基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法与流程

本发明涉及中药成分检测，具体涉及基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法。

背景技术：

1、白及是兰科植物白及 bletilla striata（thunb.）reichb.f.的干燥块茎，目前对于白及的相关文献报道多集中于白及苷（militarine）的含量测定及多糖提取工艺的研究，对其相关的定性分析还处于空缺阶段。查阅文献发现，白及中的指标成分为天麻素、4-(葡萄糖氧基)-肉桂酸葡萄糖氧基苄酯、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯-2-葡萄糖苷、手参苷ⅲ、1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯、山药素ⅲ。本研究运用双标线性校正技术，对白及中这6种成分进行定性分析，可以减少对照品的适用，节约成本，并且对不同成分相对保留时间的预测效果更好，实现不同类成分的同时测定，为白及的质量控制提供了参考，拓宽了双标线性校正技术在中药分析中的应用。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提出一种基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法。

2、为实现其目的，本发明采用以下技术方案：

3、双标线性校正技术基于待测试组分在不同的色谱柱中的保留时间呈线性相关，通过选用两种比较物质来对多个色谱峰进行定性鉴定。通过双标线性校正技术对白及中各成分进行色谱峰的定位时，不同对照品保留时间也不同，因此，本方法通过对13根色谱柱采用hplc法进行测定，可以得到白及样品中6个成分（天麻素、2-0-葡萄糖基白及苷、shancigusini、手参苷、山药素ⅲ、白及苷）的实际保留时间，不同色谱柱上各成分的实际保留时间的均值即为标准保留时间（standard retention time，srt）。以各成分的srt为横坐标，实际保留时间为纵坐标可以得到13根色谱柱中各成分的拟合结果，确定各色谱柱上不同成分的线性关系良好。之后采用drs origin软件对不同色谱柱的数据进行分析，系统通过方法优化，对保留时间偏差、预测准确率和色谱柱符合率自动进行计算，根据预测结果确定双标成分，本方法的双标成分为天麻素、手参苷ⅲ。将双标成分的标准保留时间作为横坐标，实际保留时间为纵坐标，得到线性方程，将其余4个成分的标准保留时间代入方程即可得到其余4个成分的预测保留时间。通过计算相对偏差，将双标线性校正技术所预测的保留时间与实际保留时间进行对比，表明双标线性校正技术可以较为准确的预测白及组分的保留时间。

4、基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法，具体包括如下步骤：

5、s1:确定色谱条件：确定16根色谱柱；

6、s2:制备混合对照品溶液：首先制备各对照品储备液，其次制备混合对照品溶液；

7、s3:制备供试品溶液：将适量白及样品粉碎过3号筛，取约0.5g白及粉末，加入50%甲醇25ml，称重后加热回流、冷却至室温，补充挥发的甲醇至原重，摇匀，离心，取离心液蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至25ml容量瓶中，加入甲醇至刻度，摇匀，滤过即得；

8、s4:进行方法学考察：进行精密度试验、重复性试验、稳定性试验、色谱柱耐用性试验；

9、s5：进行双标的选择和srt的计算：得到样品的实际保留时间，在16根色谱柱中，除col13、col14、col15无法将6种成分分离外，对其余13根色谱柱的数据进行分析，以6个成分的srt为横坐标，实际保留时间为纵坐标，得到13根色谱柱中各成分的拟合结果;

10、s6:确定双标化合物：采用drs origin软件对13根色谱柱的数据进行分析，系统通过方法优化，对保留时间偏差、预测准确率和色谱柱符合率自动进行计算，根据预测结果将天麻素与手参苷ⅲ作为白及高效液相色谱的双标成分；

11、s7:方法验证：用3根新的色谱柱（col17、col18、col19），对已建立的方法进行验证。

12、具体的，所述步骤s1中16根色谱柱编号为col1～col16。

13、具体的，所述步骤s2中分别取适量天麻素、2-0-葡萄糖基白及苷、shancigusini、手参苷ⅲ、山药素ⅲ、白及苷对照品，加甲醇至1 ml溶解，制备各对照品储备液，取天麻素、2-0-葡萄糖基白及苷、shancigusini、山药素ⅲ、白及苷各50μl，手参苷ⅲ100μl，加50%甲醇至1ml得混合对照品溶液。

14、具体的，所述步骤s3中，称重后加热回流处理的时间为60min。

15、具体的，所述步骤s5中，各成分的标准保留时间分别为：天麻素4.279min、2-0-葡萄糖基白及苷28.553min、shancigusini27.179min、手参苷ⅲ32.145min、山药素ⅲ45.339min、白及苷33.145min。

16、具体的，所述步骤s6中，将天麻素、手参苷ⅲ成分的标准保留时间作为横坐标，将实际保留时间作为纵坐标，得到两点方程y=1.0068x-0.1437，之后将其余4个成分的标准保留时间代入方程（x值），得到4个成分的预测保留时间，4个成分的预测保留时间与实际保留时间偏差的绝对值均不超过0.5min，该双标成分的预测结果良好。

17、具体的，所述步骤s7中，将得到的预测值与实测值进行分析，lctrc法所得到的各成分的绝对偏差与相对偏差均符合要求，可预测白及样品中各个指标成分在3根新色谱柱上的保留时间。

18、本发明的有益效果：

19、1、白及双标线性校正技术不需要针对每种类型成分建立单独的分析方法，能够同时处理多个不同类型的成分，用于白及成分分析中的大规模数据处理需求；

20、2、白及双标线性校正技术对于对照品较为昂贵或无法获取相应对照品展现了较大的优势。通过利用双标成分来调整和校正数据，在确保双标成分能够较好预测的情况下，双标线性校正技术能够提供一种有用的替代方案，模拟对照品的效果，从而在缺乏对照品或对照品昂贵的情况下仍能进行准确的定性分析；

21、3、相较于相对保留时间法，双标线性校正技术可以提高对各组分保留时间的准确预测能力，从而提高分析结果的准确性和可靠性，且不受色谱柱类型限制，扩大了其在不同分析条件下的适用范围，减少检验成本。

技术特征：

1.基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法，其特征在于，所述步骤s1中16根色谱柱编号为col1～col16。

3.根据权利要求1所述的基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法，其特征在于，所述步骤s2中分别取适量天麻素、2-0-葡萄糖基白及苷、shancigusini、手参苷ⅲ、山药素ⅲ、白及苷对照品，加甲醇至1ml溶解，制备各对照品储备液，取天麻素、2-0-葡萄糖基白及苷、shancigusini、山药素ⅲ、白及苷各50μl，手参苷ⅲ100μl，加50%甲醇至1ml得混合对照品溶液。

4.根据权利要求1所述的基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法，其特征在于，所述步骤s3中，称重后加热回流处理的时间为60 min。

5.根据权利要求1所述的基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法，其特征在于，所述步骤s5中，各成分的标准保留时间分别为：天麻素4.279min、2-0-葡萄糖基白及苷28.553min、shancigusini27.179 min、手参苷ⅲ32.145min、山药素ⅲ45.339min、白及苷33.145min。

6.根据权利要求1所述的基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法，其特征在于，所述步骤s6中，将天麻素、手参苷ⅲ成分的标准保留时间作为横坐标，将实际保留时间作为纵坐标，得到两点方程y=1.0068x-0.1437，之后将其余4个成分的标准保留时间代入方程，得到4个成分的预测保留时间，4个成分的预测保留时间与实际保留时间偏差的绝对值均不超过0.5min，该双标成分的预测结果良好。

7.根据权利要求1所述的基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法，其特征在于，所述步骤s7中，将得到的预测值与实测值进行分析，lctrc法所得到的各成分的绝对偏差与相对偏差均符合要求，可预测白及样品中各个指标成分在3根新色谱柱上的保留时间。

技术总结
本发明公开了基于双标线性校正技术的白及多组分定性分析方法，属于中药成分检测技术领域。本方法通过对13根色谱柱采用HPLC法进行测定，可以得到白及样品中6个成分的实际保留时间，不同色谱柱上各成分的实际保留时间的均值即为标准保留时间。以各成分的SRT为横坐标，实际保留时间为纵坐标可以得到13根色谱柱中各成分的拟合结果，确定各色谱柱上不同成分的线性关系良好。之后对保留时间偏差、预测准确率和色谱柱符合率进行计算，根据预测结果确定双标成分。本发明双标线性校正技术可以提高对各组分保留时间的准确预测能力，从而提高分析结果的准确性和可靠性，且不受色谱柱类型限制，扩大了其在不同分析条件下的适用范围，减少检验成本。

技术研发人员：林昶,刘苏情,张静,朱丽,杨康杰,杨聪,钱海兵,杨长福
受保护的技术使用者：林昶
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23