一种具有抗炎效果的狭叶豆蔻籽提取液的制备方法及应用
本发明属于医药领域，具体涉及具有抗炎效果的狭叶豆蔻籽提取液的制备方法及应用。
背景技术：
1、狭叶豆蔻(aframomum angustifolium k.schum.)为姜科(zingiberaceae)豆蔻属多年生草本植物，是一种药食同源植物，又名窄叶非洲豆蔻、马达加斯加豆蔻、隆高扎草等。该植物生命力极为旺盛，即使被多次砍伐也能重新生长，因此也被称为longoza“不死草”。该植物整株可供药用，具有通便、抗溃疡、抗真菌、保肝和抗癌等特性，可用于治疗发热、腹泻等疾病。
2、狭叶豆蔻籽气味芳香，含有单萜烯、β-丁香油烃、β-蒎烯、β-石竹烯、酯类等生物活性成分，特色成分包括半日花烷二萜等，具有提升免疫力、镇静助眠、平衡神经系统等功效。其中，半日花烷二萜可以起到调节抗氧化防御系统、改变真皮表皮连接组织成分和调控表皮更新相关基因表达的作用，β-石竹烯具有极强的消炎作用。因此，狭叶豆蔻籽在医药、化妆品、食品行业具有广泛的应用前景。
3、专利申请文件cn111479552a公开了一种化妆品组合物，该组合物包含用极性多元醇溶剂、特别是二醇提取获得的狭叶豆蔻或唤妍草植物的种子提取物作为活性成分，所述提取物或活性成分能够减缓或预防导致线粒体老化和皮肤过早衰老的线粒体功能障碍。该专利通过将狭叶豆蔻种子粉末在静态室温下于丁二醇中浸渍过夜、过滤、中等温度下用丁二醇提取、过滤获得提取物或滤液并进行合并。这种提取方法时间长，醇类溶剂易燃，对设备和安全要求高，需要各项防火防爆措施。
4、e.m.gaydou等发表在revue francaise des corps gras，1983年1月第一期，第21-25页中的论文研究了从马达加斯加的一些植物(包括狭叶豆蔻)种子中提取的油的脂肪酸组成(见表1，续表2，第24页)。该植物种子提取物通过非极性溶剂(特别是使用己烷)的方式提取(见第24页，“实验部分”，第1段)，存在有害溶剂残留问题，还会造成环境污染。
5、专利申请文件cn101282711b描述了一种美容组合物，该美容组合物包含通过极性溶剂提取的非洲狭叶豆蔻的种子提取物，所述极性溶剂实际上包含体积比为70/30的乙醇/水的水醇混合物，溶剂使用量很大，对狭叶豆蔻种子进行三步连续提取，每次采用500升(l)水-醇混合物，之后合并滤出液，用正庚烷萃取进行脱脂，用活性炭进行脱色后获得提取物。该专利描述了通过刺激胶原质(特别是存在于真皮-表皮接合处或jde的vii型胶原蛋白)的合成和/或通过对耐酸纤维和/或中期弹性纤维的作用而产生的抗衰老效果。
6、文献us2010/0055217a与上述专利相似，描述了唤妍草的水醇提取物，但该提取物与lipochroman-6一起使用以获得协同效果。
7、以狭叶豆蔻为原料的化妆品在近年来大幅度增加，普遍认为狭叶豆蔻籽提取物具有良好的美白、抗衰和修护皮肤屏障的功效。但是现有技术中制备方法工艺复杂，对所得狭叶豆蔻籽提取物的研究多集中于抗氧化、抗皱和改变皮肤屏障方面，对抗炎症的研究相对薄弱。
技术实现思路
1、为了充分挖掘狭叶豆蔻的价值，本发明开发制作方法相对简单、提取效率高、绿色环保，且有抗炎效果的狭叶豆蔻籽提取液。因此，本发明旨在提供一种具有抗炎效果的狭叶豆蔻籽提取液的制备方法和应用，该方法采用复合酶辅助加热水提，提取率高，步骤简单易操作，避免使用对环境有害的溶剂，不存在有机溶剂残留和环境污染的问题，且需要很少的能量。目前关于狭叶豆蔻籽的抗炎活性研究或相关专利仍然未见报道，已发现的植物源抗炎天然产物主要包括黄酮类、生物碱类、多糖等，此类提取物较易溶解于水，易于添加至其他基质成分中。因此，本发明使用复合酶辅助加热水提法得到狭叶豆蔻籽提取液，并首次证明其作为抗炎药物或护肤产品使用的可能性。
2、本发明提供一种具有抗炎活性的狭叶豆蔻籽提取液的制备方法，包括以下步骤：
3、(1)种质收集：采购狭叶豆蔻种子；
4、(2)种子粉碎：狭叶豆蔻籽粉碎成60目；
5、(3)粉末水提：种子粉末加水进行加热提取；
6、(4)酶法辅助提取：提取液中加入复合水解酶进行酶解反应；
7、(5)提取液过滤：将提取液精滤灭菌，得到狭叶豆蔻籽提取液。
8、具体步骤如下，第(1)步中的种子采自非洲马达加斯加，置于阴凉通风处保存，避免阳光直射和潮湿；第(2)步中的种子用细胞破壁机粉碎，之后过60目筛得到狭叶豆蔻籽粉末；第(3)步中按种子粉末与水重量比为1:10加水，于50～90℃条件下提取1-2h；第(4)步中的复合水解酶采用纤维素酶、果胶酶和蛋白酶复配，其中纤维素酶浓度为0.5-3％、果胶酶浓度为0.1-1％、蛋白酶浓度为0.3-2％，添加量0.02％，反应温度40～45℃，时间为2h，具体操作条件是：先加入纤维素和果胶酶，30min后加入蛋白酶，总反应时长为2h；第(5)步中的过滤方法为：用g4砂芯漏斗精滤，除去杂质，巴氏灭菌(80℃，30min)有利于更好的保存。
9、本发明还提供所述的制备方法得到的具有抗炎活性的狭叶豆蔻籽提取液。
10、优选地，采用tnf-α诱导hacat细胞建立皮肤炎症模型对上述提取液进行抗炎活性研究。
11、与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：本发明所制备的狭叶豆蔻籽提取液方法简单，对仪器设备要求低，操作方法简单，成本低，效率高，适合规模化生产。其中，采用的是加热水提，所用溶剂无毒无污染，实现绿色提取，没有使用醇类等易燃易爆溶剂，安全性高，且对提取设备无特殊要求。
技术特征：
1.一种具有抗炎活性的狭叶豆蔻籽提取液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种质收集：采购狭叶豆蔻种子；（2）种子粉碎：狭叶豆蔻籽粉碎成60目；（3）粉末水提：种子粉末加水进行加热提取；（4）酶法辅助提取：提取液中加入复合水解酶进行酶解反应；（5）提取液过滤：将提取液精滤灭菌，得到狭叶豆蔻籽提取液。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第（1）步中的种子采自非洲马达加斯加，置于阴凉通风处保存，避免阳光直射和潮湿。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第（2）步中的种子用细胞破壁机粉碎，之后过60目筛得到狭叶豆蔻籽粉末。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第（3）步中按种子粉末与水重量比为1:5-15（优选为1：10）加水，于50~90℃条件下提取，如提取1-2 h。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第（4）步中的复合水解酶采用的纤维素酶、果胶酶和蛋白酶复配（优选配比为1:1:1），其中纤维素酶浓度为0.5-3%、果胶酶浓度为0.1-1%、蛋白酶浓度为0.3-2%，添加量0.02%。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第（4）步中具体操作条件是：待第（3）步的提取液隆至室温后，先加入纤维素和果胶酶，然后（如20-40min后）加入蛋白酶，于40~45℃进行反应，总反应时长为1.5-3 h。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，第（5）步中的过滤方法为：用g4砂芯漏斗精滤，除去杂质，巴氏灭菌（例如80 ℃，30 min）有利于更好的保存。
8.如权利要求1至7任一项所述的制备方法得到的具有抗炎活性的狭叶豆蔻籽提取液。
9.如权利要求8所述的具有抗炎活性的狭叶豆蔻籽提取液在制备抗炎产品中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗炎是指tnf-α导致的皮肤炎症。
技术总结
本发明公开一种具有抗炎活性的狭叶豆蔻籽提取液的制备方法，包括以下步骤：（1）种质收集：采购狭叶豆蔻种子；（2）种子粉碎：狭叶豆蔻籽粉碎成60目；（3）粉末水提：种子粉末加水进行加热提取；（4）酶法辅助提取：提取液中加入复合水解酶进行酶解反应；（5）提取液过滤：将提取液精滤灭菌，得到狭叶豆蔻籽提取液。本发明制备的狭叶豆蔻籽提取液的方法简单，对仪器设备要求低，操作方法简单，成本低，效率高，适合规模化生产。其中，采用的是加热水提，所用溶剂无毒无污染，实现绿色提取，没有使用醇类等易燃易爆溶剂，安全性高，且对提取设备无特殊要求。
技术研发人员：王敏,赵雅琦,张琳琳,罗如婷
受保护的技术使用者：北京工商大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23