女性生殖道保护乳酸菌AUh01及其应用

本发明涉及微生物，具体地说，涉及一株女性生殖道保护乳酸菌auh01及其应用。

背景技术：

1、女性生殖道微生态系统的稳定性与阴道内菌群、内分泌调节系统、解剖结构以及局部免疫息息相关，其中阴道微生物群的正常结构在维持健康的阴道微环境中起着至关重要的作用，各种内源性和外源性因素的改变都会使微生态失调，如激素水平低下、卫生条件差、不洁性交、阴道冲洗、激素避孕及吸烟等，最终导致细菌性阴道病(bv)、霉菌性阴道炎(mv)和盆腔炎等妇科疾病，严重影响妇女的身心健康。此外，最近研究发现某些妇科癌症与菌群失调也相关。因此，恢复阴道微生物群正常生理结构是治疗该类疾病的关键。

2、乳酸菌(lactic acid bacteria)是一类能够利用可发酵糖产生大量乳酸的细菌的通称。从形态上，主要为球菌和杆菌，并且均为革兰氏阳性细菌。这类细菌在自然界分布广泛，并且在食品工业、农业、医药等与人类密切相关的领域里应用价值很高。乳酸细菌是人和动物体内必不可少的具有重要生理功能的菌群。除少数外，它们中的绝大部分无毒、无害、无副作用，具有维持机体微生态平衡的作用。乳酸杆菌是绝大多数育龄期女性阴道定植的主要细菌，在维持女性阴道健康中发挥着关键作用，而这一特点也为人类女性所特有。乳杆菌在健康女性阴道丰度通常在70％以上。

3、细菌性阴道感染(bacterial vaginosis，bv)是阴道微生态环境内菌群与分泌物生化性质变化引起的常见阴道疾病。bv是由多种细菌综合作用的结果，同时相对缺乏临床上的炎症反应。

4、目前，针对细菌性阴道病(bv)、霉菌性阴道炎(mv)和盆腔炎等妇科疾病的治疗主要有两大策略：一是使用抗生素；二是利用以益生菌为主的微生态制剂。尽管抗生素对控制疾病有效，但由于广谱抗生素缺乏特异性，在杀灭共生细菌的同时也会抑制乳杆菌的生长，且具有耐药性、治疗后高复发率以及清除正常部位内源性非靶菌群等诸多副作用。因此，为维持阴道微生态平衡和恢复其功能寻找一种抗生素替代疗法是必要的。近年来，以微生态制剂为主的微生态疗法为预防和治疗生殖道感染提供另一个合适的理论视角。

5、微生态制剂有益生素、生菌剂、促生素之称，是一种无毒副作用、无耐药性、无药物残留的天然生物活性制剂，其利用微生物及其代谢产物之间相互拮抗、互利共生关系而达到抑制病原微生物的作用。按使用的菌种类型可分为：单一菌类微生态制剂，如乳酸菌类、芽孢1杆菌类、酵母菌类、光合细菌类；复合微生态制剂包括益生素、益生元、合生素3类。

6、随着阴道微生态系统的组成及其复杂关系进一步被证实，使人们清楚地认识到生殖道菌群失衡是导致妇科感染性和炎性疾病发生的重要病因，恢复生殖道生态系统内稳态是治疗生殖道感染性疾病的关键。微生态制剂具有无毒、无害、无污染的优势，既可以快速构建生殖道微生态平衡，又能避免滥用抗生素导致的菌群失衡、二重感染等副作用，是一种预防和治疗女性生殖道感染疾病的新时代产品。基于现有临床证据，使用微生态制剂治疗生殖道感染有积极意义。因此，开发出更多新型的、有效的微生态制剂应用于实践中势在必行。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一株女性生殖道保护乳酸菌auh01及其应用。

2、为了实现本发明目的，本发明从健康女性分泌物中分离并鉴定得到乳酸菌，对纯化的乳酸菌菌株进行体外功能性评价，筛选出具有益生潜力的乳酸菌，并对优质菌株进行高密度发酵与均分稳定工艺研究，为菌株商业化生产提供指导。

3、第一方面，本发明提供一株女性生殖道保护乳酸菌auh01，分类命名为乳酸片球菌pediococcus acidilactici，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号cgmcc no.30220，保藏日期2024年4月1日。

4、第二方面，本发明提供含有乳酸片球菌auh01的菌剂或生物制品。

5、第三方面，本发明提供乳酸片球菌auh01在制备抑菌产品中的应用；

6、其中，所抑制的菌包括阴道加德纳菌(gardnerellavaginalis,gv)。

7、第四方面，本发明提供乳酸片球菌auh01在制备治疗阴道感染的产品中的应用；

8、其中，阴道感染是由阴道加德纳菌引起的。

9、第五方面，本发明提供一种治疗阴道感染的制剂，有效成分为乳酸片球菌auh01或其菌剂。

10、进一步地，所述制剂为口服或外用剂型。

11、第六方面，本发明提供乳酸片球菌auh01的发酵方法，制备乳酸片球菌auh01的种子液，将种子液按照2％-6％v/v的接种量接种于发酵培养基中，在30℃-38℃、转速60-100rpm的条件下进行发酵；

12、其中，所述发酵培养基的配制方法为：将蛋白胨10.0克、酵母提取物5.0克、葡萄糖20.0克、三聚磷酸钠2.0克、柠檬酸铵2.0克、醋酸钠5.0克、硫酸镁0.1克、二氢磷酸钾2.0克、磷酸氢二钠2.0克、吐温80 1.0ml和牛肉汤0.5克溶解于1000ml去离子水中，高温灭菌后即得；所述发酵培养基的初始ph为6.2-7.0(优选ph6.5)。

13、优选地，种子液的接种量为5％v/v，在30℃、转速90rpm的条件下进行发酵。

14、第七方面，本发明提供一种益生菌粉，包含乳酸片球菌auh01和冻干保护剂。

15、其中，所述冻干保护剂包含脱脂乳和海藻糖。

16、优选地，所述冻干保护剂中脱脂乳和海藻糖的质量比为(1-2):(2-1)。

17、更优选地，所述冻干保护剂中脱脂乳和海藻糖的质量比为1:1。

18、第八方面，本发明提供所述益生菌粉的制备方法，包括以下步骤：

19、(1)按照上述方法得到的发酵液经离心，收集菌泥；

20、(2)配制冻干保护剂：用水配制脱脂乳和海藻糖的混合液，即为冻干保护剂；

21、其中，脱脂乳的浓度为10％-15％，海藻糖的浓度为10％-15％；

22、(3)将菌泥与冻干保护剂按照质量比(0.8-1.2):(1.5-2.0)混合，冷冻干燥，即得。

23、第九方面，本发明提供乳酸片球菌auh01在产酸中的应用。

24、借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：

25、本发明提供一株来源于女性生殖道的新的乳酸片球菌auh01，其能产酸降低阴道ph值，从而有效抑制阴道内相关病原菌，且对阴道上皮细胞有一定的黏附作用，有利于其在阴道环境中的定植，从而发挥阴道微生态环境的维护及益生作用。另外，菌株auh01具有一定的耐酸、耐胆盐能力，可以开发成口服或外用剂型，应用前景广阔。

技术特征：

1.女性生殖道保护乳酸菌auh01，其为乳酸片球菌pediococcus acidilactici auh01，保藏编号为cgmcc no.30220。

2.含有权利要求1所述菌的菌剂或生物制品。

3.权利要求1所述菌在制备抑菌产品中的应用；

4.权利要求1所述菌在制备治疗阴道感染的产品中的应用；

5.一种治疗阴道感染的制剂，其特征在于，有效成分为权利要求1所述菌或其菌剂。

6.根据权利要求5所述的制剂，其特征在于，所述制剂为口服或外用剂型。

7.权利要求1所述菌的发酵方法，其特征在于，制备权利要求1所述菌的种子液，将种子液按照2％-6％v/v的接种量接种于发酵培养基中，在30℃-38℃、转速60-100rpm的条件下进行发酵；

8.益生菌粉，其特征在于，包含权利要求1所述菌和冻干保护剂；

9.根据权利要求8所述的益生菌粉，其特征在于，所述冻干保护剂中脱脂乳和海藻糖的质量比为(1-2):(2-1)。

10.权利要求8或9所述益生菌粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结
本发明提供一株女性生殖道保护乳酸菌AUh01及其应用。本发明提供一株来源于女性生殖道的新的乳酸片球菌AUh01，其能产酸降低阴道pH值，从而有效抑制阴道内相关病原菌，且对阴道上皮细胞有一定的黏附作用，有利于其在阴道环境中的定植，从而发挥阴道微生态环境的维护及益生作用。另外，菌株AUh01具有一定的耐酸、耐胆盐能力，可以开发成口服或外用剂型，应用前景广阔。

技术研发人员：逄晓阳,康文丽,汪家琦,吕加平,潘丽娜,魏雪,刘祺琛
受保护的技术使用者：中国农业科学院农产品加工研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23