一种与绵羊免疫性状相关的分子标记及其应用

本发明属于分子标记，具体涉及一种与绵羊免疫性状相关的分子标记及其应用。

背景技术：

1、湖羊是中国特有的地方绵羊品种，原产于浙江嘉兴和太湖流域一带，喜干燥、厌潮湿，具有耐粗饲、环境适应力强、四季发情、产多羔、泌乳性能好、生长发育快、耐湿热、耐粗饲、宜圈养等优良品种特性，且湖羊作为一种肉羊，肉质细腻鲜美，腥味、膻味均比较轻。湖羊的屠宰率较高，骨细肉多，肉用价值优良。免疫力是机体自身的防御机制，是机体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)，处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。免疫力好的肉羊在生长发育过程中更能抵抗疾病的侵袭，能够带来更高的肉羊养殖生产经济效益，所以培育生长快速且免疫力好的肉羊成为养殖业的研究重点。

2、生长因子受体结合蛋白10(growth factor receptor-bound protein10，grb10)是grb7家族的一员，该家族包括三个成员：grb7、grb10和grb14，它们存在于哺乳动物细胞中，可识别细胞表面结合受体和蛋白互作的下游信号。

3、近年来，越来越多的研究表明grb10可能与动物生殖发育密切相关。charalambous等人研究发现grb10转基因小鼠表现出生长障碍，而小鼠grb10敲除实验发现胚胎和胎盘显著增殖,表明grb10可能参与调节胚胎细胞生长和胰岛素信号通路；lui等发现，grb10是一种有效的瘦素敏化剂了，在神经元细胞中过表达grb10基因可加重小鼠饮食导致的肥胖，影响小鼠生长发育：wang等通过细胞实验发现，瞬时过表达grb10基因，能显著降低细胞增殖速率，在正常细胞生长过程中grb10基因可作为一种积极的、刺激性的信号接头发挥作用，促进有丝分裂活动，使机体正常生殖活动得以维持；shiura等发现3-4周龄grb10转基因小鼠生长迟缓，表现出生长障碍，敲除grb10基因又会引起小鼠过度生长和骨骼肌肥大等发育缺陷，表明grb10与生长发育密切相关。但目前，该基因在绵羊免疫功能中的作用机制尚未见报道，其功能也尚不清楚。

4、本发明通过对grb10基因进行测序和分析，探讨其不同基因型与绵羊免疫性状之间的关联，旨在为提高绵羊免疫性状的遗传改良方面提供基因素材，加速自主知识产权的快速生长且免疫功能较强的优质肉羊新品种的培育进程。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种与绵羊免疫性状相关的分子标记及其应用。该分子标记是通过扩增绵羊grb10基因的dna序列并测序，获得grb10基因的多态性位点，通过分析该多态性位点不同的基因型与绵羊免疫力的相关性，从而建立含多态性位点的分子标记的检测方法，并可将该分子标记应用于提高绵羊的免疫性状新品种的培育中。

2、为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：

3、一种与绵羊免疫性状相关的分子标记，其核苷酸序列如seq id no.1所示，其中第119bp处的r是g或a，该突变导致分子标记的g/a多态性。

4、如上所述的分子标记在筛选高免疫性状绵羊育种中的应用，当多态性位点的基因型为gg型时，其免疫能力显著高于aa型。

5、一种用于检测上述与绵羊免疫性状相关的分子标记的引物对在筛选高免疫性状绵羊育种中的应用，优选地，所述引物的序列如seq id no.2所示和seq id no.3所示。

6、一种用于检测上述与绵羊免疫性状相关的分子标记的aqp引物对在筛选高免疫性状绵羊育种中的应用，优选地，所述aqp引物的序列如seq id no.4-6所示。

7、一种用于检测上述与绵羊免疫性状相关的分子标记的试剂盒在筛选高免疫性状绵羊育种中的应用，优选地，所述试剂盒包括普通pcr引物对或aqp序列对，普通pcr引物对序列如seq id no.2所示和seq id no.3所示；所述aqp引物的序列如seq id no.4-6所示。

8、一种用于检测上述与绵羊免疫性状相关的分子标记的方法，其包括如下步骤：

9、1)使用上述的普通pcr引物对、aqp引物对或包含上述引物对的试剂盒，对绵羊基因组dna进行扩增；

10、2)对步骤1)获得的扩增产物的多态性位点进行分型鉴定。

11、其中，在步骤2)中，上述分型鉴定的方法包括但不限于直接测序法、荧光探针法、基因芯片法、高分辨率溶解曲线法。

12、进一步，优选地，采用普通pcr引物对进行扩增时，扩增产物采用直接测序法对多态性位点进行鉴定。

13、进一步，优选地，采用aqp引物对进行扩增时，利用c1000 touchtm thermal cycler仪器检测荧光信号并查看分型结果。

14、如上所述的方法在绵羊免疫性状检测中的应用，通过分析多态性位点的基因型，从而可以确定绵羊免疫功能的高低，进而筛选出免疫功能较高的绵羊；当多态性位点的基因型为gg型时，其平均红细胞血红蛋白浓度、白细胞数、淋巴细胞数及嗜酸性粒细胞数显著高于aa基因型，即多态性位点的基因型为gg型时，其免疫能力显著高于aa基因型。

15、如上所述的分子标记pcr引物对、aqp引物或试剂盒的检测方法在绵羊育种中的应用，通过利用上述的引物对或试剂盒对绵羊的基因组dna进行grb10基因的扩增和检测，确定待测样品的分子标记的基因型，从而可以从中选育出免疫力较好的绵羊品种。

16、本发明的有益效果在于：

17、本发明提供了与绵羊免疫性状相关的分子标记及其g/a的多态性位点，通过检测该多态性的基因型来有效鉴别是否为免疫功能较强的绵羊，为免疫力较好的选育提供有效的检测手段。

18、本发明通过对与绵羊免疫性状相关分子标记的多态性位点的基因型的检测，可用于选留基因为gg纯合型绵羊作为种羊用于育种，用以提高羊群生长过程中的免疫力，有助于提高羊养殖业的经济效益。

技术特征：

1.一种与绵羊免疫性状相关的分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.1所示，其中第119bp处的r是g或a，该突变导致分子标记的g/a多态性。

2.权利要求1所述的分子标记在筛选高免疫性状绵羊育种中的应用，其特征在于，当多态性位点的基因型为gg型时，其免疫能力显著高于aa型。

3.一种用于检测权利要求1所述的与绵羊免疫性状相关的分子标记的引物对在筛选高免疫性状绵羊育种中的应用，其特征在于，所述引物的序列如seq id no.2所示和seq idno.3所示。

4.一种用于检测权利要求1所述的与绵羊免疫性状相关的分子标记的aqp引物对在筛选高免疫性状绵羊育种中的应用，其特征在于，所述aqp引物的序列如seq id no.4-6所示。

5.一种用于检测权利要求1所述的与绵羊免疫性状相关的分子标记的试剂盒在筛选高免疫性状绵羊育种中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括普通pcr引物对或aqp序列对，普通pcr引物对的序列如seq id no.2所示和seq id no.3所示；所述aqp引物的序列如seq idno.4-6所示。

6.一种用于检测权利要求1所述的与绵羊免疫性状相关的分子标记的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，采用序列如seq id no.2所示和seq id no.3所示的普通pcr引物对进行扩增时，扩增产物采用直接测序法对多态性位点进行鉴定。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，采用序列如seq id no.4-6所示的aqp引物对进行扩增时，利用c1000 touchthermal cycler仪器检测荧光信号并查看分型结果。

9.权利要求6-8中任一项所述方法在绵羊免疫性状检测中的应用，其特征在于，当分子标记的多态性位点的基因型为gg型时，其免疫能力显著高于aa基因型。

10.权利要求6-8中任一项所述方法在绵羊育种中的应用，其特征在于，用于选育高免疫性状的绵羊品种。

技术总结
本发明提供了一种与绵羊免疫性状相关的分子标记及其应用。该分子标记根据GRB10基因序列设计引物，从绵羊血液中提取DNA，通过PCR扩增、DNA测序和序列分析，发现在扩增片段的第119bp处存在一个G/A多态性位点，进一步使用AQP引物对1086只湖羊的多态性位点进行检测和建立最小二乘模型，对基因型与免疫性状进行关联分析，最终确定了本发明扩增的GRB10基因片段的第119bp处存在一个G/A多态性位点可以作为与绵羊免疫性状相关的分子标记。本发明通过检测分子标记的基因型，可选留GG纯合的绵羊进入核心群用于育种，可用于提高绵羊的免疫能力，有助于增加经济效益。

技术研发人员：王维民,张琪,田慧彬,韩坤潮,李晓龙,何丽娟
受保护的技术使用者：兰州大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23