一种青鳉Eef1a1l3蛋白、其编码基因、载体、多克隆抗体及其应用

本发明涉及生物，尤其涉及一种青鳉eef1a1l3蛋白、其编码基因、载体、多克隆抗体及其应用。

背景技术：

1、研究表明真核翻译延伸因子1a基因eef1a1参与细胞凋亡的调控，并且在部分经济鱼类卵巢发育的不同阶段动态表达。半滑舌鳎的eef1a1在性腺中表现出两性二态表达模式，即在受精后6个月至3年期间，eef1a1在卵巢中的表达水平明显高于精巢，并在蛋白质合成中具有明确的作用；此外，半滑舌鳎的eef1a1还可能具有感知外界温度变化和调节性别分化的双重作用。在大西洋鳕鱼(gadus morhua)的研究中发现，eef1a1基因的表达水平在卵母细胞生长过程中波动，即在卵母细胞分化阶段低表达，在初级或早期次生生长阶段显著上调，在发育后期逐渐下调。近期，在青鳉中发现eef1a通过与gsdf相互作用，参与生殖细胞的增殖调控。目前关于eef1a1l3(eukaryotic translation elongation factor 1alpha1,like 3)基因的功能尚无人报道，但eef1a1l3作为eefla1的同源基因，推测其可能参与了性别分化和卵巢发育的调控。

2、青鳉(oryzias latipes)作为模式生物，具备饲养方便、性成熟周期短、繁殖能力强、有完善的基因组和转录组等优点。青鳉耐受能力强、属于雄性配子异型的xy型，且是唯一拥有雄性性别决定基因dmy和雌性性别决定基因foxl3的脊椎动物。此外，胚胎干细胞系和精原干细胞系的建立为研究基因功能所需的细胞生物学研究提供了良好的平台。尤其是近年来，crispr-cas9技术在青鳉中的成功应用，使得青鳉成为研究生殖发育调控相关分子机理研究的良好模型。

3、前期本课题组发现eef1a1l3基因在脊椎动物硬骨鱼类中非常保守，且eef1a1l3基因在青鳉卵巢中特异表达，为深入探究eef1a1l3基因在青鳉性别分化和性腺发育中的功能，很有必要构建eef1a1l3基因的多克隆抗体。然而eef1a1l3与eef1a1(xp_004077036.1)等同源蛋白序列一致性较高，蛋白路线难以区分，多肽表达路线可以满足抗体特异性的需求但是在很多实验室中不具备相关的研究材料。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种青鳉eef1a1l3蛋白、其编码基因、载体、多克隆抗体及其应用，解决了上述背景技术中的问题。

2、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：提供一种青鳉eef1a1l3特异性多肽，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no：1所示。

3、seq id no：1

4、agnaqqdppsdvrsfea

5、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之二是：提供一种基于上述多肽，经12次重复用于蛋白诱导表达的青鳉eef1a1l3蛋白抗原，其氨基酸序列如seq id no：2所示。

6、seq id no：2

7、agnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfea

8、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之三是：提供一种用于编码上述青鳉eef1a1l3蛋白抗原的基因，其碱基序列如seq id no：3所示。

9、seq id no：3

10、gagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgtgagaaagaccaggggtctaaagctcaaaagcttcaagtttgt

11、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之四是：提供一种含有上述用于编码青鳉eef1a1l3蛋白基因的重组表达载体或转基因细胞系统。

12、优选地，重组表达载体为上述基因插入到大肠杆菌表达载体中得到的表达青鳉eef1a1l3蛋白的重组表达载体。

13、优选地，所述大肠杆菌表达载体为pet-28a。

14、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之五是：提供一种转基因重组菌，所述重组菌是上述重组表达载体导入大肠杆菌中，筛选得到转基因重组菌。

15、优选地，所述大肠杆菌为bl21(de3)。

16、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之六是：提供一种青鳉eef1a1l3蛋白的多克隆抗体，所述青鳉eef1a1l3蛋白抗原的多克隆抗体通过eef1a1l3-his融合蛋白作为抗原免疫获得青鳉eef1a1l3-his融合蛋白，所述青鳉eef1a1l3-his融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.4所示。

17、seq id no：4

18、mgsshhhhhhssglvprgshmasmtggqqmgrgsagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfeaagnaqqdppsdvrsfealehhhhhh

19、本发明解决其技术问题所采用的技术方案之七是：提供上述多克隆抗体在制备检测青鳉eef1a1l3蛋白或其表达量的试剂或试剂盒中的应用。

20、实施本发明，具有如下有益效果：

21、本发明具有如下有益效果：本发明所述的“重复多肽”方法制备的多克隆抗体经检测具有良好的免疫原性，并且可用于识别青鳉的内源性蛋白，在家族蛋白多克隆抗体的制备及研究蛋白质功能机理等方面拥有广阔的应用前景。

技术特征：

1.一种青鳉eef1a1l3蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no：1所示。

2.一种青鳉eef1a1l3蛋白抗原，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no：2所示。

3.一种用于编码如权利要求2所述的青鳉eef1a1l3蛋白抗原的基因，其碱基序列如seqid no：3所示。

4.含有权利要求3所述的用于编码青鳉eef1a1l3蛋白基因的重组表达载体或转基因细胞系统。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，将权利要求2所述的基因插入到大肠杆菌表达载体中得到的表达青鳉eef1a1l3蛋白的重组表达载体。

6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其特征在于，所述大肠杆菌表达载体为pet-28a。

7.一种转基因重组菌，其特征在于，所述重组菌是将权利要求5所述的重组表达载体导入大肠杆菌中，筛选得到转基因重组菌。

8.根据权利要求7所述的转基因重组菌，其特征在于，所述大肠杆菌为bl21(de3)。

9.一种青鳉eef1a1l3蛋白抗原的多克隆抗体，其特征在于，所述青鳉eef1a1l3蛋白抗原的多克隆抗体通过eef1a1l3-his融合蛋白作为抗原免疫获得青鳉eef1a1l3-his融合蛋白，所述青鳉eef1a1l3-his融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.4所示。

10.权利要求9所述的多克隆抗体在制备检测青鳉eef1a1l3蛋白或其表达量的试剂或试剂盒中的应用。

技术总结
本发明公开了一种青鳉Eef1a1l3蛋白、其编码基因、载体、多克隆抗体及其应用。本发明将通过原核表达纯化技术，体外重组表达青鳉Eef1a1l3蛋白，继而将重组蛋白应用于獭兔后制备了多克隆抗体，并利用ELISA法确定该多克隆抗体效价后，采用Western blot法确定该多克隆抗体能特异性识别青鳉Eef1a1l3蛋白产生特异性免疫反应。本发明所述的“重复多肽”方法制备的多克隆抗体经检测具有良好的免疫原性，并且可用于识别青鳉的内源性蛋白，在家族蛋白多克隆抗体的制备及研究蛋白质功能机理等方面拥有广阔的应用前景。

技术研发人员：黄岩,陈天圣,林淑婷,梁晶婕
受保护的技术使用者：集美大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23