紧密连接蛋白6抗体和治疗癌症的方法

背景技术：

1、抗体由于其特异性靶向细胞、细菌、病毒或毒素上不同抗原的能力而构成了以有限副作用为特征的强效治疗剂。1986年，第一种治疗性单克隆抗体orthoclone okt3被引入市场。从那时起，这类生物制药产品已显著增长。2014年底，四十七种单克隆抗体产品已在美国或欧洲获得批准以用于治疗多种疾病，包括癌症和炎性、心血管、呼吸道和感染性疾病。

2、美国食品和药物管理局目前批准了十二种以上的单克隆抗体来治疗癌症。这些剂中有指示用于慢性淋巴细胞白血病(cll)的阿仑单抗和用于治疗乳腺癌的曲妥珠单抗一些抗体用化疗药物标记，包括例如本妥昔单抗-维多汀(brentuximab vedotin)和ado-曲妥珠单抗emtansine其他抗体产品诸如博纳吐单抗(blinatumomab)(blincyto)被设计为识别并结合两种不同的抗原。尽管此类抗体产品可商购获得，但目前的癌症发病率和癌症死亡人数仍然很高。据报道，每年每100,000名男性和女性中癌症发病率大于450，并且每年每100,000名男性和女性中癌症死亡率仅超过170。

技术实现思路

1、本文提供了与紧密连接蛋白-6(cldn6)结合的抗原结合蛋白。在各个方面，本公开的抗原结合蛋白与人cldn6结合并且任选地与小鼠cldn6结合。在各个方面，抗原结合蛋白与cldn6的胞外结构域(ecd)结合。在各种情况下，抗原结合蛋白与cldn6的ecd的胞外环2(el2)结合。在各个方面，抗原结合蛋白与el2结合并且不与cldn6的ecd的胞外环1(el1)结合。在各种情况下，抗原结合蛋白与人紧密连接蛋白家族的另外成员包括例如紧密连接蛋白-3(cldn3)、紧密连接蛋白-4(cldn4)和紧密连接蛋白-9(cldn9)结合。在各种情况下，抗原结合蛋白与cldn6以及cldn4和cldn9中的至少一者结合。在各种情况下，抗原结合蛋白与cldn6结合并且不与紧密连接蛋白家族的任何其他成员结合。在各个方面，抗原结合蛋白与人卵巢癌细胞(例如，ovca429细胞)内源性表达的cldn6结合，并且在使用ovca429细胞的facs亲和力测定中表现出小于约1200nm的ic50。在各种情况下，本公开的抗原结合蛋白在没有任何其他部分附着于抗原结合蛋白的情况下抑制受试者(例如人)中的肿瘤生长。在各种情况下，未缀合至异源部分(例如，未缀合至任何化疗剂、药物或毒性部分)的抗原结合蛋白抑制受试者(例如，人)中的肿瘤生长。

2、在各个方面，抗原结合蛋白与人癌细胞表达的cldn6结合。在各个方面，抗原结合蛋白抑制人cldn6与参考抗cldn6抗体之间的结合相互作用。不受特定理论的束缚，本文提供的抗原结合蛋白的抑制作用允许此类实体可用于减少肿瘤生长和治疗患有肿瘤或癌症的受试者的方法中。如本文进一步讨论的，在各个方面，抗原结合蛋白为抗体、其抗原结合抗体片段或抗体蛋白产物。

3、本公开还提供了包含特定组的氨基酸序列中的至少3、4、5个或所有氨基酸序列的抗原结合蛋白。在各个方面，抗原结合蛋白包含本文所公开的cldn6抗体的至少3、4、5或6个互补决定区(cdr)氨基酸序列。

4、本公开还提供了包含如本文详述的氨基酸序列的抗原结合蛋白。在各个方面，如本文进一步所述，抗原结合蛋白包含表a、表a1、表b、表b1、表c或表d或它们的组合中所列的seq id no:的氨基酸序列。

5、本文还提供了相关多肽、核酸、载体、宿主细胞和缀合物。还考虑了包含此类实体的试剂盒和药物组合物。

6、还提供了制备抗原结合蛋白的方法。在各个实施方案中，该方法包括培养包含编码如本文所述的抗原结合蛋白或多肽的核酸的宿主细胞，以便表达该抗原结合蛋白或多肽。

7、本文另外提供了治疗患有癌症的受试者的方法。在各个实施方案中，该方法包括以有效治疗受试者的癌症的量向受试者施用本公开的药物组合物。

8、还提供了治疗患有表达cldn6的癌症的受试者的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的药物组合物。还考虑了抑制受试者中肿瘤生长的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的药物组合物。

9、一种减小受试者中肿瘤大小或预防受试者中癌症复发的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的药物组合物。

10、本文还提供了一种治疗被诊断为cldn6低过表达者的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用本文所述的药物组合物。

11、在各个实施方案中，施用诱导肿瘤细胞(例如表达cldn6的细胞)的凋亡。在各个实施方案中，施用诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)或补体依赖性细胞毒性(cdc)、肿瘤坏死和细胞死亡或耗竭、和/或肿瘤细胞粘附的破坏，每一种都导致肿瘤消退或肿瘤生长减慢。

技术特征：

1.一种与人紧密连接蛋白6(cldn 6)蛋白结合的抗原结合蛋白，其选自由以下组成的组：

2.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其中，在a)中，

3.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其中，在b)中，

4.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其中，在c)中，

5.如权利要求1所述的抗原结合蛋白，其中，在d)中，

6.一种结合紧密连接蛋白6的抗原结合蛋白，其包括：

7.如权利要求1至6任一项所述的抗原结合蛋白，其中，所述抗原结合蛋白为抗体或抗体的抗原结合片段。

8.如权利要求7所述的抗原结合蛋白，其中，所述抗原结合片段为选自由scfv、f(ab')2、fab、和fv组成的组。

9.如权利要求1至6任一项所述的抗原结合蛋白，其中，所述抗原结合蛋白为单克隆抗体。

10.如权利要求1至6任一项所述的抗原结合蛋白，其中，所述抗原结合蛋白为人抗体、嵌合抗体或者人源化抗体。

11.如权利要求1或2所述的抗原结合蛋白，其中，所述抗原结合蛋白包括seq id no:387中列出的重链可变结构域氨基酸序列和seq id no:389中列出的轻链可变结构域氨基酸序列。

12.如权利要求11所述的抗原结合蛋白，其中，所述抗原结合蛋白为抗体或抗体的抗原结合片段。

13.如权利要求11所述的抗原结合蛋白，其中，所述抗原结合蛋白为单克隆抗体。

14.如权利要求11所述的抗原结合蛋白，其中，所述抗原结合蛋白为人抗体、嵌合抗体或着人源化抗体。

15.一种缀合物，其包含如权利要求1至6任一项所述的抗原结合蛋白和细胞毒性剂或化疗剂。

16.如权利要求15所述的缀合物，其进一步包含接头。

17.如权利要求16所述的缀合物，其中，所述接头为可裂解的接头。

18.如权利要求15所述的缀合物，其中，所述化疗剂为抗有丝分裂药。

19.如权利要求15或18所述的缀合物，其中，所述化疗剂为单甲基奥瑞司他汀e(mmae)。

20.一种融合蛋白，其包含如权利要求1至6任一项所述的抗原结合蛋白。

21.一种融合蛋白，其包含如权利要求15所述的抗原结合蛋白。

22.一种核酸，其包含编码如权利要求1至6任一项所述的抗原结合蛋白，或者包含如权利要求1至6任一项所述的抗原结合蛋白的融合蛋白的核苷酸序列。

23.一种核酸，其包含编码如权利要求11所述的抗原结合蛋白，或者包含如权利要求11所述的抗原结合蛋白的融合蛋白的核苷酸序列。

24.一种载体，其包含如权利要求22所述的核酸。

25.一种载体，其包含如权利要求23所述的核酸。

26.一种宿主细胞，其包含如权利要求22所述的核酸。

27.一种宿主细胞，其包含如权利要求23所述的核酸。

28.一种产生与紧密连接蛋白6(cldn6)蛋白结合的抗原结合蛋白的方法，其包括(i)在细胞培养基中培养如权利要求26或27所述的宿主细胞，以及(ii)从所述细胞培养基收获所述抗原结合蛋白。

29.一种产生包括与紧密连接蛋白6(cldn6)蛋白结合的抗原结合蛋白的融合蛋白的方法，其包括(i)在细胞培养基中培养如权利要求26或27所述的宿主细胞，以及(ii)从所述细胞培养基收获所述融合蛋白。

30.一种产生药物组合物的方法，其包括组合如权利要求1至14中任一项所述的抗原结合蛋白、如权利要求15至19中任一项所述的缀合物、如权利要求20或21所述的融合蛋白、如权利要求22或23所述的核酸、如权利要求24或25所述的载体、如权利要求26或27所述的宿主细胞或它们的组合以及药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。

31.一种药物组合物，其包括如权利要求1至14中任一项所述的抗原结合蛋白、如权利要求15至19中任一项所述的缀合物、如权利要求20或21所述的融合蛋白、如权利要求22或23所述的核酸、如权利要求24或25所述的载体、如权利要求26或27所述的宿主细胞或它们的组合以及药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。

32.权利要求31所述的药物组合物在制造用于治疗表达cldn6的癌症的药物中的用途。

33.如权利要求32所述的用途，其中，所述药物用于预防受试者中的癌症复发。

34.如权利要求32所述的用途，其中，所述表达cldn6的癌症是cldn6的低过表达者。

35.如权利要求32所述的用途，其中，所述药物诱导肿瘤细胞的凋亡。

36.如权利要求32所述的用途，其中，所述药物诱导表达cldn6的细胞的凋亡。

37.用于治疗表达cldn6的癌症的如权利要求31所述的药物组合物。

38.如权利要求37所述的药物组合物，其中，所述药物组合物用于预防受试者中的癌症复发。

39.如权利要求37所述的药物组合物，其中，所述表达cldn6的癌症是cldn6的低过表达者。

40.如权利要求37所述的药物组合物，其中，所述药物组合物诱导肿瘤细胞的凋亡。

41.如权利要求37所述的药物组合物，其中，所述药物组合物诱导表达cldn6的细胞的凋亡。

42.一种抑制肿瘤生长的体外或离体方法，其包括以有效抑制肿瘤生长的量使癌细胞与如权利要求31所述的药物组合物接触。

43.一种检测样品中的紧密连接蛋白6(cldn6)的方法，其包括使所述样品与如权利要求1至14中任一项所述的抗原结合蛋白、如权利要求15或19所述的缀合物、如权利要求20或21所述的融合蛋白接触，并测定包含与cldn6结合的所述抗原结合蛋白、所述缀合物或所述融合蛋白的免疫复合物。

技术总结
本发明涉及紧密连接蛋白6抗体和治疗癌症的方法。本公开提供了与紧密连接蛋白‑6(CLDN6)结合的抗原结合蛋白。在各个方面，所述抗原结合蛋白与CLDN6的胞外结构域的胞外环2(EL2)结合。本文还提供了相关多肽、核酸、载体、宿主细胞和缀合物。此外，提供了包含此类实体的试剂盒和药物组合物。还提供了制备抗原结合蛋白的方法和治疗患有癌症的受试者的方法。

技术研发人员：D·康克林,D·斯拉蒙,N·奥布赖恩,M·帕拉佐洛,E·冯尤伊
受保护的技术使用者：加利福尼亚大学董事会
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23