本发明属于医药检测的，具体涉及逆向分析聚原酸酯原料的方法及其应用。
背景技术：
1、聚原酸酯（poly(ortho esters)），是一种新型生物可降解高分子缓释材料，自首次合成以来，因其具有独特的性能，引起众多学者的关注。聚原酸酯（poe）是一种人工合成的生物可降解高分子材料，通过多元原酸或多元原酸酯与多元醇类，在无水条件下缩合形成原酸酯键而制得，其在生物体内的降解是由于水分渗入聚合物内，使poe中酯键水解，从而引起面降解及本体降解。poe作为高分子材料，可裹挟多种目标药物起到缓释效果，同时降解后的水溶性小分子可被有机体代谢，是一种理想的缓释材料，可作为主要辅料完成多种缓控释制剂的临床应用。
2、目前，对于混合共聚物的单体摩尔比例的检测，通常采用常规的核磁检测，因仪器昂贵、解析困难、检测结果误差大，不利于poe单体比例的常规检测，且无法应对复杂处方中的聚原酸酯辅料的解析。对于poe的应用，目前主要作为布比卡因-美洛昔康缓释溶液的辅料，进行了处方的临床应用，缓控释效果显著且价格昂贵。poe为混合共聚物，定向合成具有理想缓释效果的辅料相对困难，且常规分析方法无法应用于检测。因此，迫切需要一种专属性强，准确度高的分析方法检测poe体外多种降解杂质的（乙醇酸、三乙二醇、丙酸）的含量。通过含量计算构成单体比例，对分析布比卡因-美洛昔康缓释溶液处方及poe的控制具有极其重要的意义。目前，可以采用gc-ms法进行个别聚原酸酯降解杂质检测，但存在几个无法克服的缺点，第一点：乙醇酸加热至沸点时存在分解现象，无法使用gc解析；第二点降解过程均在水环境下进行，gc分析需要蒸干再溶解过程，重现性及回收率无法保证；第三点制剂处方复杂，gc-ms分析专属性较差。
技术实现思路
1、本发明要解决的技术问题是克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种逆向分析聚原酸酯原料的方法，通过体外降解poe，进行高效液相色谱法分析出原poe的原料中单体的配方含量，将其应用于布比卡因-美洛昔康缓释溶液的处方控制起到关键作用。
2、本发明所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法，包括以下步骤：首先将聚原酸酯进行降解，得到的降解溶液进行高效液相色谱分析，根据分析结果计算出聚原酸酯中单体的配比。
3、聚原酸酯是由三乙二醇、乙交酯、3,9-二亚乙基-2,4,8,10-四氧杂螺[5,5]十一烷为单体共聚的高分子材料。乙交酯、乙二醇、3,9-二亚乙基-2,4,8,10-四氧杂螺[5,5]十一烷三者单体的理论摩尔比为（1:4.5:4）-（1:5.5:5），优选为1:4.5:4、1:5.5:5。
4、降解步骤为将聚原酸酯置于体积比为1%~10%的磷酸水溶液中，其中聚原酸酯与磷酸水溶液的比例为（1-30）mg:1ml进行配制，再在37℃-90℃高温破坏6h-72h，得到降解溶液，（酸浓度及温度越高，降解速率越快）。
5、所述的高效液相色谱的色谱条件包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，检测波长190-205nm，柱温27-35℃，以磷酸缓冲溶液为流动相a，乙腈体系为流动相b，进行梯度洗脱，梯度洗脱为：
6、第一梯度洗脱时长0min，流动相a占比95±1%，流动相b占比5±1%；
7、第二梯度洗脱时长5±2min，流动相a占比95±1%，流动相b占比5±1%；
8、第三梯度洗脱时长13±2min，流动相a占比50±5%，流动相b占比50±5%；
9、第四梯度洗脱时长25±2min，流动相a占比50±5%，流动相b占比50±5%；
10、第五梯度洗脱时长25.1±2min，流动相a占比95±1%，流动相b占比5±1%；
11、第六梯度洗脱时长45±2min，流动相a占比95±1%，流动相b占比5±1%。
12、磷酸缓冲溶液为体积比0.10%-0.18%的磷酸水溶液。
13、所述的高效液相色谱的色谱条件还包括：采用pda或紫外检测器；流动相流速为0.4~0.7ml/min；进样体积为5~30µl。优选的色谱条件为：优选色谱柱：wepuremicropμlitexp t3，规格4.6mm×250mm×5µm，填料十八烷基硅烷键合硅胶；
14、柱温：30℃；
15、检测波长：195nm；
16、流速：0.5ml/min；
17、进样量：10μl；
18、流动相：流动相b为乙腈体系，流动相a为0.10%~0.18%（v/v）磷酸水溶液体系，梯度洗脱；
19、梯度洗脱条件：
20、第一梯度洗脱时长0min，流动相a占比95%，流动相b占比5%；
21、第二梯度洗脱时长5min，流动相a占比95%，流动相b占比5%；
22、第三梯度洗脱时长13min，流动相a占比50%，流动相b占比50%；
23、第四梯度洗脱时长25min，流动相a占比50%，流动相b占比50%；
24、第五梯度洗脱时长25.1min，流动相a占比95%，流动相b占比5%；
25、第六梯度洗脱时长45min，流动相a占比95%，流动相b占比5%。
26、所述的高效液相色谱分析方法的步骤为：
27、（1）制备对照品溶液：取乙醇酸、三乙二醇及丙酸对照品，加溶剂溶解并定量稀释制成对照品溶液；
28、（2）制备聚原酸酯供试品溶液：取聚原酸酯的降解溶液，作为聚原酸酯供试品溶液；
29、（3）检测：分别量取溶剂、对照品溶液及聚原酸酯供试品溶液，按照色谱条件，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，聚原酸酯供试品溶液色谱图中，确定有与对照品溶液中一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算出降解杂质含量。
30、所述的溶剂为1~10%（v:v）的磷酸水溶液。
31、所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法的应用：按照逆向分析聚原酸酯原料的方法，将方法中的聚原酸酯替换为布比卡因-美洛昔康缓释溶液，计算出布比卡因-美洛昔康缓释溶液中聚原酸酯的单体配比。
32、市售布比卡因-美洛昔康缓释溶液中辅料聚原酸酯的质量占比为624mg/g。
33、本发明所述的聚原酸酯为三乙二醇、乙交酯、3,9-二亚乙基-2,4,8,10-四氧杂螺[5,5]十一烷为单体共聚的高分子材料，其降解过程就是在水和酸的侵蚀下逐级水解，中间降解过程复杂，如图1所示，最终水解成小分子片段季戊四醇、乙醇酸、三乙二醇及丙酸，其中季戊四醇与丙酸片段来源于3,9-二亚乙基-2,4,8,10-四氧杂螺[5,5]十一烷，该单体降解后可得一分子的丙酸和2分子的季戊四醇；乙醇酸来源于乙交酯，三乙二醇来源于单体本身。poe体外最终降解杂质为季戊四醇、乙醇酸、三乙二醇、丙酸这四个物质，通过检测乙醇酸、三乙二醇、丙酸的含量可计算出三个单体的摩尔百分比。
34、将本发明的逆向分析聚原酸酯原料的方法用于处方布比卡因-美洛昔康缓释溶液中因空白溶剂和制剂中其他成分干扰，季戊四醇与其他杂质分离度情况未达到要求，不计算此杂质含量，通过检测乙醇酸、三乙二醇、丙酸以达到目的。
35、此方法主要可以进行poe物料控制及处方布比卡因-美洛昔康缓释溶液中缓控释辅料poe的解析工作。对该缓控释辅料的发展存在极其重要的作用。
36、与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：
37、（1）本发明的逆向分析聚原酸酯原料的方法，不依赖核磁手段，通过布比卡因-美洛昔康缓释溶液中主要缓控释辅料poe体外最终降解的乙醇酸、三乙二醇、丙酸的hplc含量检测方法，计算出各单体的摩尔百分比，为poe质量控制、工艺开发及处方解析起到关键作用。
38、（2）本发明的逆向分析聚原酸酯原料的方法，简便快捷、专属性强、准确度高，可定性及定量检测聚原酸酯中多种降解杂质，对poe的质量的控制及布比卡因-美洛昔康缓释溶液处方解析逆向解析工作具有重要的现实意义，对该缓控释辅料的发展存在极其重要的作用。
1.一种逆向分析聚原酸酯原料的方法，其特征在于：包括以下步骤：将聚原酸酯进行降解，得到的降解溶液进行高效液相色谱分析，根据分析结果计算出聚原酸酯中构成单体的配比。
2.根据权利要求1所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法，其特征在于：聚原酸酯是由三乙二醇、乙交酯、3,9-二亚乙基-2,4,8,10-四氧杂螺[5,5]十一烷为单体共聚的高分子材料。
3.根据权利要求2所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法，其特征在于：乙交酯、乙二醇、3,9-二亚乙基-2,4,8,10-四氧杂螺[5,5]十一烷三者单体的理论摩尔比为（1:4.5:4）-（1:5.5:5）。
4.根据权利要求1所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法，其特征在于：降解步骤为将聚原酸酯置于体积比为1%~10%的磷酸水溶液中，其中聚原酸酯与磷酸水溶液的比例为（1-30）mg:1ml，再在37℃-90℃高温破坏6h-72h，得到降解溶液。
5.根据权利要求1所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法，其特征在于：所述的高效液相色谱的色谱条件包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，检测波长190-205nm，柱温27-35℃，以磷酸缓冲溶液为流动相a，乙腈体系为流动相b，进行梯度洗脱，梯度洗脱为：
6.根据权利要求5所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法，其特征在于：磷酸缓冲溶液为体积比为0.10%-0.18%的磷酸水溶液。
7.根据权利要求5所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法，其特征在于：所述的高效液相色谱的色谱条件还包括：采用pda或紫外检测器；流动相流速为0.4~0.7ml/min；进样体积为5~30µl。
8.根据权利要求1所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法，其特征在于：所述的高效液相色谱分析方法的步骤为：
9.根据权利要求8所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法，其特征在于：所述的溶剂为体积比为1%~10%的磷酸水溶液。
10.一种权利要求1-9任一所述的逆向分析聚原酸酯原料的方法的应用，其特征在于：按照逆向分析聚原酸酯原料的方法，将方法中的聚原酸酯替换为布比卡因-美洛昔康缓释溶液，计算出布比卡因-美洛昔康缓释溶液中辅料聚原酸酯的单体配比。
