一种奥拉西坦脂质体注射剂的制作方法

专利名称：：一种奥拉西坦脂质体注射剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种奥拉西坦脂质体注射剂，属于医药
技术领域：
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背景技术：
：奥拉西坦，化学名称为4-羟基-2-氧代-l-吡咯烷乙酰胺，分子式CA。N^3分子量158.16，为吡拉西坦的类似物，可改善老年性痴呆和记忆障碍症患者的记忆和学习功能。机理研究结果提示，奥拉西坦可促进磷酰胆碱和磷酰乙醇胺合成，提高大脑中ATP/ADP的比值，使大脑中蛋白质和核酸的合成增加。奥拉西坦注射液于1987年12月首次在意大利上市，目前国外已广泛应用于临床，在我国随着人口老年化趋势的不断加快，市场对本品的需求明显加大。专利文献CN1424034A公开了一种奥拉西坦注射液制剂的制备方法及制品，以葡萄糖或氯化钠为等渗调节剂，按注射液的常规生产工艺制备奥拉西坦注射液，该制品长期放置颜色加深，而且pH值变化较大。专利文献CN1287788C公开了一种奥拉西坦冻干粉针剂的制备方法及制品，以山梨醇或枸橼酸或枸橼酸钠或乳糖酸或乳糖酸钠为赋形剂，常规方法冷冻干燥制得，该制品成形性差，复溶很慢。专利文献CN101152175A公开了一种奥拉西坦纳米粒和药用辅料制成的奥拉西坦制剂，该专利所用辅料很难购买，而且副作用较大，制备工艺也很复杂。脂质体研究是当前一个十分活跃的领域，脂质体最早是指天然脂类化合物悬浮在水中形成的具有双层封闭结构的泡囊，现在也可以由人工合成的磷脂化合物来制备。20世纪60年代末Rahman等人首先将脂质体作为药物载体应用，近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。然而脂质体普遍存在容易聚集、融合，导致包封药物泄漏，因此在工业上制备符合稳定性要求的药物脂质体实非易事，制药领域具有一般经验的技术人员清楚地知道在制备药物脂质体方面面临各种困难，所有这些绝非简单的理论可以预期解决的，需要克服许多难题。因此需要想方设法地优化脂质体处方，以获得稳定性优良的脂质体。—种稳定性好、制备简单、毒副作用小的奥拉西坦注射剂成为当今临床需要的理想制剂。
发明内容本发明人经过长期认真地研究，经过大量的筛选实验，发现将靶向给药系统的一种新剂型脂质体应用于奥拉西坦注射剂中，具有稳定性好、毒副作用小、制备简单的优点，适合于临床需要，从而完成了本发明。本发明的目的在于提供一种奥拉西坦脂质体注射剂，包含如下重量份组分奥拉西坦1份磷脂3-18份4上述所述的制备方法中，有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇、叔丁醇、正丁醇、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种，优选为体积比为4:l的丙酮和甲醇的混合溶剂。有机溶剂的量根据加入的磷脂、胆固醇和吐温80的量进行选择，以完全溶解上述成分为最低量的要求，优选是基于三者总重量计的1:5-9(g/ml)体积的有机溶剂。上述所述的制备方法中，步骤(2)中搅拌时间为30-60min，转速为400_800r/min，采用组织捣碎机高速匀质乳化20-40min，转速为15000r/min;微孔滤膜的孔径为0.3-0.8iim，优选为0.45iim。上述所述的制备方法中，步骤(3)溶解奥拉西坦的水的量为能够使奥拉西坦完全溶解即可，优选于基于奥拉西坦重量计的1:5-10重量的水。作为优选，本发明所述的奥拉西坦脂质体注射剂的制备方法，包括如下步骤(1)将磷脂、胆固醇和吐温80溶于基于三者重量计的1:5-9(g/ml)体积的有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入pH值5.0-6.0的缓冲溶液，振摇，搅拌30-60min，转速400-800r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化20-40min，转速为15000r/min，0.45ym微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将奥拉西坦溶于基于奥拉西坦重量计的1:5-10重量的水中，0.45iim微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，在50-6(TC温度下搅拌30-60min，再加入渗透压调节剂，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，制得奥拉西坦脂质体注射剂。在本发明的奥拉西坦脂质体注射剂的制备方法中，所采用的旋转薄膜蒸发器，也称为刮板薄膜蒸发器或机械搅拌薄膜蒸发器，本领域目前已知的这类薄膜蒸发器都可以用于本发明，例如可以采用无锡市雪浪发酵工程设备厂生产的LG2.5型离心式刮板薄膜蒸发器，也可以采用无锡市军嶂制药设备厂生产的LG-4型高效旋转薄膜蒸发器等。在本文中，应当理解当多种组分含量为重量份时，并非将每种组分的含量限定完全为某一确定重量份，而应当理解为，这种重量份数体现的是各组分之间的重量比例关系，比如在一个优选实施方案中，本发明的奥拉西坦脂质体注射剂包含"奥拉西坦1份，磷脂4.8份，胆固醇3.2份，吐温801.3份......"，应当理解为按照重量计，所述奥拉西坦脂质体注射剂中所包含的奥拉西坦磷脂胆固醇吐温80=i:4.8:3.2:i.3，所有符合该重量比例关系的技术方案都包括在上述技术方案的范围内。在本文中，如果没有特别地说明，含量或用量都以重量份计；如果没有特别的说明，所采用的装置、仪器、原料、物质、用量、方法、时间、温度及其它条件等都为本领域众所周知的，或者是本领域技术人员根据本申请的描述结合现有技术可以获得的。与现有技术相比，本发明提供的奥拉西坦脂质体注射剂及其制备方法，具有意想不到的效果，主要优点如下稳定性高本发明奥拉西坦被包裹于脂质体内，该脂质体的配方是经过长期研究筛选得到的，其注射剂长期放置后溶液的颜色和PH值均没有明显变化，极大提高了稳定性；6包封率高本发明的脂质体制剂的包封率通常为87%_92%，最高可达到96%，显著地高于按照常规方法制备的奥拉西坦脂质体注射剂和其他脂质体制剂，长期放置不会发生渗漏现象，保证了产品质量；副作用小本发明的药物载体脂质体体内降解、无毒性和无免疫原性，而且可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用；制备简单本发明选用混合有机溶剂，与使用单一有机溶剂相比，溶解性能更好，溶解更快，并且更容易减压蒸发除去。具体实施例方式本发明将采用如下具体实施例进行详细描述，应当理解，这些实施例仅仅是用于阐述的目的，而并不以任何方式限制本发明的保护范围。本领域技术人员在本说明书的教导下，可以在不违背本发明的精神和主旨下，对本发明的实施方案作出多种修饰或改变，这些都将包括在本发明的范围内。輔你l1検鹏儒船身寸誦先格处方奥拉西坦100g大豆卵磷脂480g胆固醇320g吐温80130g氯化钠45g磷酸盐缓冲溶液4000g制备工艺(1)将480g大豆卵磷脂、320g胆固醇和130g吐温80溶于5000ml体积比4:1的丙酮和甲醇的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入pH值5.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液4000g，振摇，搅拌30min，转速800r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化20min，转速为15000r/min，0.45ym微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将100g奥拉西坦溶于lOOOg水中，O.45ym微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，在6(TC温度下搅拌30min，再加入45g氯化钠，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，制得奥拉西坦脂质体注射剂。实施例2奥拉西坦.脂质体沣射剂的制备处方奥拉西坦100g蛋黄卵磷脂350g胆固醇120g吐温8080g葡萄糖250g枸橼酸盐缓冲溶液4200g制备工艺(1)将350g蛋黄卵磷脂、120g胆固醇和80g吐温80溶于3000ml体积比4:1的丙酮和甲醇的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入pH值6.0的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液4200g，振摇，搅拌60min，转速400r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化40min，转速为15000r/min，0.45ym微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将100g奥拉西坦溶于800g水中，0.45iim微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，在5(TC温度下搅拌60min，再加入250g葡萄糖，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，制得奥拉西坦脂质体注射剂。輔你l3桂鹏儒船身寸誦先格处方奥拉西坦100g氢化蛋黄卵磷脂700g胆固醇500g吐温80300g甘油500g枸橼酸盐缓冲溶液4000g制备工艺(1)将700g氢化蛋黄卵磷脂、500g胆固醇和300g吐温80溶于12000ml体积比4:1的丙酮和甲醇的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去混合溶剂，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入pH值5.5的枸橼酸_枸橼酸钠缓冲溶液4000g，振摇，搅拌40min，转速600r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化30min，转速为15000r/min，0.45ym微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将100g奥拉西坦溶于500g水中，0.45iim微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，在55t:温度下搅拌40min，再加入500g甘油，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，制得奥拉西坦脂质体注射剂。对比例1奥拉西坦.fl旨质体沣射剂的制备处方奥拉西坦100g大豆卵磷脂480g胆固醇320g泊f各沙姆188130g氯化钠45g磷酸盐缓冲溶液4000g按照与实施例1相同的方法制备对比例1的奥拉西坦脂质体注射剂，其中用泊洛沙姆188代替吐温80。对比例2奥拉西坦.fl旨质体沣射剂的制备8处方奥拉西坦100g蛋黄卵磷脂250g胆固醇90g吐温8040g葡萄糖250g枸橼酸盐缓冲溶液4200g按照与实施例2相同的方法制备对比例2的奥拉西坦脂质体注射剂，其中蛋黄卵磷脂、胆固醇和吐温80的量均在本发明重量组份范围的下限之外。i擺列1鄉輔测惊取实施例1-3和对比例1-2制备的脂质体注射剂，采用高效液相色谱法检测的奥拉西坦的总含量为M。取1.5g葡聚糖凝胶G-50，用p朋.8磷酸盐缓冲液浸泡溶胀12h以上，装入层析柱内(200X10mm)，用上述磷酸盐缓冲液冲洗平衡，取实施例1_3和对比例1_2的样品1ml，加入层析柱顶部，用磷酸盐缓冲液50ml洗脱，流速1.lml/min，收集的洗脱液加入破膜剂(乙醇苯甲醇=8:1)50ml，混匀，高效液相色谱法检测的奥拉西坦的含量M"包封率％=Ml/MX100%。表1包封率测定结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由以上结果可知，按照本发明的处方及方法制备得到的脂质体注射剂包封率显著地高于分别与本发明的组分、用量不同的对比例制得的脂质体包封率，实施例与对比例的包封率存在显著性差异，本发明的产品符合生产要求，而对比例制备的产品不符合。试验例2粒径的检测取实施例1-3和对比例1-2制备的脂质体注射剂，采用显微图像分析仪测定脂质体的粒径分布，实施例l-3样品显球状、椭圆状，粒径均匀，范围为120-260nm，对比例1_2样品形状不定，杂乱无章，大小不一，粒径不均匀，范围>500nm。表2粒径检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>试验例3稳定性试验将以上实施例l-3和对比例l-2制备的样品与上市的奥拉西坦注射液(广东世信药业有限公司生产，批号200811066)和专利文献CN1424034A制备的样品在高温4(TC、相对湿度75%±5%条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表3。表3加速试验结果时间样品性状pH值渗漏率(%)有关物质(%)含量(％)o月实施例1无色澄明液体5.0/0.2299.9实施例2无色澄明液体6.0/0.25100.2实施例3无色澄明液体5.5/0.24100.1对比例1无色澄明液体5.0/0.2699.8对比例2无色澄明液体6.0/0.2499.5120]CN1424034A无色澄明液体5.50.2899.4上市注射液无色澄明液体5.3/0.3399.6实施例1无色澄明液体5,01.80.2299.9实施例2无色澄明液体6.02.20.25100.1实施例3无色澄明液体5.51.50.24100.11月只十比例1无色澄明液体4.85.50.3299.5对比例2无色澄明液体5.76.70.3399.2CN1424034A无色澄明液体5.3/0.3599.0上市注射液无色澄明液体5.0/0.4099.3实施例1无色澄明液体5.02.10.2399.8实施例2无色澄明液体5.92.50.25100.0实施例3无色澄明液体5.41.60.25100.02月对比例1无色澄明液体4.511.40.3699.2对比例2无色澄明液体5.58.10.3799.0CN1424034A无色澄明液体5.0/0.4198.6上市注射〉夜无色澄明液体4.7/0.4899.0实施例1无色澄明液体4.92.70.2399.8实施例2无色澄明液体6.03.10.26100.0实施例3无色澄明液体5.42.10.2799.93月2十比例1无色澄明液体4.315.90.4799.0对比例2无色澄明液体5.312.40.4898.6CN1424034A微黄色澄明液体4.7/0.5698.3上市注射液微黄色澄明液体4.5/0.5798.5实施例1无色澄明液体5.03.00.2499.7实施例2无色澄明液体5.93.40.2799.9实施例3无色澄明液体5.52.60.2899.86月对比例1微黄色澄明液体4.028.70.6198.25于比例2微黄色澄明液体5.021.30.6597.8CN1424034A微黄色澄明液体4.4/0.6997.6上市注射液微黄色澄明液体4.1/0.7197.9由以上结果发现加速6个月后，对比例1-2、专利文献CN1424034A和上市注射液制备的样品性状颜色发生变化，pH值下降较大，有关物质明显升高，含量明显降低；而本发明实施例1-3制备的样品各项检测指标均没有明显的变化。另外，对比例l-2制备的样品渗漏率逐渐增大，最后达到30%左右，渗漏严重；而本发明实施例1-3制备的样品渗漏率很低，几乎没有渗漏现象。充分说明了本发明制备的样品长期贮存质量稳定性更好，奥拉西坦、磷脂、胆固醇、和吐温80的特定比例的组合具有意想不到的效果。i擺列4棘性微异常毒性检查依据2005年版药典附录XIC异常毒性检查法，将本发明实施例1-3制备的样品用氯化钠溶液稀释成一定浓度的供试品溶液，注入符合试验要求的小鼠体内，结果小鼠在48小时内均没有死亡现象，说明本品异常毒性符合规定。热源检查依据2005版药典附录XID热源法进行检查，结果符合规定。权利要求一种奥拉西坦脂质体注射剂，其特征在于包含如下重量份组分奥拉西坦1份磷脂3-18份胆固醇1-12份吐温800.5-7份渗透压调节剂0.1-8份缓冲溶液30-50份。2.根据权利要求1所述的奥拉西坦脂质体注射剂，其特征在于包含如下重量份组分分奥拉西坦磷脂胆固醇吐温80渗透压调节剂缓冲溶液3.根据权利要求1奥拉西坦磷脂胆固醇吐温80渗透压调节剂缓冲溶液l份3.5-7份1.2-5份0.8-3份0.45-5份40-42份。-2所述的奥拉西坦脂质体注射剂，其特征在于包含如下重3:份组l份4.8份3.2份1.3份0.45份40份。4.根据权利要求l-3任一项所述的奥拉西坦脂质体注射剂，其特征在于磷脂选自大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、大豆磷脂酰甘油、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、蛋黄磷脂酰甘油中的一种或几种。5.根据权利要求l-4任一项所述的奥拉西坦脂质体注射剂，其特征在于渗透压调节剂选自氯化钠、葡萄糖、甘油、甘露醇、丙二醇、木糖醇、山梨醇中的一种或几种。6.根据权利要求l-5任一项所述的奥拉西坦脂质体注射剂，其特征在于缓冲溶液选自磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种或几种。7.—种制备权利要求l-6任一项所述的奥拉西坦脂质体注射剂的方法，其特征在于包括如下步骤(1)将磷脂、胆固醇和吐温80溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；(2)向制得的磷脂膜中加入缓冲溶液，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；(3)将奥拉西坦溶于水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，在保温下搅拌，再加入渗透压调节剂，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，制得奥拉西坦脂质体注射剂。8.根据权利要求7所述的奥拉西坦脂质体注射剂的制备方法，其特征在于有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇、叔丁醇、正丁醇、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种。9.根据权利要求78所述的奥拉西坦脂质体注射剂的制备方法，其特征在于步骤(1)中磷脂、胆固醇和吐温80三者总重量与有机溶剂的比例(重量/体积)为l:5-9(g/ml);步骤(2)中搅拌时间为30-60min，转速为400-800r/min，采用组织捣碎机高速匀质乳化20-40min，转速为15000r/min;步骤(3)中，奥拉西坦与水的重量比为1:5_10，微孔滤膜的孔径为0.3-0.8iim。10.权利要求l-6任一项所述的奥拉西坦脂质体注射剂在制备用于治疗脑损伤及引起的神经功能缺失、记忆与智能障碍等症药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种奥拉西坦脂质体注射剂，其特征在于包含如下重量份组分1份奥拉西坦、3-18份磷脂、1-12份胆固醇、0.5-7份吐温80以及适量的渗透压调节剂和缓冲溶液。所述奥拉西坦注射剂具有稳定性好、包封率高、毒副作用小、制备简单的优点，适合于临床需要。文档编号A61P25/28GK101732251SQ20091025641公开日2010年6月16日申请日期2009年12月25日优先权日2009年12月25日发明者杨明贵申请人:海南美兰史克制药有限公司