本申请涉及致病菌的前增菌培养基,具体涉及一种用于单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基及制备方法。
背景技术:
1、食品安全问题与人民群众生命安全、身体健康息息相关,一直是国家及人民重点关注的议题。近年来国家食品安全抽检情况分析和食源性疾病爆发检测数据显示,微生物所导致的食品安全不合格问题依旧是食源性疾病的主要原因。
2、单增李斯特菌(listeria monocytogenes)和金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)是食品中常见的致病菌,准确检测这些致病菌是维护食品安全的最后一道屏障。在食源性致病菌快速检测方面,免疫学、分子生物学等相较国标检测法具有高特异性和灵敏度等特点。但通常情况下食源性致病菌在食物基质中含量较低,难以直接检测。因此,在检测致病菌前对其进行富集对于提高检测效率至关重要。然而每种致病菌都有各自的营养需求,所以培养不同的致病菌往往需要不同的增菌培养基,在一定程度上增加了检测工作量。因此,研制一种可以使单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌快速增殖的通用培养基可以提升致病菌的检测效率。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种用于单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌符合增菌的培养基及制备方法,克服了现有技术中存在培养不同致病菌使用不同的增菌培养基,增加检测工作量的问题,适用于现代新型检测技术前处理预增菌,实现单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌的同时快速检测。
2、为解决上述技术问题,本发明采用了以下方案:
3、一种用于单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基,其配方组成为:胰蛋白胨16-18g/l、蛋白胨3-7g/l、酵母粉3-7g/l、大豆蛋白胨4-16g/l、氯化钠10-40g/l、缓冲剂9-11g/l、促进剂5-34g/l和抑制剂1-16mg/l,加水至1000ml,调ph至7.2-7.4;
4、所述水为超纯水或者蒸馏水。
5、优选地,所述缓冲剂的组成为磷酸氢二钾8.5-9.5g/l和磷酸二氢钾0.5-1.5g/l;
6、所述促进剂的组成为葡萄糖2-16g/l和丙酮酸钠3-18g/l;
7、所述抑制剂的组成为亚碲酸钾0.5-10mg/l和萘啶酮酸0.5-6mg/l。
8、优选地,其配方组成为:胰蛋白胨17g/l、蛋白胨5g/l、酵母粉6g/l、大豆蛋白胨16g/l、氯化钠20g/l、磷酸氢二钾9g/l、磷酸二氢钾1.4g/l、葡萄糖15.5g/l、丙酮酸钠12g/l、亚碲酸钾2.5mg/l、萘啶酮酸2.0mg/l,加超纯水或者蒸馏水至1000ml,调ph至7.2-7.4。
9、一种用于单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌培养基的制备方法,采用上述的一种用于单增斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基,包括以下步骤:
10、步骤1:按照重量份将胰蛋白胨17g/l、蛋白胨5g/l、酵母粉6g/l、大豆蛋白胨16g/l、氯化钠20g/l、磷酸氢二钾9g/l、磷酸二氢钾1.4g/l、葡萄糖15.5g/l、丙酮酸钠12g/l、亚碲酸钾2.5mg/l、萘啶酮酸2mg/l,加至1000ml超纯水或者蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,冷却至室温后,调ph至7.2-7.4;
11、步骤2:121℃高压灭菌20min,4℃保存。
12、本发明的提供的复合增菌培养基中胰蛋白胨、蛋白胨、酵母粉、大豆蛋白胨、酵母粉是细菌生长繁殖所必须的碳源、氮源等营养要素;氯化钠维持培养基渗透压;磷酸氢二钾、磷酸二氢钾是缓冲剂,防止细菌生长繁殖过程中产酸抑制其生长;葡萄糖和丙酮酸钠是作为促进剂促进目标菌的生长;亚碲酸钾和萘啶酮酸作为抑制剂旨在抑制革兰氏阴性菌。
13、与光谱性增菌液相比,本发明的选择性增菌液中加入了抑制剂,可在一定程度上抑制大肠杆菌o157:h7、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、福氏志贺菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌等非目的菌的生长。
14、本发明的有益效果为:本发明复合增菌培养基的配方选择特定比例和特定组分的促进剂和抑制剂,使单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌中单增菌效果优于目标菌各自的国标选择性增菌培养基,可在一定程度上抑制大肠杆菌o157:h7、肠炎沙门氏菌、福氏志贺菌、副溶血性弧菌等非目标菌生长。该复合增菌培养基能够实现单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌快速增殖,在非目标菌共存下对两种目标菌生长基本没有影响。
1.一种用于单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基,其特征在于,其配方组成为:胰蛋白胨16-18g/l、蛋白胨3-7g/l、酵母粉3-7g/l、大豆蛋白胨4-16g/l、氯化钠10-40g/l、缓冲剂9-11g/l、促进剂5-34g/l和抑制剂1-16mg/l,加水至1000ml,调ph至7.2-7.4;
2.根据权利要求1所述的一种用于单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基,其特征在于,所述缓冲剂的组成为磷酸氢二钾8.5-9.5g/l和磷酸二氢钾0.5-1.5g/l;
3.根据权利要求2所述的一种用于单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基,其特征在于,其配方组成为:胰蛋白胨17g/l、蛋白胨5g/l、酵母粉6g/l、大豆蛋白胨16g/l、氯化钠20g/l、磷酸氢二钾9g/l、磷酸二氢钾1.4g/l、葡萄糖15.5g/l、丙酮酸钠12g/l、亚碲酸钾2.5mg/l、萘啶酮酸2.0mg/l,加超纯水或者蒸馏水至1000ml,调ph至7.2-7.4。
4.一种用于单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌培养基的制备方法,其特征在于,采用权利要求2所述的一种用于单增斯特菌和金黄色葡萄球菌复合增菌的培养基,包括以下步骤:
