本发明属于生物，具体涉及一种抗犬il-31的单克隆抗体及其应用。
背景技术：
1、白细胞介素31（interleukin-31，il-31），简称白介素31，是2004年发现的一种炎症性细胞因子，在人类和动物的皮肤瘙痒中起关键作用。il-31属于il-6家族，具有四个反平行的α螺旋，主要由辅助t细胞2型（th2）产生。il-31分子通过与il-31受体a（il31ra）和抑癌素m受体β（osmrβ）组成的异二聚体受体结合，使下游的jak-stat、mapk、pi3k等信号转导被通路激活，将瘙痒信号传递到中枢神经系统，通过轴突反射机制，使邻近的神经分支被激活，并将神经肽释放到皮肤中，从而引起炎症和瘙痒。已经有研究证明il-31能刺激犬背根神经节，引起强烈的瘙痒反应，并且与健康犬相比，患有特应性皮炎的犬血液中il-31的循环浓度显著升高。除此之外，il-31分子还在肺部炎症、炎性肠病、过敏性鼻炎及肥大细胞增多症等疾病中起重要作用。
2、目前宠物的饲养量日益增多，对于宠物疾病研究的需求也越来越大，但是国内对宠物领域的研究较少且落后，无法满足宠物行业所面临的诸多问题。瘙痒是犬常见的皮肤病症状之一，是特应性皮炎以及过敏性皮炎的典型临床症状。鉴于犬il-31分子参与促进引起皮肤瘙痒、过敏等症状，危害了宠物皮肤健康，但是国内对犬il-31研究较少且相关治疗产品稀缺。除此之外，单克隆抗体药物具有特异性强、反应灵敏等特点，越来越多地在临床上使用，能够特异性的针对某一靶点发挥作用。
3、因此，开发一种具有良好阻断活性、能够阻断犬il-31分子后续信号通路、达到抑制瘙痒目的的单克隆抗体具有重要意义。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种抗犬il-31的单克隆抗体及其应用，本发明中的抗犬il-31的单克隆抗体具有较好的阻断活性，该单克隆抗体通过特异性与犬il-31结合，阻断其与犬il-31受体a的结合，因此，在制备预防和/或治疗动物瘙痒症的药物中具有较好的应用前景。
2、在第一方面，本发明提供了一种抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段，包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括互补决定区cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，轻链可变区包括互补决定区cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3；其中，cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3的氨基酸序列分别如seq id no: 10-12所示；cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3的氨基酸序列分别如seq id no: 17-19所示。
3、在一些实施方案中，重链可变区还包括框架区hc-fr1、hc-fr2、hc-fr3、hc-fr4，轻链可变区还包括框架区lc-fr1、lc-fr2、lc-fr3、lc-fr4；其中，hc-fr1、hc-fr2、hc-fr3、hc-fr4的氨基酸序列分别如seq id no: 13-16所示；lc-fr1、lc-fr2、lc-fr3、lc-fr4的氨基酸序列分别如seq id no: 20-23所示。
4、在一些实施方案中，重链的氨基酸序列如seq id no: 26所示，轻链的氨基酸序列如seq id no: 27所示。
5、本发明中，发明人进一步研究发现，将抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段经犬源化改造后，得到的犬源化单克隆抗体具有更好的阻断活性。
6、在第二方面，本发明提供了编码上述任一项抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子。
7、在一些优选的实施方案中，核酸分子包括核苷酸序列如seq id no: 24所示的编码重链可变区的核酸分子和核苷酸序列如seq id no: 25所示的编码轻链可变区的核酸分子。
8、本发明提供的上述核酸分子通常可以通过pcr扩增或人工合成的方法获得。
9、在第三方面，本发明提供了一种重组载体，包含上述核酸分子。
10、本发明中的重组载体包括克隆载体和表达载体，克隆载体用于复制相关序列，表达载体用于表达相关基因。
11、在第四方面，本发明提供了一种重组细胞，包含上述核酸分子或上述重组载体。
12、在一些实施方案中，重组细胞的制备方法包括将上述重组载体转化至表达宿主细胞中的步骤。
13、在第五方面，本发明提供了一种对上述任一项抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段的阻断活性进行检测的方法，包括如下步骤：s1、分别构建pstat-luc载体、pcdna3.1-cilra载体；s2、将pstat-luc载体和pcdna3.1-cilra载体转染至hela细胞中；s3、将抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段与il-31蛋白混合孵育，然后加入到hela细胞中进行孵育，最后检测荧光素，得到单克隆抗体或其抗原结合片段的阻断活性。
14、在一些实施方案中，pstat-luc载体是将stat核苷酸序列（seq id no: 3）插入到报告基因载体pgl3-promotor的多克隆位点区得到；pcdna3.1-cilra载体是将il-31ra核苷酸序列（seq id no: 4）替换pcdna3.1中hind ⅲ和xhoⅰ位点之间的序列得到。
15、在第六方面，本发明提供了上述任一项抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段、上述核酸分子、上述重组载体或上述重组细胞在制备预防和/或治疗动物瘙痒症的药物中的应用。
16、在一些实施方案中，动物包括犬。
17、本发明中，动物可以为本领域常见的动物，例如犬、猫、狗，本发明中，动物优选为犬。
18、在第七方面，本发明提供了一种药物组合物，包括上述任一项抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段。
19、在一些实施方案中，药物组合物还包括药学上可接受的载体。
20、本发明的有益效果是：区别于现有技术的情况，本发明提供一种具有较好的阻断活性的抗犬il-31的单克隆抗体，该单克隆抗体通过特异性与犬il-31结合，阻断其与犬il-31受体a的结合，从而阻断犬il-31下游信号通路，抑制瘙痒症状，因此，在制备预防和/或治疗动物瘙痒症的药物中具有较好的应用前景。
1.一种抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括互补决定区cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，所述轻链可变区包括互补决定区cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3；
2.根据权利要求1所述的抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链可变区还包括框架区hc-fr1、hc-fr2、hc-fr3、hc-fr4，所述轻链可变区还包括框架区lc-fr1、lc-fr2、lc-fr3、lc-fr4；
3. 根据权利要求1所述的抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述重链的氨基酸序列如seq id no: 26所示，所述轻链的氨基酸序列如seq id no: 27所示。
4.编码权利要求1-3中任一项所述的抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段的核酸分子。
5.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求4所述的核酸分子。
6.一种重组细胞，其特征在于，包含权利要求4所述的核酸分子或权利要求5所述的重组载体。
7.一种对权利要求1-3中任一项所述的抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段的阻断活性进行检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.权利要求1-3中任一项所述的抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段、权利要求4所述的核酸分子、权利要求5所述的重组载体或权利要求6所述的重组细胞在制备预防和/或治疗动物瘙痒症的药物中的应用。
9.一种药物组合物，其特征在于，包括权利要求1-3中任一项所述的抗犬il-31的单克隆抗体或其抗原结合片段。
10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，还包括药学上可接受的载体。
