本发明属于药品成分检测，涉及一种羌活胜湿汤煎液指标成分含量的测定方法。
背景技术：
1、羌活胜湿汤，由羌活、独活、藁本、防风、甘草、蔓荆子及川芎七味中药组成，具有祛风，胜湿，止痛之功效。临床常用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨质增生症、强直性脊柱炎、颈椎病、肩背头疼等。处方中各个药味的质量直接关系到成药的疗效和安全性，因此处方的质量评价至关重要。并且，对于相对较为复杂的中药处方来说，多指标成分质量评价已经成为趋势。
2、cn117233279a提供了一种羌活胜湿汤组合物质量检测方法，能够测得甘草酸铵与蛇床子素的含量，进而应用于羌活胜湿汤组合物中的独活和甘草含量的质控。但是该方法仅能对处方中的独活和甘草两个药味进行质量评价。
3、西安市中医医院的田欢等人在《中国中医药信息杂志》发表了一篇题目为“一测多评法同时测定羌活胜湿汤中6种成分的含量”的文献，该文献的方法能够同时测定羌活胜湿汤中绿原酸、升麻素苷、阿魏酸、洋川芎内酯ⅰ、5-o-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵的含量。但是，该方法存在两点不足，第一，该方法未对君药羌活的指标成分进行测定，无法质控君药羌活；第二，该方法中绿原酸和阿魏酸广泛存在于多种植物，作为指标成份专属性差，无法实现对处方药味的有效质量控制。因此，该方法仅能对处方中的甘草、防风和川芎三个药味进行质量评价。
4、中国中医科学院的高文雅等人在《中国中医药信息杂志》发表了一篇题目为“羌活胜湿汤指标成分含量测定方法建立及量值传递研究”的文献，该文献的方法能够测定升麻素苷、甘草酸、异欧前胡素、阿魏酸、蛇床子素的含量。同样地，由于阿魏酸无法作为专属性成分，故而该方法仅能对处方中的甘草、防风、羌活和独活四个药味进行质量评价。
5、天津中医药大学的王敏等人在《天津中医药大学学报》发表了一篇题目为“羌活胜湿汤物质基准多指标成分含量测定及量值传递分析”的文献，该文献的方法能够测定羌活醇、二氢欧山芹醇当归酸酯、5-o-甲基维斯阿米醇苷、蔓荆子黄素、异欧前胡素、甘草酸铵的含量。即，该方法能够对处方中的甘草、防风、羌活、独活和蔓荆子五个药味进行质量评价。
6、本领域技术人员知晓，羌活胜湿汤中的羌活和独活为君药，防风和藁本为臣药，川芎和蔓荆子为佐药，甘草为使药。因此，现有技术虽然对该处方中的若干药味的指标成分进行了含量测定，但是其测定方法均存在一个共同的问题：未能实现各药味的全面质量控制，没有建立同时测定君药(羌活、独活)、臣药(防风、藁本)指标成分含量从而对药效相关成分进行整体评价的方法。
7、鉴于此，为了更好地控制羌活胜湿汤煎液的质量，开发一种能够测定羌活胜湿汤煎液中君药和臣药指标成分含量的方法，成为本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现思路
1、为解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种羌活胜湿汤煎液指标成分含量的测定方法，本发明采用的技术方案如下：所述方法包括下列步骤
2、(1)对照品溶液的制备：向羌活醇、藁本内酯、蛇床子素中加入甲醇，得到第一对照品溶液；向甘草酸铵、升麻素苷中加入甲醇，得到第二对照品溶液；
3、(2)供试品溶液的制备：向羌活胜湿汤煎液中加入乙醚进行提取，提取液挥干得到残渣，向残渣中加入甲醇，滤过，取续滤液，得到第一供试品溶液；羌活胜湿汤煎液离心，滤过，取续滤液，得到第二供试品溶液；
4、(3)含量检测：分别将步骤(1)的所述第一对照品溶液、所述第二对照品溶液和步骤(2)的所述第一供试品溶液、所述第二供试品溶液注入超高效液相色谱仪进行检测，得到羌活醇、藁本内酯、蛇床子素、升麻素苷和甘草酸铵的含量。
5、在本发明的一种优选实施方式中，步骤(1)的第一对照品溶液中，
6、羌活醇的浓度为10～65μg/ml，优选为25～45μg/ml；和/或
7、藁本内酯的浓度为6～70μg/ml，优选为10～30μg/ml；和/或
8、蛇床子素的浓度为10～80μg/ml，优选为40～60μg/ml。
9、在本发明的一种优选实施方式中，步骤(1)的第二对照品溶液中，
10、甘草酸铵胺的浓度为30～200μg/ml，优选为130～170μg/ml；和/或
11、升麻素苷的浓度为5～20μg/ml，优选为10～15μg/ml。
12、在本发明的一种优选实施方式中，步骤(2)的第一供试品溶液中，
13、加入乙醚进行提取的次数为3～6次；和/或
14、每次加入的乙醚与羌活胜湿汤煎液的体积比为0.8～2∶1；和/或
15、加入的甲醇与羌活胜湿汤煎液的体积比为0.2～0.5：1；和/或
16、滤过采用的是针式过滤器；
17、进一步的，所述针式过滤器的滤膜为聚醚砜树脂、尼龙6、尼龙66、聚偏氟乙烯、聚四氟乙烯中的任意一种。
18、在本发明的一种优选实施方式中，步骤(2)的第二供试品溶液中，
19、离心时间为5～30min；和/或
20、滤过采用的是针式过滤器；
21、进一步的，所述针式过滤器的滤膜为聚醚砜树脂、尼龙6、尼龙66、聚偏氟乙烯、聚四氟乙烯中的任意一种。
22、在本发明的一种优选实施方式中，步骤(3)中，
23、色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，色谱柱大小为2.1mm×100mm，色谱柱填料粒径为1.7～1.8μm；和/或
24、柱温为30～45℃；和/或
25、进样体积为1～5μl；和/或
26、流速为0.25～0.40ml/min；和/或
27、检测样品为第一对照品溶液和/或第一供试品溶液时，检测波长为313～317nm；检测样品为第二对照品溶液和/或第二供试品溶液时，检测波长为252～256nm。
28、在本发明的一种优选实施方式中，步骤(3)中，
29、超高效液相色谱仪的洗脱方式为梯度洗脱；
30、进一步的，所述梯度洗脱的流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a和所述流动相b的体积分数之和为100％；所述流动相a为体积浓度0.05％～0.15％的甲酸乙腈溶液，所述流动相b为体积浓度0.05％～0.15％的甲酸水溶液。
31、在本发明的一种优选实施方式中，步骤(3)中，
32、检测样品为第一对照品溶液和/或第一供试品溶液时，所述梯度洗脱的洗脱程序如下表
33、
34、在本发明的一种优选实施方式中，步骤(3)中，
35、检测样品为第二对照品溶液和/或第二供试品溶液时，所述梯度洗脱的洗脱程序如下表
36、
37、相比于现有技术，本发明的有益效果为：
38、1、本发明能够测定羌活胜湿汤煎液中五种指标成分含量，分别为羌活醇、藁本内酯、蛇床子素、升麻素苷和甘草酸，该五种指标成分含量能够实现对羌活、藁本、川芎、独活、防风和甘草六个药味进行质量评价，即除佐药蔓荆子外，能够实现其他君药、臣药、佐药和使药的全面质量评价，进而更好地控制羌活胜湿汤煎液的质量。
39、2、本发明的检测方法所需时间非常短，能够大幅度降低羌活胜湿汤煎液的检测时间成本。
40、3、本发明的方法具有良好的专属性、线性、精密度、重复性、准确度。
1.一种羌活胜湿汤煎液指标成分含量的测定方法，其特征在于：包括下列步骤
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)的第一对照品溶液中，
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)的第二对照品溶液中，
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)的第一供试品溶液中，
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)的第二供试品溶液中，
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，
