水溶性磷酸单酯衍生物及其应用的制作方法

专利名称：：水溶性磷酸单酯衍生物及其应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及药物学领域，更具体而言，涉及一类具有良好水溶性的磷酸单酯衍生物及其在制备治疗肿瘤或与TNFa、CAMP水平相关疾病的药物中的应用。
背景技术：
：癌症的发病率正在不断地上升，已成为严重威胁人类生命的常见病，其死亡率在所有疾病中居第2位。随着分子生物学的飞速发展，人们逐渐认识到细胞内促增殖系统成分的过度表达与抑增殖系统成分的缺失是导致细胞癌变的主要原因，同时对肿瘤细胞内的信号转导、周期调控、细胞凋亡及血管生成等过程和机理也在被逐步阐明。由于信号转导通路的关键组分在正常细胞与肿瘤细胞之间一般存在较大的差异，这一差异为抗肿瘤药物研发的焦点从选择性低、副作用大、作用于DNA、RNA和微管蛋白等传统细胞毒类药物转移到针对肿瘤细胞内信号转导通路的新型抗肿瘤药物提供了可靠的理论依据，靶向这些组分的抗肿瘤药物比传统抗肿瘤药物具有选择性强、疗效好、毒性小等优点。导致细胞癌变的原因是非常复杂的，到目前为止，人们尚未能完全清楚地阐明其发病的机理和机制，但是许多被证实与肿瘤细胞信号转导通路相关的关键酶的发现，为选择性作用于特定靶点的新型抗癌药物的研究开发指明了方向。例如，百时美施贵宝公司开发的Brivanib是一种口服血管内皮生长因子受体(vascularendothelialgrowthfactorrec印tor，VEGFR)酪氨酸激酶和纤维细胞生长因子受体(fibroblast-growthfactorrec印tor，FGFR)通路双重抑制剂，主要用于防治实体瘤、结肠直肠癌和肝癌等疾病(JournalofMedicinalChemistry,2006，49(7):2143-2146;中国专利申请号03816201.6);Enzastaurin是由美国礼来公司开发的一种双喷哚马来酰亚胺类抗癌药，能选择性地抑制蛋白激酶C-P(proteinkinaseC_P，PKC-P)(W09517182,1995-06-29)，主要用于防治的神经胶质瘤、非霍奇金淋巴瘤、非小细胞(型)肺癌、前列腺癌、实体瘤、结肠直肠癌、乳腺癌和卵巢癌等疾病。天然药物对肿瘤防治具有独特的效果，可以增强很多耐药肿瘤细胞对常规化疗药物的敏感性，如染料木黄酮(genistein)类似物Triphendiol(W02005/049008,2005-06-02)和Phenoxodiol(中国专利申请号97198690.8)，对肺癌、实体瘤、子宫癌、前列腺癌、卵巢癌、基底细胞癌、非白血性白血病、鳞状细胞癌、肾癌等疾病有较好的疗效(ExpertOpin.Investig.Drugs,2009，18(4):469-479)。此外，"老药新用"也是目前寻找新药的另一途径，如从市场退出的具有严重致畸性的沙利度胺(Thalidomide),目前研究表明其拥有降低TNFa水平和/或提高CAMP水平构成治疗很多炎症炎症、感染性、免疫学和恶性疾病的用途。来那度胺(Lenalidomide)和Pomalidomide是沙利度胺的衍生物，降低了沙利度胺的严重不良反应，同时在治疗某些难治性疾病方面具有更好的疗效，如多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合症、肺癌、胰腺癌、实体瘤、肾癌、胃肠癌、结肠直肠癌、免疫调节剂、软组织肉瘤、移巻曲(核)淋巴细胞性淋巴瘤、镰状细胞性贫血、非霍奇金淋巴瘤、骨髓纤维化症、植物抗宿主病等疾病(Bioorganic3&MedicinalChemistryLetters,1999，9:1625-1630;Bioorganic&MedicinalChemistryLetters，2007，17:5819-5824;中国专利申请号97180299.8)。但是以上这些药物的水溶性非常差，如Brivanib在pH=6.5的水溶液中不溶，其溶解度小于1Pg/mL，沙利度胺在水中几乎不溶，其溶解度约为12iig/mL。为了增加药物的水溶性，可以在药物的结构中引入亲水性基团，如来那度胺和Pomalidomide等在其结构中引入了亲水性的氨基，但是它们的水溶性增加不明显，如来那度胺的溶解度即使在酸性的水溶液中也只有微溶，其溶解度仅为0.4mg/ml左右，而人体的pH值为7.4左右，呈弱碱性，其溶解度会更小。由于水溶性较小的药物，口服给药后由于药物的溶解度小导致其溶解速度慢，不利于药物的吸收，会导致药物吸收缓慢、生物利用度较低或达峰时间较长等缺点，严重限制了其临床应用的前景。因此，本领域迫切需要开发抗肿瘤或与TNFa、CAMP水平相关疾病活性好和水溶性大的药用化合物。
发明内容本发明的目的是提供一类抗肿瘤或与TNFa、CAMP水平相关疾病活性好具有良好水溶性的药用化合物。本发明人经过研究发现，将水溶性差的母体药物Brivanib、Triphendiol、phenoxodiol、沙利度胺、来那度胺、Pomalidomide和Enzastaurin制备为磷酸或甲基磷酸前体药物，其具有良好的水溶性和稳定性，在血浆中能被磷酸酯酶迅速水解释放出母体药物，因此可以提高药物的生物利用度，增加疗效和减少胃肠道等毒副作用，特别是适合于不宜口服的病人。本发明提供通式I的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中R选自具有以下结构的基团<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>或其所有可能的可药用盐、晶型、或水合物，其中优选的可药用盐为钠、钾、或钙盐，最优选的可药用盐为钠盐。与上述基团a—i相X寸应的药物是a禾口c是Brivanib(由Bristol—MyersSquibb公司研发);b和d是Triphendiol和e是Phenoxodiol(由MarshallEdwards公司研发);f、g和h分别是由Celgene公司研发的沙利度胺、来那度胺和Pomalidomide;i是由EliLilly公司石开发的Enzastaurin。本发明还提供通式II的化合物,0、，OH》\0HII其中^选自具有以下结构的基团或其所有可能的可药用盐、异构体、晶型、水合物或溶剂化物。本发明还提供通式in的化合物R2vO\,O-R，々P\O、0-R2III其中化选自具有以下结构的基团或其所有可能的可药用盐、异构体、晶型、水合物或溶剂化物本发明还提供通式IV的化合物0、《0《HOO0,,\0HIV其中R,选自具有以下结构的基团5或其所有可能的可药用盐、异构体、晶型、水合物或溶剂化物。优选的通式I化合物选自(1)(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_喷哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[1，2_f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-基磷酸；(2)(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-喷哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][l，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二钠盐；(3)(3-(l，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二钠(4)(3-(4-氨基-l-氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二钠盐；及其所有可能的异构体、可药用盐、晶型、水合物或溶剂化物。本发明还提供通式I所示化合物合适的可药用的盐、水合物或溶剂化物，其中可药用的盐包括但并不限于通式I化合物与碱金属或碱土金属或质子化胺或质子化氨基酸等形成金属或胺盐，如锂、钠、钾、镁、钙、钡、锌和铝盐。优选的盐为钠、钾和钙盐。本发明化合物可与无机酸如盐酸、硫酸、磷酸、亚磷酸、氢溴酸和硝酸所成的盐以及与各种有机酸，如马来酸、苹果酸、延胡索酸、琥珀酸、酒石酸、柠檬酸、乙酸、乳酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、棕榈酸等所成的盐。本发明中的一些化合物可能用水或各种有机溶剂结晶或重结晶，在这种情况下，可能形成各种溶剂化物。本发明包括那些化学计量的溶剂化物，包括水合物，也包括在用低压升华干燥法制备时形成的包含可变量水的化合物。本发明还涉及通式I化合物的各种异构体。本发明化合物的异构体包括互变异构体、顺反异构体、构象异构体、内消旋化合物和具有对映或非对映关系的光学异构体。本发明中化合物可能以顺反异构体、光学异构体或互变异构体的形式存在，本发明包括其所有存在形式，特别是纯异构体的形式。不同的异构体形式可以以各种常规的手段与其它形式的异构体分离或拆分开，或者某种异构体可以各种常规的合成方法或立体专一或不对称合成的方法得到。既然通式I化合物是以药用为目的，可以理解它们最好以纯的形式提供，例如至少60%的纯度，更合适的75%，更好的85%，最好至少98%的纯度(％是指重量百分比)。不纯化合物的制备方法可用来用于药用组合物中更纯的形式。这些不够纯的产物中至少含有1%，更适合的5%，更好的至少10%的如通式I所示的化合物或其可药用的衍生物。本发明还提供制备通式I化合物或其可药用的盐、水合物或溶剂化物的制备方法，下面针对通式I亚结构(通式II和通式III)分别加以描述，其中R、&、和!^具有如上所述的定义。1.通式II化合物的制备方法如下在磷酸三甲酯的溶液中，加入&OH。氮气保护下，冰浴下加入三氯氧化磷，室温下搅拌反应4小时。反应完毕后，加入冰水，有固体析出，过滤得到通式II磷酸化合物。此磷6酸化合物与酸或碱反应可以制备通式II可药用盐。1)poci3,h20r,0\,0hR，-/\OHRl2)酸或碱n2.通式III化合物的制备方法如下在无水N，N-二甲基甲酰胺溶液中，加入R2H和氢化钠，搅拌30min，依次加入四丁基溴化铵、碘化钾和磷酸二苄基氯代甲基酯，搅拌反应12小时。反应完毕，加入水、二氯甲烷萃取得到中间体3。在中间体3的甲醇溶液中，加入10%的钯/炭。通入氢气(latm)，搅拌反应3小时。过滤除去钯/炭，减压蒸干得通式III磷酸化合物。此磷酸化合物与酸或碱反应可以制备通式III可药用盐。R0OHH+C、0\"NaH磨Ro、"DP,oP\oHR;+。~"^c/\0Bn2)酸或碱23HI通式II和通式III化合物的制备方法可以参考文献JournalofMedicinalChemistry，2000，43(3):440-448、JournalofMedicinalChemistry,2004，47(1):188-195禾卩Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,2003，13:3669—3672，其中中间体2的制备方法可以参考文献Tetrahedron,1971，27:3163-3170。通式II和通式111化合物的碱性盐或酸性盐可以通过本领域技术人员所知的常规技术制备。关于制备通式I化合物更详尽的资料见实施例。本发明还提供一种药用组合物，包含通式I化合物，或其异构体、可药用盐、水合物或溶剂化物和可药用辅助剂、稀释剂或载体。本发明化合物的药物组合物，可以以下方面的任意方式施与口服、喷雾吸入、直肠给药、鼻腔给药、阴道给药、局部给药、非肠道给药如皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射或输入，或借助一种外植的储器用药，其中优选静脉或肌内非肠道给药和口服。本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药。给药剂型可以是固体剂型、液体剂型。液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如冻干粉针剂、水针、片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、包合物、埋植剂、贴剂、擦剂等，其中优选冻干粉针剂或水针等针剂、片剂和胶囊。另外需要指出，本发明化合物针对不同患者的特定使用剂量和使用方法决定于诸多因素，包括患者的年龄，体重，性别，自然健康状况，营养状况，化合物的活性强度，服用时间，代谢速率，病症的严重程度以及诊治医生的主管判断。这里优选使用剂量介于0.01-100mg/Kg体重/天。必须认识到，通式I化合物的最佳给药剂量和间隔是由化合物性质和诸如给药的形式、路径和部位等外部条件决定的，而这一最佳给药剂量可用常规的技术确定。同时也必7须认识到，最佳的疗程，即通式I化合物在额定的时间内每日的剂量，可用本领域内公知的方法确定。本发明进一步提供了上述化合物，或其异构体、可药用盐、晶型、水合物或溶剂化物在用于制备治疗和/或预防肿瘤和/或降低肿瘤坏死因子a(TNFa)水平和/或提高3'，5'-环-磷酸腺苷(CAMP)水平相关疾病的药物中的应用。所述肿瘤包括但不局限于肝癌、肺癌、肾癌、胃肠癌、实体瘤、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、神经胶质瘤、小细胞肺癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌、软组织肉瘤、多发性骨髓瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、非霍奇金淋巴瘤、非白血性白血病、镰状细胞性贫血、骨髓增生异常综合症、移巻曲(核)淋巴细胞性淋巴瘤等；所述的降低TNFa水平和/或提高CAMP水平相关疾病包括但不局限于浓毒性休克、浓毒症、内毒素性休克，血液动力学休克和浓毒综合症、梗塞后再灌注损伤、疟疾、分支杆菌感染、脑脊膜炎、牛皮癣、充血性心力衰竭、纤维化疾病、恶病质、移植物排斥、癌原性或癌性病症、哮喘、自身免疫性疾病、AISD的机会行感染、风湿性关节炎、多发性硬化、全身红斑狼疮、麻风中的ENL、放射损伤、癌原性病症和高氧性肺泡损伤、植物抗宿主病和骨髓纤维化症等疾病。本发明具有以下有益效果本发明所提供化合物的活性和母体药物相当或更强，特别是水溶性远远大于母体药物，可以通过注射给药来避免药物口服给药后被胃酸或各种胃肠道酶所破坏、吸收进入肝门静脉又往往会受〃肝肠循环〃、〃首过效应〃的影响，疗效低起效慢等缺点，且适合不宜口服的病人。具体实施例方式以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。化合物的熔点由RY-1熔点仪测定，温度计未较正。1H-NMR由JNM-ECA-400超导NMR仪测定，工作频率"H-NMR400MHz。质谱由MicromassZabSpec质谱仪测定。色谱条件(仪器Agilent1100系列高效液相色谱仪(VWD检测器)；色谱柱SupelcosilLC-18柱(4.6X250mm，5iim);流动相甲醇，10mM磷酸氢二钾溶液(磷酸调pH6.8);进样量10iU;流速lml/min)。Carlo-Erba1122型微量元素分析仪。实施例1(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_吲哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[1，2-f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-基磷酸(化合物1)的制备将(R)-l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-喷哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-醇(741mg，2mmol，其制备方法参考文献JournalofMedicinalChemistry，2006，49(7):2143-2146)加入到40ml的磷酸三甲酯溶液中，氮气保护下，冰浴下缓慢加入三氯氧化磷(0.31ml，3.Ommol))，加完后升温至室温，搅拌反应12小时。反应完毕后，加入冰水40ml，搅拌，有固体析出，过滤，滤饼用水(20mlX2)洗涤，将滤饼溶于20ml溶有碳酸钠(212mg)的水溶液中，分别用乙酸乙酯(15ml)和乙醚(15ml)萃取，水层用盐酸酸化pH二l，有固体析出，过滤，滤饼用水(10mlX2)洗涤，真空干燥过夜，得到粉末状固体154mg，收率17.1X，HPLC含量为99.4%。Elementalanalysis:(C19H2。FN406P):Calcd:C，50.67;H，4.48;N，12.44;Found:C，50.49;H，4.56;N，12.52。'HNMlUCDsOD)，S(ppm):1.40(d，J=6.6Hz，3H)，2.41(s，3H)，2.45(s，3H)，4.03-4.28(m，2H)，4.96(m，81H)，6.35(m，1H)，6.96(d，J=7.1Hz，1H)，7.14(d，J=7.lHz，1H)，7.61(s，1H)，7.82(s，1H)。ESI-MS:451.1(M+1)。实施例2(1)-(1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_吲哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[1，2-f][l，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二钠盐(化合物2)的制备步骤l.(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-喷哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二苄酯的制备冰浴氮气保护下，向(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基_1H_吲哚基_5_氧基)_5_甲基吡咯并[l，2-f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-醇(741mg，2翻l)的无水N，N-二甲基甲酰胺(15ml)溶液中加入氢化钠(48mg，2mmol)，搅拌30分钟，依次加入四丁基溴化铵(100mg，0.3mmol)、碘化钾(50mg，0.3mmo1)，缓慢滴加磷酸二节基氯代甲基酯(978mg，3mmo1)的无水N，N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液，搅拌反应24小时。反应完毕，加入水40ml稀释、二氯甲烷60ml萃取，用水(30ml)洗涤3次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂。将残余物用硅胶快速色谱柱纯化(环己烷/乙酸乙酯=16:1，和环己烷/乙酸乙酯=8:l)，得到455mg粉末状固体，收率34.5%，熔点59-62°C。'HNMR(DMS0)，S(ppm):1.43(d，J=6.6Hz，3H)，2.34(s，3H)，2.38(s，3H)，4.03-4.28(m，2H)，4.90-5.43(m，7H)，6.35(m，1H)，6.96(d，J=7.1Hz，1H)，7.14-7.40(m，llH)，7.61(s，lH)，7.82(s，lH)。ESI—MS:661.2(M+l)。步骤2.(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-喷哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二钠盐的制备向(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-lH-喷哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[l，2_f][l，2，4]三嗪-6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二节酯(661mg，lmmo1)的甲醇(30ml)中，加入10%的钯/炭(100mg)，通入氢气(latm)，搅拌反应3小时。通过硅藻土过滤除去钯炭，将滤液用碳酸钠(101mg，0.95mmo1)的水(10.Oml)溶液，减压蒸除甲醇，残余的水溶液用乙醚(5X2ml)萃取，将水溶液冻干的白色固体，真空干燥过夜，再用乙醚(3X4ml)洗涤，真空干燥，得到白色粉末固体472mg，收率90X，HPLC含量为99.3%。Elementalanalysis:(C20H20FN4Na207P):Calcd:C，45.81;H，3.84;N，10.69;Found:C，45.57;H，4.05;N，10.42。ESI-MS:480.1(M-2Na+l)。实施例3(3-(l，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二钠盐(化合物3)的制备步骤l.(3-(l，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二苄酯的制备采用与实施例2步骤1类似的方法制备，将3-(1，3_二氧代异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮(2.58g，10.Ommol，该化合物的制备方法参考文献Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,1999，9:1625-1630)、氢化钠(240mg，lOmmol)、四丁基溴化铵(500mg，1.5,1)、碘化钾(250mg，1.5,1)，滴加磷酸二节基氯代甲基酯(4.89g，15mmo1)反应，得到2.26g粉末状固体，收率41.2%，熔点50-52°C。^NMR(DMS0)，S(ppm):2.11-2.19(m，1H)，2.52—2.69(m，1H)，2.82—2.91(m，1H)，3.02—3.21(m，1H)，4.95—5.48(m，7H)，7.33(m，10H)，7.85-7.99(m，4H)。ESI-MS:549.1(M+l)。步骤2(3-(l，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二钠盐的制备9采用与实施例2步骤2类似的方法制备，向(3-(l，3-二氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二苄酯(2.20g，4mmo1)的甲醇(120ml)中，加入10%的钯/炭(400mg)，通入氢气(latm)脱除保护基节基，再与碳酸钠(403mg，3.8mmo1)的水(40ml)溶液反应，得到白色粉末固体1.36g，收率91.9%，HPLC含量为99.6%。Elementalanalysis:(C14HuN2Na208P):Calcd:C，40.79;H，2.69;N，6.80;Fo皿d:C，40.57;H，2.53;N，6.93。ESI-MS:368.0(M_2Na+l)。实施例4(3_(4-氨基-1-氧代异二氢吲哚_2-基)_2，6_二氧代哌啶_1_基)甲基磷酸二钠盐(化合物4)的制备步骤l.(3-(4-氨基-l-氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二苄酯的制备采用与实施例2步骤1类似的方法制备，将3-(4-氨基-l-氧代异二氢吲哚-2-基)-哌啶-2，6-二酮(2.07g，8.Ommol，该化合物的制备方法参考文献Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,1999，9:1625-1630)、氢化钠(192mg，8,1)、四丁基溴化铵(400mg，l.2mmol)、碘化钾(200mg，1.2mmo1)，滴加磷酸二节基氯代甲基酯(3.91g，12,1)反应，得到1.96g粉末状固体，收率44.5%。丄匪R(DMS0)，S(卯m):2.00-2.14(m，1H)，2.22-2.49(m，1H)，2.59-2.68(m，1H)，2.83-3.05(m，1H)，4.06-4.28(m，2H)，4.92-5.48(m，9H)，6.81(d，J=7.6Hz，1H)，6.92(d，J=7.6Hz，1H)，7.21(t，J=7.6Hz，1H)，7.33(m，10H)。ESI-MS:550.2(M+l)。步骤2.(3-(4-氨基-l-氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二钠盐的制备采用与实施例2步骤2类似的方法制备，向(3-(4-氨基-l-氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二苄酯(1.65g，3mmo1)的甲醇(90ml)中，加入10%的钯/炭(300mg)，通入氢气(latm)脱除保护基节基，再与碳酸钠(302mg，2.9mmo1)的水(30ml)溶液反应，得到白色粉末固体1.36g，收率91.9%，HPLC含量为99.2%。Elementalanalysis:(C14H14N3Na207P):Calcd:C，40.69;H，3.41;N，10.17;Found:C，40.76;H，3.33;N，10.31。ESI-MS:369.1(M-2Na+l)。实验例5所制化合物的溶解度、在缓冲液和血浆中的研究前药是指指用化学方法将有活性的母体药物转变成无活性或活性低，在体内经酶促或非酶促反应释放出原药而发挥治疗作用的药物。其中对于磷酸酯类前药而言，一般在体内经酶或者化学水解释放出母体药物。同时基于本发明的磷酸单酯类前药主要是增加药物的水溶性，因此，一般在体外考察其在水中的溶解度、缓冲液和血浆中的水解情况。1、所制备化合物在水中的溶解度称取研成细粉的待测样品，加入10ml容量瓶中，再加入10ml水，每隔5分钟强力振摇30秒，观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒，即视为完全溶解，见表1。表1室温下所制化合物及其母体药物在水中的溶解度(mg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2、所制备的化合物1和2在磷酸缓冲液和血浆中的水解情况储备液50iig/ml水溶液人血浆取健康人血(加肝素)，离心，取上清液，分装冷冻冰箱中备用pH7.4磷酸缓冲液称取磷酸二氢钾0.68g，加0.lmol/1氢氧化钠溶液39.5ml，用水稀释至100ml方法将人血浆和pH7.4磷酸缓冲液0.8ml分别加入到二个2ml的塑料管中，放入37t:恒温水浴中保温半小时，加入以上储备液O.2ml，涡旋20秒，取样0.lml，继续在37。C保温半小时。向所取0.lml样品中力口0.4ml冷冻(_30°C)甲醇，离心3分钟(4000转/min)，取上清液进行HPLC分析。此后分别在0.5，l，2，4和8h分别取样，后处理同前。不同时间的化合物面积百分比=不同时间的积分面积/0时的积分面积*100%。表2化合物1和2在血浆和磷酸缓冲液中的水解情况化合物l化合物2<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>从表1和表2可以看出，磷酸单酯衍生物在水溶液中具有良好的溶解度，比其相应的母体药物增大1000倍以上，而且在水溶液中稳定，在人血浆中能被迅速酶解释放出母体药物，由于具有良好的水溶性和稳定性，可以制备成注射剂，具有起效快，疗效好、副作用小、不受胃肠道影响的优点。实验例6鼠体内移植瘤抑瘤作用的药理活性评价1、实验材料与方法1.1、动物与细胞株健康清洁级昆明小鼠，雌雄不限，体重1822g(军事医学科学院实验动物中心)；小鼠肝癌H22(军事医学科学院基础医学研究所)。1.2、实验方法1.2.1建立小鼠实体瘤模型选择腹腔接种79d，生长良好的H22肝癌的小鼠，无菌抽取腹水，以无菌生理盐水稀释成2.5X107个/mL瘤细胞悬液，充分混匀，消毒小鼠右前肢腋窝部位，接种于健康小鼠右前肢腋部皮下，每只0.2mL，接种56只。1.2.2动物分组及给药小鼠接种24小时后随机分为7组模型组(生理盐水)，Brivanib组(30mg/kg)，化合物1和2组分别给药38和40mg/kg(摩尔数相当于Brivanib30mg/kg)，沙利度胺组(50mg/kg)，化合物4和5组71mg/kg(摩尔数相当于沙利度胺组50mg/kg)，每组8只，每日腹腔注射给药1次，每次0.15ml/10g体重，连续给药7天，由于Brivanib难溶于生理盐水，按剂量无法注射给药，因此采用灌胃给药。1.2.3计算抑瘤率接种后第8天，称体重后处死小鼠，剥离皮下瘤块，称重，计算抑瘤率。抑瘤率=(对照组瘤重_实验组瘤重)/对照组瘤重*100%，结果见表4。表4对荷瘤小鼠生长和肿瘤的影响G±s)组别剂量/mg/kg/d小鼠个数小鼠增重/g瘤重抑制率/%模型组—88.05±1.231.85±0.37—Brivanib3086.59±3,031.06±0.40*42.7化合物l3887.77±2.840.42±0,26*77,3化合物24087,06±2.390.45±0.29*75.7沙利度胺5083.70±2.251.52±0.24*17.8化合物37184.08±1.921,46±0.31*21.1化合物47184,76±2.831.3U0.28*29.1注与模型组比较，*P<0.012、对小鼠体内移植性肿瘤H22的影响从表4可知各组对荷瘤小鼠生长和肿瘤影响的平均数及标准差，与模型组比较，Brivanib、沙利度胺、化合物1、2、3和4都能显著抑制H22实体瘤生长作用(P<0.01)，其中化合物1(77.3%)和2(75.7%)对肿瘤的抑制作用大至相当，但显著大于Brivanib(42.7%)，而沙利度胺(17.8%)、化合物3(21.1%)和4(29.1%)对肿瘤的抑制作用相对较弱，但是化合物3和4的活性优于沙利度胺。化合物1和2的抗肿瘤活性显著强于其母体药物Brivanib，化合物3的活性也优于其母体药物沙利度胺，且都具有良好的水溶性，可以作为更好的抗肿瘤药物。实验例710mg/瓶规格，1000支化合物110g甘露醇10g注射用水加至2000ml，其制成IOOO支按实施例7制剂处方，称取化合物110g，置容器中，加水1800ml注射用水，并加入甘露醇10g，搅拌至溶解，用0.lmol/LNaOH调pH至6.67.0，加入针用炭lg，5060°C搅拌30分钟，脱炭后，加注射用水至2000ml，在无菌条件下，用0.22ym微孔滤膜过滤除菌，滤液分转10ml西林瓶中，每瓶2ml，加塞，冻干，充氮气，压塞，包装。1权利要求下述通式I的化合物，或其可药用盐、晶型或水合物其中R选自具有以下结构的基团F2009102592703C00011.tif,F2009102592703C00012.tif2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物为(1)(R)-1-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚基-5-氧基)-5-甲基吡咯并[1，2_f][1，2，4]三嗪-6-基氧基)-丙-2-基磷酸；(2)(R)-(l-(4-(4-氟-2-甲基-1H-吲哚基-5-氧基)_5_甲基吡咯并[l，2_f][1，2，4]三嗪_6-氧基)-丙基-2-氧基)甲基磷酸二钠盐；(3)(3-(1，3-二氧代异二氢吲哚_2-基)-2，6-二氧代哌啶-1-基)甲基磷酸二钠盐；(4)(3-(4-氨基-l-氧代异二氢吲哚-2-基)-2，6-二氧代哌啶-l-基)甲基磷酸二钠及其可药用盐、晶型或水合物。3.根据权利要求l-2任一项所述的化合物，其特征在于，所述化合物的可药用盐为与酸或碱所形成的盐。4.包含权利要求l-3任一项所述的化合物的药物组合物。5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于，该组合物还包含药学上可接受的辅料或载体。6.根据权利要求4或5所述的组合物，其特征在于，该组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、分散剂、糖浆剂、口服液、注射剂或栓剂。7.权利要求l-6任一项所述的化合物，或其异构体、可药用盐、晶型、水合物或溶剂化物在用于制备治疗和/或预防肿瘤和/或与肿瘤坏死因子a(TNFa)水平和/或3'，5'-环磷酸腺苷(CAMP)水平相关疾病的药物中的应用。全文摘要本发明提供通式I的水溶性磷酸单酯衍生物及其所有可能的异构体、可药用盐、晶型、水合物、溶剂化物以及药物组合物。本发明还提供了本发明化合物在制备肿瘤疾病、降低TNFα水平和/或提高CAMP水平相关疾病的防治药物中的应用，所述药物并有良好的水溶性，疗效高、起效快并且适合不宜口服给药的患者。文档编号A61P33/00GK101735276SQ200910259270公开日2010年6月16日申请日期2009年12月17日优先权日2009年12月17日发明者孙玉琦,廖国超,曲昌海,谢寅省申请人:廖国超