿刺参多肽与陆地来源的香菇多糖的保健功能达到互进互补的作用。尤其是，香菇多糖 在仿剌参多肽总抗氧化活性方面的促进作用相当明显，为开发具有增强机体抗氧化活性、 延缓衰老的功能性食品提供了依据。
具体实施例方式本发明实施例中木瓜蛋白酶采用国药集团化学试剂有限公司产品，酶活性 彡6000，ρΗ4· 8-6. 2，水分彡6. 0% ；仿刺参、香菇购于烟台本地。所述的仿刺参多肽(即实验组仿刺参酶解液)是按照下述方法制备的仿刺参勻 浆后加3倍质量的水，并调ρΗ5. 5，加入2%仿刺参质量的木瓜蛋白酶，55°C酶解:3h，90°C水 浴15min，降至室温后4000r/min离心15min，取上清液得实验组仿刺参酶解液。实验组仿 刺参酶解液蛋白量为89. 87 μ g/ml。对照组仿刺参酶解液仿刺参勻浆后加3倍质量的水，并调pH5. 5，加入2%仿刺参 质量经高温灭活的木瓜蛋白酶，55°C酶解:3h，90°C水浴15min，降至室温后4000r/min离心 15min，取上清液得对照组仿刺参酶解液。对照组仿刺参酶解液蛋白含量为212. 9μ g/ml。所述香菇多糖是按照下述方法制备的干燥香菇粉碎后加入30倍质量的水， 90°C水浴浸提150min，过滤，滤液即为香菇多糖浸提液。香菇多糖浸提液中多糖含量为 2962 μ g/ml。实施例1分别取实验组仿刺参酶解液和对照组仿刺参酶解液，以及香菇多糖浸提液，采用 南京建成生物工程研究所试剂盒(T-AOC)测定酶解液总抗氧化活性。结果发现实验组仿刺参酶解液总抗氧化活性为27. 59单位/mg蛋白；对照组仿刺参酶解液总抗氧化活性为10. 08单位/mg蛋白，木瓜蛋白酶水解产物 可显著提高仿刺参的抗氧化活性。而香菇多糖浸提液总抗氧化活性则几乎为0。
4
实施例2取細1实验组仿刺参酶解液和Iml香菇多糖浸提液混合。此时测得实验组混合 液中蛋白含量为99.36口8/1111，多糖含量592.4口8/1111(质量比为1 6)。参照实例1方法 测定抗氧化活性。结果表明实验组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液4 1混合物总抗氧化活性为 35. 02单位/mg蛋白；同样取細1对照组仿刺参酶解液和Iml香菇多糖浸提液混合.此时测得混合液 中蛋白含量为218.22“8/1111，多糖含量592.4“8/1111(质量比为1 2.7)。参照实例1方 法测定抗氧化活性。结果表明对照组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液4 1混合物总抗氧化活性为 13. 93单位/mg蛋白；实施例3取2. 5ml实验组仿刺参酶解液和2. 5ml香菇多糖浸提液混合。此时测得实验组 混合液中蛋白含量为107. 88 μ g/ml，多糖含量1481 μ g/ml (质量比为1 13.7)。参照实 例1方法测定抗氧化活性。结果表明实验组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液1 1混合物总抗氧化活性为
47.54单位/mg蛋白；同样取細1对照组仿刺参酶解液和Iml香菇多糖浸提液混合.此时测得混合液 中蛋白含量为180. 7 μ g/ml，多糖含量1481 μ g/ml (质量比为1 8.2)。参照实例1方法 测定抗氧化活性。结果表明对照组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液1 1混合物总抗氧化活性为 26. 64单位/mg蛋白。实施例4取1. Oml实验组仿刺参酶解液和4. Oml香菇多糖浸提液混合。此时测得实验组 混合液中蛋白含量为73. 73 μ g/ml，多糖含量2369. 6 μ g/ml (质量比为1 32)。参照实例 1方法测定抗氧化活性。结果表明实验组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液1 1混合物总抗氧化活性为 84. 09单位/mg蛋白；同样取1. Oml对照组仿刺参酶解液和4. Oml香菇多糖浸提液混合.此时测得混 合液中蛋白含量为120. 38 μ g/ml，多糖含量2369. 6 μ g/ml (质量比为1 19.7。参照实例 1方法测定抗氧化活性。结果表明对照组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液1 4混合物总抗氧化活性为
48.7单位/mg蛋白。
权利要求
1.一种强抗氧化活性的组合物，其特征在于包括仿刺参多肽和香菇多糖，它们质量 比是 1 1-100。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于仿刺参多肽和香菇多糖的质量比是 1 6-32。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述仿刺参多肽为仿刺参的蛋白酶酶解液，按照下述方法制备仿刺参勻浆后加 1-5倍质量的水调pH4. 8-6. 2，加入1_3 %仿刺参质量的木瓜蛋白酶，50_70°C酶解2_5h， 85-100°C水浴15-30min，降至室温后离心，取上清液为仿刺参酶解液；所述香菇多糖为香菇水的浸提液，按照下述方法制备的干燥香菇粉碎后加入20-50 倍质量的水，85-120°C水浴浸提100-200min，过滤，滤液即为香菇多糖浸提液；仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液体积比是1 0.1-5。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液体积 比是 1 0. 25-4。
5.一种权利要求1所述组合物可用于制备具有增强机体抗氧化活性延缓衰老的功能 性食品或药物。
全文摘要
本发明涉及一种强抗氧化活性的组合物，包括仿刺参多肽和香菇多糖，它们间的质量比是1∶1-100。采用南京建成生物工程研究所试剂盒(T-AOC)测定酶解液总抗氧化活性。结果发现木瓜蛋白酶水解后的仿刺参酶解液抗氧化活性明显增强，由最初的10.08单位/mg蛋白增至27.59单位/mg蛋白；将无抗氧化活性的香菇多糖浸提液按照不同比例和仿刺参酶解液混合后，组合物的抗氧化活性可进一步提升。当仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液体积比为1∶4时，抗氧化活性达到最高值84.09单位/mg蛋白，相应对照组的抗氧化活性则为47.54单位/mg蛋白。研究结果表明木瓜蛋白酶水解可以增强仿刺参的抗氧化活性，而香菇多糖浸提液又可进一步增强仿刺参酶解产物的抗氧化活性。本发明可用于具有增强机体抗氧化活性、延缓衰老的功能性食品的开发。
文档编号A61K38/02GK102100324SQ20091025570
公开日2011年6月22日 申请日期2009年12月18日 优先权日2009年12月18日
发明者夏传海, 李成华, 秦松, 陈爱芹 申请人:烟台海岸带可持续发展研究所
技术领域：
本发明涉及一种仿刺参多肽(Apostichopus japonicus)和香菇 (Lentinulaedodes)多糖的组合物及其制备方法，特别是仿刺参多肽作为功能性食品在抗 氧化，延缓衰老方面的应用；以及香菇多糖对仿刺参肽抗氧化活性的促进作用和香菇多糖 本身在增强机体免疫力方面的功能。
背景技术：
生物体内自由基可与DNA、蛋白质和多不饱和脂肪酸作用，造成DNA链氧化性损 伤、蛋白质-蛋白质交换、蛋白质-DNA交联和脂质过氧化。脂质过氧化是造成生物体氧化 损伤的主要原因，可以引发各种心血管疾病、癌症与老化现象。仿刺参多肽具有较强的总抗氧化活性，分子量在500 3000Da范围内的多肽都具 有抗氧化性，能清除生物体内自由基，保护生物体膜生物大分子免受损害，延缓衰老。而且， 仿刺参酶解液中还含有丰富的仿刺参多糖、仿刺参皂苷等多种生物活性物质。刺参多糖主 要分为两类一类是糖胺聚糖，即黏多糖；另一类是岩藻多糖，是由L-岩藻糖构成的直链多 糖。刺参多糖具有抗凝血、抗癌、增强免疫力、延缓衰老、降血脂等功效；刺参的皂苷元为仿 刺参留烷醇，是仿刺参特有的皂苷元。刺参中还存在非仿刺参留烷醇三萜类苷元，主要为刺 参苷A、A1及C。刺参皂苷的主要活性有抗肿瘤及免疫调解、溶血作用、抗菌作用等；香菇多糖(Lentinan，LNT)是一种天然人体免疫调节剂，具有抗肿瘤、抗感染和调 节免疫力等作用。香菇浸提液中除了含有香菇多糖，还含有较为丰富的氨基酸，其中有组氨 酸、谷氨酸、丙氨酸等18种氨基酸，其中人体必需氨基酸就有7种。香菇中还含有香菇素、 胆碱、亚油酸、香菇多糖及30多种酶。这些营养成分对脑功能的正常发挥有重要的促进作 用。
发明内容
本发明将海洋来源的仿刺参多肽与陆地来源的香菇多糖相结合提供了一种安全、 无毒副作用的强抗氧化活性的组合物。本发明采用南京建成生物工程研究所试剂盒(T-AOC)测定酶解液总抗氧化活性。 结果发现木瓜蛋白酶水解后的仿刺参酶解液抗氧化活性明显增强，由最初的10. 08单位/ mg蛋白增至27. 59单位/mg蛋白；将无抗氧化活性的香菇多糖浸提液按照不同比例和仿刺 参酶解液混合后，组合物的抗氧化活性进一步提升，当仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液质 量比为1 100时，抗氧化活性达到最高值84. 09单位/mg蛋白，相应对照组的抗氧化活性 则为47. 54单位/mg蛋白。研究结果表明木瓜蛋白酶水解可以增强仿刺参的抗氧化活性， 而香菇多糖浸提液又可进一步增强仿刺参酶解产物的抗氧化活性。本发明可用于具有增强 机体抗氧化活性、延缓衰老的功能性食品的开发。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种强抗氧化活性的组合物，包括仿刺参多肽和香菇多糖，它们间质量比是
31 1-100 ；最好为 1 6-32。所述仿刺参多肽为仿刺参的蛋白酶酶解液(又可称之为仿刺参酶解液)，按照下 述方法制备仿刺参勻浆后加1-5倍质量的水调pH4. 8-6. 2，加入仿刺参质量的木瓜 蛋白酶，50-70°C酶解2-5h，85-100°C水浴15_30min，降至室温后4000r/min离心15min，取 上清液为仿刺参酶解液；所述香菇多糖为香菇水的浸提液(又可称之为香菇多糖浸提液)，按照下述方法 制备的干燥香菇粉碎后加入20-50倍质量的水，80-100°C水浴浸提100-200min，过滤，滤 液即为香菇多糖浸提液；仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液体积比是1 0.1-5;最好为1 0.25-4。所述组合物配制时，将上述二种物质按不同比例混合均勻即可。本发明的优点是将来源于海八珍之一的仿刺参与来源于陆地的被称为“植物皇 后”的香菇结合作为保健食品，具有较好的抗氧化活性。本发明将仿刺参多肽的多种保健功能(易消化吸收，生物效价高；抗氧化，延缓衰 老；降血压，预防心脑血管疾病抗疲劳，增强体力；提高免疫力，抗肿瘤等)，与香菇多糖的 多种保健功能(提高人体免疫力，抗癌；缓解便秘、消化不良症等)有效地结合，使海洋来源 的仿刺参多肽与陆地来源的香菇多糖的保健功能达到互进互补的作用。尤其是，香菇多糖 在仿剌参多肽总抗氧化活性方面的促进作用相当明显，为开发具有增强机体抗氧化活性、 延缓衰老的功能性食品提供了依据。
具体实施例方式本发明实施例中木瓜蛋白酶采用国药集团化学试剂有限公司产品，酶活性 彡6000，ρΗ4· 8-6. 2，水分彡6. 0% ；仿刺参、香菇购于烟台本地。所述的仿刺参多肽(即实验组仿刺参酶解液)是按照下述方法制备的仿刺参勻 浆后加3倍质量的水，并调ρΗ5. 5，加入2%仿刺参质量的木瓜蛋白酶，55°C酶解:3h，90°C水 浴15min，降至室温后4000r/min离心15min，取上清液得实验组仿刺参酶解液。实验组仿 刺参酶解液蛋白量为89. 87 μ g/ml。对照组仿刺参酶解液仿刺参勻浆后加3倍质量的水，并调pH5. 5，加入2%仿刺参 质量经高温灭活的木瓜蛋白酶，55°C酶解:3h，90°C水浴15min，降至室温后4000r/min离心 15min，取上清液得对照组仿刺参酶解液。对照组仿刺参酶解液蛋白含量为212. 9μ g/ml。所述香菇多糖是按照下述方法制备的干燥香菇粉碎后加入30倍质量的水， 90°C水浴浸提150min，过滤，滤液即为香菇多糖浸提液。香菇多糖浸提液中多糖含量为 2962 μ g/ml。实施例1分别取实验组仿刺参酶解液和对照组仿刺参酶解液，以及香菇多糖浸提液，采用 南京建成生物工程研究所试剂盒(T-AOC)测定酶解液总抗氧化活性。结果发现实验组仿刺参酶解液总抗氧化活性为27. 59单位/mg蛋白；对照组仿刺参酶解液总抗氧化活性为10. 08单位/mg蛋白，木瓜蛋白酶水解产物 可显著提高仿刺参的抗氧化活性。而香菇多糖浸提液总抗氧化活性则几乎为0。
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实施例2取細1实验组仿刺参酶解液和Iml香菇多糖浸提液混合。此时测得实验组混合 液中蛋白含量为99.36口8/1111，多糖含量592.4口8/1111(质量比为1 6)。参照实例1方法 测定抗氧化活性。结果表明实验组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液4 1混合物总抗氧化活性为 35. 02单位/mg蛋白；同样取細1对照组仿刺参酶解液和Iml香菇多糖浸提液混合.此时测得混合液 中蛋白含量为218.22“8/1111，多糖含量592.4“8/1111(质量比为1 2.7)。参照实例1方 法测定抗氧化活性。结果表明对照组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液4 1混合物总抗氧化活性为 13. 93单位/mg蛋白；实施例3取2. 5ml实验组仿刺参酶解液和2. 5ml香菇多糖浸提液混合。此时测得实验组 混合液中蛋白含量为107. 88 μ g/ml，多糖含量1481 μ g/ml (质量比为1 13.7)。参照实 例1方法测定抗氧化活性。结果表明实验组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液1 1混合物总抗氧化活性为
47.54单位/mg蛋白；同样取細1对照组仿刺参酶解液和Iml香菇多糖浸提液混合.此时测得混合液 中蛋白含量为180. 7 μ g/ml，多糖含量1481 μ g/ml (质量比为1 8.2)。参照实例1方法 测定抗氧化活性。结果表明对照组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液1 1混合物总抗氧化活性为 26. 64单位/mg蛋白。实施例4取1. Oml实验组仿刺参酶解液和4. Oml香菇多糖浸提液混合。此时测得实验组 混合液中蛋白含量为73. 73 μ g/ml，多糖含量2369. 6 μ g/ml (质量比为1 32)。参照实例 1方法测定抗氧化活性。结果表明实验组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液1 1混合物总抗氧化活性为 84. 09单位/mg蛋白；同样取1. Oml对照组仿刺参酶解液和4. Oml香菇多糖浸提液混合.此时测得混 合液中蛋白含量为120. 38 μ g/ml，多糖含量2369. 6 μ g/ml (质量比为1 19.7。参照实例 1方法测定抗氧化活性。结果表明对照组仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液1 4混合物总抗氧化活性为
48.7单位/mg蛋白。
权利要求
1.一种强抗氧化活性的组合物，其特征在于包括仿刺参多肽和香菇多糖，它们质量 比是 1 1-100。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于仿刺参多肽和香菇多糖的质量比是 1 6-32。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述仿刺参多肽为仿刺参的蛋白酶酶解液，按照下述方法制备仿刺参勻浆后加 1-5倍质量的水调pH4. 8-6. 2，加入1_3 %仿刺参质量的木瓜蛋白酶，50_70°C酶解2_5h， 85-100°C水浴15-30min，降至室温后离心，取上清液为仿刺参酶解液；所述香菇多糖为香菇水的浸提液，按照下述方法制备的干燥香菇粉碎后加入20-50 倍质量的水，85-120°C水浴浸提100-200min，过滤，滤液即为香菇多糖浸提液；仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液体积比是1 0.1-5。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液体积 比是 1 0. 25-4。
5.一种权利要求1所述组合物可用于制备具有增强机体抗氧化活性延缓衰老的功能 性食品或药物。
全文摘要
本发明涉及一种强抗氧化活性的组合物，包括仿刺参多肽和香菇多糖，它们间的质量比是1∶1-100。采用南京建成生物工程研究所试剂盒(T-AOC)测定酶解液总抗氧化活性。结果发现木瓜蛋白酶水解后的仿刺参酶解液抗氧化活性明显增强，由最初的10.08单位/mg蛋白增至27.59单位/mg蛋白；将无抗氧化活性的香菇多糖浸提液按照不同比例和仿刺参酶解液混合后，组合物的抗氧化活性可进一步提升。当仿刺参酶解液与香菇多糖浸提液体积比为1∶4时，抗氧化活性达到最高值84.09单位/mg蛋白，相应对照组的抗氧化活性则为47.54单位/mg蛋白。研究结果表明木瓜蛋白酶水解可以增强仿刺参的抗氧化活性，而香菇多糖浸提液又可进一步增强仿刺参酶解产物的抗氧化活性。本发明可用于具有增强机体抗氧化活性、延缓衰老的功能性食品的开发。
文档编号A61K38/02GK102100324SQ20091025570
公开日2011年6月22日 申请日期2009年12月18日 优先权日2009年12月18日
发明者夏传海, 李成华, 秦松, 陈爱芹 申请人:烟台海岸带可持续发展研究所
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