迁移体、迁移体相关基因或蛋白在制备视网膜血管病变诊断试剂或治疗药物中的应用

本发明属于生物医学领域，涉及迁移体相关基因或蛋白作为标志物在制备视网膜血管病变诊断试剂或治疗药物中的应用。

背景技术：

1、在全球约5亿糖尿病患者人群中，糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy，dr)的发病率高达34.6％，其中，30％的dr合并不同程度的视力受损。dr分为非增殖性dr(non-proliferative diabetic retinopathy,npdr)和增殖性dr(proliferativediabetic retinopathy,pdr)两大类，后者以视网膜新生血管及继发纤维血管膜(fibrovascular membrane,fvm)为主要病理特征，可导致玻璃体出血和牵拉性视网膜脱离等严重并发症。目前，对于dr，治疗方法主要有玻璃体腔注射抗vegf药物、视网膜激光光凝以及玻璃体切除术，但很多患者经治疗后视功能并未明显提高。因此，深入研究dr的发生和发展机制，积极寻找有效的诊断及防治靶点，已成为当下眼科界所面临的重大问题。

2、既往研究大多关注血管内皮细胞本身所处的外界环境，以及细胞内的信号分子通路，但目前基于这些研究开发的靶向性治疗往往效果有限。

3、迁移体(migrasome)是一种由迁移中的细胞产生的细胞外囊泡，2015年由清华大学俞立教授团队首次报道，在细胞间通信中发挥重要作用。

技术实现思路

1、本发明通过研究发现迁移体相关基因tspan4、ndst1、cpq或integrinα5在糖尿病性视网膜血管病变患者玻璃体液及增殖膜中表达均升高，可以作为糖尿病性视网膜血管病变全新的诊断标志物和治疗靶点。

2、本发明具体技术方案如下：

3、迁移体、迁移体相关基因或蛋白在制备视网膜血管病变诊断试剂中的应用，所述迁移体相关基因或蛋白选自tspan4、ndst1、cpq或integrinα5，所述视网膜血管病变选自视网膜动脉阻塞、视网膜静脉阻塞、视网膜静脉周围炎、糖尿病性视网膜病变、高血压性视网膜病变、视网膜毛细血管扩张症。本发明一个具体的示例为糖尿病性视网膜病变。

4、tspan4在national center for biotechnology information(ncbi)数据库中的编号为nm_001025237.2:292-1008，序列如seq id no:1所示。

5、

6、ndst1在national center for biotechnology information(ncbi)数据库中的编号为nm_001543.5。

7、cpq在national center for biotechnology information(ncbi)数据库中的编号为nm_00016134.4。

8、integrinα5在national center for biotechnology information(ncbi)数据库中的编号为nm_002205.5。

9、本发明另一目的在于提供一种视网膜血管病变诊断试剂，所述试剂对样本中的迁移体、迁移体相关基因或蛋白进行检测，所述迁移体相关基因或蛋白选自tspan4、ndst1、cpq或integrinα5。

10、检测样本为玻璃体液、增殖膜或视网膜组织。

11、本发明所述诊断试剂可以为tspan4、ndst1、cpq或integrinα5蛋白检测试剂，如为利用抗原抗体的特异性结合检测tspan4、ndst1、cpq或integrinα5蛋白的免疫生化检测试剂，一个具体的示例为western blot检测试剂。

12、本发明所述诊断试剂也可以为tspan4、ndst1、cpq或integrinα5基因检测试剂，包括rna抽提体系、rna逆转录体系和pcr反应体系；其中pcr反应体系含有特异性扩增tspan4、ndst1、cpq或integrinα5的引物序列，例如荧光实时定量pcr的上下游引物。一个具体的示例，所述诊断试剂为tspan4基因检测试剂，所述rna抽提体系包括rna抽提试剂；rna逆转录反应体系包括逆转录酶、逆转录体系缓冲液和rna酶抑制剂；pcr反应体系包括扩增系统和引物系统，所述引物系统包括tspan4特异性的rt-qpcr的上游引物：5’ccaccatcgccatcctctt3’，下游引物：5’gtgcaagcctttcttcaggtct3’。本发明另一目的在于提供干扰tspan4+表达的rna在制备治疗视网膜血管病变药物中的应用。所示干扰tspan4+表达的rna为sirna、mirna或shrna。

13、一个具体的示例，所述shrna序列如seq id no:2～4所示。可通过注射sh-tspan4的病毒表达载体进行药物治疗。

14、本发明通过对糖尿病性视网膜血管病变患者和黄斑前膜患者的玻璃体液，增殖膜和黄斑前膜迁移体相关基因或蛋白表达的研究，发现迁移体相关基因或蛋白在糖尿病性视网膜血管病变患者玻璃体液及增殖膜中表达均升高。进一步在氧诱导的视网膜病变(oir)小鼠模型中进行验证，发现迁移体大量富集于病理性新生血管处且主要来源于血管内皮细胞。

15、本发明的优点在于：

16、1.本发明从与视网膜疾病密切相关的临床样本出发，发现迁移体相关基因和蛋白在糖尿病性视网膜血管病变患者玻璃体液及其增殖膜中高表达，并且具有特异性，可作为诊断视网膜血管病变的生物标志物及治疗靶点。

17、2.血管内皮细胞与新生血管的形成密切相关，早期即可出现病理性改变，是糖尿病性视网膜血管病变患者玻璃体液及其增殖膜中迁移体的主要来源，有助于在尚未出现明显临床症状的dr早期提示血管内皮细胞损伤的风险，实现早发现、早诊断、早治疗，避免发展到不可逆性的严重损害视力的晚期dr。

技术特征：

1.迁移体、迁移体相关基因或蛋白在制备视网膜血管病变诊断试剂中的应用，所述迁移体相关基因或蛋白选自tspan4、ndst1、cpq或integrinα5。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述视网膜血管病变选自视网膜动脉阻塞、视网膜静脉阻塞、视网膜静脉周围炎、糖尿病性视网膜病变、高血压性视网膜病变、视网膜毛细血管扩张症。

3.一种视网膜血管病变诊断试剂，其特征在于所述试剂对样本中的迁移体、迁移体相关基因或蛋白进行检测，所述迁移体相关基因或蛋白选自tspan4、ndst1、cpq或integrinα5。

4.如权利要求3所述的诊断试剂，其特征在于所述试剂为tspan4、ndst1、cpq或integrinα5蛋白检测试剂，为利用抗原抗体的特异性结合检测tspan4、ndst1、cpq或integrinα5蛋白的免疫生化检测试剂。

5.如权利要求3所述的诊断试剂，其特征在于所述试剂为tspan4、ndst1、cpq或integrinα5基因检测试剂，包括rna抽提体系、rna逆转录体系和pcr反应体系；其中

6.如权利要求5所述的诊断试剂，其特征在于所述诊断试剂为tspan4基因检测试剂，所述rna抽提体系包括rna抽提试剂；rna逆转录反应体系包括逆转录酶、逆转录体系缓冲液和rna酶抑制剂；pcr反应体系包括扩增系统和引物系统，所述引物系统包括tspan4特异性的rt-qpcr的上游引物：5’ccaccatcgccatcctctt3’，下游引物：5’gtgcaagcctttcttcaggtct3’。

7.如权利要求3所述的诊断试剂，其特征在于所述样本为玻璃体液、增殖膜或视网膜组织。

8.干扰tspan4+表达的rna在制备治疗视网膜血管病变药物中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于干扰tspan4+表达的rna为sirna、mirna或shrna。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于所述shrna序列如seq id no:2～4所示。

技术总结
本发明公开了迁移体相关基因或蛋白在诊断视网膜血管病变中的应用。本发明研究结果表明迁移体相关基因或蛋白在糖尿病性视网膜血管病变患者玻璃体液及增殖膜中均显著升高，且主要富集于病理性新生血管处，具有特异性强，灵敏度高等特点，可辅助诊断糖尿病性视网膜血管病变，有助于制备和筛选相应的治疗药物。本发明为糖尿病性视网膜血管病变提供了一个全新的诊断标志物和治疗靶点。

技术研发人员：王婧帆,胡仔仲,谢平
受保护的技术使用者：江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院）
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23