一种麦芽香肉杆菌及其培养物与其在抑制库蚊感染乙型脑炎病毒的应用
本发明属于生物，具体涉及一种具有抗乙脑病毒活性的蚊虫肠道共生菌—麦芽香肉杆菌(carnobacterium maltaromaticum)的应用。
背景技术：
1、流行性乙型脑炎(简称乙脑)是指由乙型脑炎病毒(japanese encephalitisvirus，jev)引起的以脑实质炎症为主要病变的急性传染病，属于重要人兽共患病。乙脑可感染人、马、猪、水禽等多种动物，其中猪是其扩增宿主，人和马为其终末宿主。jev可导致妊娠母猪流产，产木乃伊及死胎，公猪出现睾丸炎导致精液品质下降。人表现为病毒性脑炎，死亡率达25％-30％，50％的存活者会留下永久性的中枢神经系统损伤后遗症，如认知障碍、行为紊乱和失忆等，对生猪养殖业及人类社会公共卫生安全带来了恶劣影响。
2、乙脑是一种蚊媒传染病，发病高峰一般为夏秋季节，与其传播媒介库蚊的时空分布密切相关。乙脑在自然界中存在着“蚊—动物—蚊”传播循环，蚊子叮咬患病宿主动物后，宿主动物体内的病毒进入蚊子体内进一步复制，当病毒载量在其唾液腺达到一定水平时，蚊子再叮咬易感动物造成病毒的传播。乙脑并无特效治疗药物，通过疫苗接种和防蚊灭蚊可以有效防控乙脑。但即便如此，乙脑仍然对人类社会存在不可忽视的威胁。
3、蚊虫的肠道内存在着大量的共生菌，这些共生菌参与了蚊虫的多种生命活动，如在食物消化、营养代谢、免疫调节和抵御病原体感染上发挥重要作用。当蚊虫吸食含有病毒的血液后，病毒可能会与这些共生菌发生直接或间接的相互作用，而其中某些能够发挥抗病毒作用的共生菌则为防控蚊媒传染病提供了新途径，即降低蚊虫作为疾病传播媒介的能力，使得蚊群中的病毒感染率下降，以降低病毒经蚊传播的机率。
4、综上所述，库蚊肠道共生细菌在阻断乙脑传播上具有广阔的应用前景，是乙脑等蚊媒传染病防控的新方法。发掘新的具有优异抑制乙型脑炎病毒功能的天然菌株，尤其是具有肠道稳定定植能力的共生菌株，具有重大的应用价值。
技术实现思路
1、本发明所要解决的技术问题是提供一种可抑制乙脑病毒的天然菌株。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。
2、为了解决以上技术问题，本发明首先提供了一种麦芽香肉杆菌(carnobacteriummaltaromaticum)。本发明所提供麦芽香肉杆菌，其菌株编号为wd2，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为cgmcc no.26582。以下简称麦芽香肉杆菌。
3、本发明还提供了一种麦芽香肉杆菌的培养物，是将前述麦芽香肉杆菌在微生物培养基中培养得到的物质。
4、所述培养物含有麦芽香肉杆菌。
5、上述培养物中，所述培养物是将麦芽香肉杆菌在微生物培养基中培养得到的发酵产物。
6、上述培养物中，所述微生物培养基可为固体培养基或液体培养基。
7、术语“培养物”是指经人工接种和培养后，长有微生物群体的液体或固体产物(培养容器内的所有物质即发酵产物)的统称。即通过将微生物进行生长和/或扩增而获得的产物，其可以是微生物的生物学纯培养物，也可以含有一定量的培养基、代谢物和/或培养过程中产生的其他成分。术语“培养物”还包括通过将微生物传代而获得的传代培养物，其可以是某一代的培养物，也可以是若干代的混合物。
8、本发明还提供了一种菌剂，所述菌剂含有前述麦芽香肉杆菌或/和前所述的培养物。
9、具体而言，本发明中的麦芽香肉杆菌的菌剂的制备方法可包括：使用dmem培养基培养麦芽香肉杆菌，具体培养条件为：于恒温摇床30℃，200rpm，培养6-7h，得到od600nm值为1.0的菌液。
10、上述菌剂的活性成分可为麦芽香肉杆菌或/和麦芽香肉杆菌的代谢物或/和上述培养物，所述麦芽香肉杆菌的代谢物或/和上述培养物经1kd超滤管超滤后具有上层蛋白层和下层小分子层。上述菌剂的活性成分还可含有其他生物成分或非生物成分，上述菌剂的其他活性成分本领域技术人员可根据菌剂的效果确定。
11、上述菌剂中，所述菌剂还可包括载体。所述载体可为固体载体或液体载体。
12、所述固体载体可为矿物材料、生物材料；所述矿物材料可为草炭、粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种；所述生物材料可为各类作物的秸秆、松壳、稻草、花生壳、玉米粉、豆粉、淀粉、草炭和动物的粪便中的至少一种；所述液体载体可为水；所述菌剂中，麦芽香肉杆菌或/和麦芽香肉杆菌的代谢物可以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。所述菌剂的剂型可为多种剂型，如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
13、所述液体载体可为1～20％蔗糖溶液，例如2％，3％，5％，7％，8％，10％，12％，15％蔗糖溶液。
14、根据需要，所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、ph调节剂等。
15、进一步地，上述菌剂可用于抑制乙脑病毒感染动物。所述抑制乙脑病毒为拮抗或杀灭乙脑病毒，阻断乙脑病毒感染或传播。
16、本发明还提供了一种前述的麦芽香肉杆菌、前述的培养物、前述的菌剂的下述任意一种应用：
17、a1)、制备抑制乙脑病毒感染动物的产品；
18、a2)、制备预防乙脑病毒感染动物的产品；
19、a3)、制备阻止乙脑病毒传播媒介传播乙脑病毒的产品；
20、a4)、制备治疗乙脑病毒感染的产品。
21、所述产品的有效量为每毫升菌剂中含有1010至1012个麦芽香肉杆菌。所述产品可为乙脑传播媒介肠道定植的菌株。肠道定植为经口(口服、吸入等)摄入后进入肠道定植于肠中。
22、所述的抑制乙脑病毒的方法包括非治疗性的方法，如包括但不限于：体外抑制乙脑病毒，在培养物体系中抑制乙脑病毒，在非生物的环境中抑制乙脑病毒等。
23、进一步的，上述应用中所述动物为乙脑易感性蚊虫。
24、进一步的，上述应用中所述乙脑易感性蚊虫包括三带喙库蚊、致倦库蚊、淡色库蚊和/或白纹伊蚊。
25、进一步的，上述应用中所述乙脑病毒包括基因ⅰ型的乙脑病毒、基因ii型的乙脑病毒、基因ⅲ型的乙脑病毒、基因ⅳ型的乙脑病毒和/或基因ⅴ型的乙脑病毒。
26、本发明还提供了一种抑制乙脑病毒的方法，包括对受试动物或受试环境或受试物品施用前述的麦芽香肉杆菌及其培养物或前述菌剂进行抑制乙脑病毒。
27、所述受试动物可为乙脑传播媒介，如乙脑易感性蚊虫；也可为人、马、猪或水禽。所述受试物品可为衣服、毛巾等。所述受试环境可为空气、水等。
28、本发明提供的麦芽香肉杆菌或其培养上清，可有效抑制动物如库蚊感染乙脑病毒，可用做乙脑传播媒介肠道定植的菌株，通过在肠内拮抗或杀灭乙脑病毒发挥抑制乙脑病毒感染乙脑传播媒介的作用。除用于抑制乙脑传播媒介感染外，还可用于含有乙脑传播媒介的场所、物品或生物的防治。
技术特征：
1.麦芽香肉杆菌(carnobacterium maltaromaticum)，其特征在于：所述麦芽香肉杆菌的菌株编号为wd2，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为cgmcc no.26582。
2.权利要求1所述的麦芽香肉杆菌的培养物，是将权利要求1所述的麦芽香肉杆菌在微生物培养基中培养得到的物质。
3.菌剂，其特征在于：所述菌剂含有权利要求1所述的麦芽香肉杆菌或/和权利要求2所述的培养物。
4.根据权利要求3所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂为抑制乙脑病毒感染动物的制剂。
5.权利要求1所述的麦芽香肉杆菌、权利要求2所述的培养物或权利要求3或4所述的菌剂的下述任意一种应用：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述动物为乙脑易感性蚊虫、人、马、猪或水禽。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述乙脑易感性蚊虫包括三带喙库蚊、致倦库蚊、淡色库蚊和/或白纹伊蚊。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述乙脑病毒包括基因ⅰ型的乙脑病毒、基因ⅱ型的乙脑病毒、基因ⅲ型的乙脑病毒、基因ⅳ型的乙脑病毒和/或基因ⅴ型的乙脑病毒。
9.抑制乙脑病毒的方法，包括对受试动物或受试环境或受试物品施用权利要求1所述的麦芽香肉杆菌、权利要求2所述的培养物或权利要求3或4所述的菌剂进行抑制乙脑病毒。
技术总结
本发明公开了一种麦芽香肉杆菌，属于生物技术领域。本发明提供的麦芽香肉杆菌，其菌株编号为WD2，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.26582。本发明提供的麦芽香肉杆菌或其培养上清，可有效抑制动物如库蚊感染乙脑病毒，可用做乙脑传播媒介肠道定植的菌株，通过在肠内拮抗或杀灭乙脑病毒发挥抑制乙脑病毒感染乙脑传播媒介的作用。
技术研发人员：杜森焱,徐昌豪,朱茜
受保护的技术使用者：四川农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23