鸽血抗氧化和抗衰老活性肽及其制备方法与应用
本发明属于功能性肽开发，具体涉及鸽血抗氧化和抗衰老活性肽及其制备方法与应用。
背景技术：
1、肉鸽营养丰富，素有“一鸽胜九鸡”的美称，养殖量和消费量逐年上升。鸽血是肉鸽屠宰加工过程的主要副产物之一。动物血液中含有丰富的蛋白质，约占全血含量的10～20％，接近甚至高于同种畜禽肌肉组织中的蛋白含量，被称为“液态肉”，是非常重要的动物蛋白质资源。然而，目前肉鸽屠宰加工过程中鸽血通常被当做废弃物直接排放或用作动物饲料，造成严重的资源浪费和环境污染。现代医学认为，鸽血具有强身健体、美容养颜、造血补血、滋补益气和延年益寿等功效，是一种传统的滋补佳品，可作为功能性食品和食源性活性肽开发的优质原料。目前国内外对动物血液的研究主要集中在家禽鸡、鸭血和家畜猪、牛、鹿血等，对于鸽血深加工和功能活性的研究相对较少。
2、近年来，随着人口老龄化的加剧，各种与衰老相关的疾病如心脑血管疾病、神经退行性疾病、癌症等慢性疾病高发，带来了一系列的健康、社会和医疗问题。人口老龄化已成为全球面临的首要问题。如何延缓衰老并开发具有抗衰老功效的功能性食品已成为生命科学领域的研究热点。
3、衰老机制学说中，自由基学说是最受国际公认的机制之一。衰老过程本身是体内自由基和抗氧化剂失衡所致，导致氧化应激，从而产生细胞损伤以加速衰老，因此抗氧化和抗衰老有着密切联系。近年来，已经发现一些多糖类(如真菌多糖、枸杞多糖、藻类多糖)、不饱和脂肪酸类(如dha、α-亚麻酸等)和多肽类(如海参多肽、罗非鱼多肽、谷胱甘肽等)物质具有良好的抗氧化、抗衰老功效。其中，多肽类物质由于溶解性好、易吸收、低致敏性、具有多种生理功能备受关注。
4、目前尚未见有利用鸽血制备抗氧化和抗衰老活性多肽的相关报道。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供鸽血抗氧化和抗衰老活性肽及其制备方法与应用。
2、本发明的目的通过下述技术方案实现：
3、鸽血抗氧化和抗衰老活性肽的制备方法，包括如下步骤：
4、(1)鸽血加入抗凝剂，并进行溶血预处理，使鸽血血红蛋白溶出；
5、(2)预处理后加入去离子水，调节血水比和ph值，加入蛋白酶进行酶解，酶解结束后灭酶，冷却至室温后，调节ph至7.0，离心得到上清液，干燥后得到鸽血酶解多肽，该鸽血酶解多肽即为鸽血抗氧化、抗衰老活性多肽。
6、发明人在研究中发现，本发明通过上述方法制备得到的鸽血活性多肽，其具有良好的抗氧化和抗衰老活性。
7、进一步地，上述步骤(1)中，抗凝剂优选0.4％柠檬酸钠溶液；预处理条件为：-15～-20℃反复冻融1～3次，或采用高速剪切机5000～8000rpm均质3～5min，或采用超声细胞破碎仪20khz下100～300w超声处理3～5min；
8、最优选地，步骤(1)中，预处理的条件为：采用超声细胞破碎仪20khz下100w超声5min。
9、进一步地，上述步骤(2)中，所述的血水比为鸽血：去离子水的质量比1:0.5～1:2.5；
10、进一步地，上述步骤(2)中，蛋白酶选自胃蛋白酶或胰蛋白酶，优选胃蛋白酶。
11、发明人在研究中发现，在本发明制备方法中，酶的选择对于制备得到的鸽血多肽的抗氧化和抗衰老活性大小起着重要的影响；研究表明，采用胃蛋白酶和胰蛋白酶水解制备得到的鸽血活性多肽，其dpph和abts自由基清除活性(抗氧化体外指标)及酪氨酸激酶抑制活性(抗衰老体外指标)显著高于其他蛋白酶，但是胰蛋白酶水解后的酶解液蛋白回收率较低，因此，最佳水解蛋白酶为胃蛋白酶。
12、进一步地，上述步骤(2)中，胃蛋白酶酶解条件为：温度为35-40℃，ph值为1.5～2.0，酶添加量为4000～12000u/g、酶解时间为1～5h；
13、进一步地，上述步骤(2)中，胰蛋白酶酶解条件为：温度为35-40℃，ph值为7.0～8.0，酶添加量为4000～12000u/g、酶解时间为1～5h；
14、进一步，上述步骤(2)中，所述的灭酶条件为：温度90～100℃，时间10～15min。
15、本发明还请求保护上述制备方法制得的鸽血抗氧化和抗衰老活性肽在抗衰老功能食品、保健品、化妆品或药品中的应用。
16、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
17、1、本发明以鸽血为原料，采用蛋白酶水解法制备得到一种具有抗氧化和抗衰老活性肽。首先采用预处理技术提高鸽血血红蛋白溶出率。通过对鸽血酶解液蛋白回收率、水解度、dpph和abts抗氧化活性、酪氨酸激酶抑制活性进行评价，筛选出胃蛋白酶和胰蛋白酶作为鸽血蛋白酶解的较佳酶种类，其中以胃蛋白酶为最佳，进一步通过单因素和正交试验对鸽血酶解制备抗氧化与抗衰老多肽的工艺进行优化，筛选出胃蛋白酶的最佳水解工艺：血水比为1:1.2，温度为37℃、ph值为2.0、酶添加量为12000u/g、酶解时间为4h，该工艺下得到的鸽血活性肽主要由分子量小于5000kda的肽段组成(占比78.98％)，具有较高含量的必需氨基酸和抗氧化抗衰老活性氨基酸，分别达42.01％和27.22％。
18、2、通过动物实验结果可知，本发明制备得到的鸽血活性多肽能够通过调节d-半乳糖致衰小鼠体内氧化应激和脑组织中单胺氧化酶(mao)、晚期糖基化终末产物(ages)及衰老调控基因klotho蛋白的水平实现其抗氧化和抗衰老功效。
技术特征：
1.鸽血抗氧化和抗衰老活性肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述胃蛋白酶酶解条件为：温度为35-40℃，ph值为1.5～2.0，酶添加量为4000～12000u/g、酶解时间为1～5h。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述胰蛋白酶酶解条件为：温度为35-40℃，ph值为7.0～8.0，酶添加量为4000～12000u/g、酶解时间为1～5h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的血水比为鸽血：去离子水的质量比1:0.5～1:2.5。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述溶血预处理的条件为：-15～-20℃反复冻融1～3次，或采用高速剪切机5000～8000rpm均质3～5min，或采用超声细胞破碎仪20khz下100～300w超声处理3～5min。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，抗凝剂为0.4％柠檬酸钠溶液。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述灭酶的条件为：温度90～100℃，时间10～15min。
8.一种鸽血抗氧化和抗衰老活性肽，其特征在于是由权利要求1-7任一项所述的方法制得。
9.权利要求8所述的鸽血抗氧化和抗衰老活性肽在制备抗衰老功能食品、保健品、化妆品或药品中的应用。
技术总结
本申请公开了鸽血抗氧化和抗衰老活性肽及其制备方法与应用，所述鸽血抗氧化和抗衰老活性肽的制备方法包括如下步骤：鸽血加入抗凝剂，并进行溶血预处理，使鸽血血红蛋白溶出；预处理后加入去离子水，调节血水比和pH值，加入蛋白酶进行酶解，酶解结束后灭酶，冷却至室温后，调节pH至7.0，离心得到上清液，干燥后得到鸽血酶解多肽；所述的蛋白酶为胃蛋白酶或胰蛋白酶。本发明制备得到的鸽血活性多肽能够通过调节D‑半乳糖致衰小鼠体内氧化应激和脑组织中单胺氧化酶(MAO)、晚期糖基化终末产物(AGEs)及衰老调控基因Klotho蛋白的水平实现其抗氧化和抗衰老功效。
技术研发人员：张远红,曾晓房,王宏,董浩,李滢,于立梅,陈伟波
受保护的技术使用者：仲恺农业工程学院
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23