长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物在修复、调节皮肤屏障或抗炎中的应用的制作方法

本公开属于微生物发酵，尤其涉及长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物在修复或调节皮肤屏障或皮肤抗炎中的应用，例如缓解皮肤炎症、修复敏感性肌肤的屏障，修复并调节皮肤屏障损伤，以及增强皮肤屏障的作用等。

背景技术：

1、二裂酵母发酵产物溶胞产物(bifida ferment lysate)是双歧杆菌发酵灭活后裂解细胞得到的胞内物质，包括细胞壁组分、细胞质片段、有机酸、蛋白质、核苷酸及多糖复合体等；这些成分可以为人体肌肤提供多种营养，对皮肤具有良好的生物作用，例如调节平衡肌肤、调节免疫、保湿、抗氧化、抗衰老等功效。二裂酵母发酵产物溶胞产物、二裂酵母发酵产物滤液、二裂酵母发酵产物提取物均被列入我国《已使用化妆品原料目录》，作为可添加到化妆品中的物质。其中，二裂酵母发酵产物溶胞产物已被证实其含有的乳酸、多肽和多糖能够减弱水分的流失，增加皮肤的持水量，进一步地，生物多糖也是一种经证实的高分子保湿剂，分子中含有大量的羟基和极性基团，可与水分子形成氢键，有助于增加皮肤的含水量，促进水油平衡，对皮肤具有良好的保湿性能，可用于缓解皮肤干燥。这些优势使得二裂酵母发酵产物溶胞物在皮肤护理相关产品中应用广泛，具有极大的市场前景。

2、双歧杆菌虽然是益生菌，目前已发现的菌种高达上百种，鉴于安全性等原因，在开发化妆品/护肤品应用的二裂酵母发酵产物溶胞产物原料时，选择人肠道分离得到的长双歧杆菌，原料具有无毒无致敏的优势，增加使用者的安全性是有必要考虑的。

3、在微生物培养工业中，二裂酵母发酵产物溶胞产物的一个主要来源是双歧杆菌属，双歧杆菌属下具有上百种双歧杆菌，由于不同的双歧杆菌菌株基因组存在一定的差异，使得发酵物的胞内物质的成分也存在差异，由于氨基酸、蛋白质、多肽的种类的差异对调节皮肤免疫机能有重要影响；皮肤是机体不可或缺的屏障器官，不仅能抵御外界的物理、化学、微生物刺激，同时能减缓机体水分经皮流失，角质层是最重要的屏障，皮肤损伤进一步容易引起皮肤屏障受损，皮肤抵抗力和免疫力就会有所下降，引发缺水、光泽黯淡、皱纹、外界微生物病原菌感染等，皮肤屏障受损后会出现红血丝，肌肤变得比较敏感，还有可能会出现脱水、脱皮等现象等多种皮肤问题，基于此，需要筛选能满足能够调节修复皮肤屏障的长双歧杆菌菌株来获得二裂酵母发酵产物溶胞产物，将获得的二裂酵母发酵产物溶胞产物原料添加到化妆品/护肤品中实现调节并修复受损皮肤、光照射老化或缺水皮肤的皮肤屏障功能的同时能具有对皮肤无毒无致敏的高安全性是开发的一大难点。

4、此外，双岐杆菌是一类严格厌氧菌；双歧杆菌属下具有多个物种，其中长双歧杆菌为双歧杆菌属下的一个物种。长双歧杆菌主要从肠道内(厌氧环境下)筛选得到，属于厌氧菌。双岐杆菌在有氧条件下很难发酵大量培养。存在生长缓慢，活性低，易染杂菌，生物量达不到生产要求，单体代谢产物少等问题，导致双歧杆菌难以满足产业化以及提高产品的功效性能的要求。在实际应用中，二裂酵母发酵产物溶胞产物的获得通常只能通过严格控制双歧杆菌的发酵工艺以及改进培养基，使得双歧杆菌菌株生长速度快、生长密度高来克服上述问题。然而这种方法存在双歧杆菌的工业发酵的发酵工艺和制剂配方工艺复杂繁琐，生产成本高，且容易染杂菌等缺陷，导致实际应用效果并不理想。因此，筛选出在有氧环境下长时间稳定存活生长，安全性高的菌株，和更加高效简便的生产工艺或技术路线十分必要和迫切。

技术实现思路

1、本公开的目的在于提供长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物在修复、调节皮肤屏障或抗炎中的应用。所述长双歧杆菌发酵得到的长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物，该长双歧杆菌在偏酸的环境中具有生长速率较快优势，且能够具有稳定存活率高的特点，同时配合菌株的生长速度快和发酵产物的理化性质，进而克服现有发酵过程中长双歧杆菌生长缓慢、活性低、易染杂菌等问题，通过离心破碎，控制破碎压力在900-1200bar时，能得到更均匀的二裂酵母发酵产物溶胞产物，溶胞产物能够得到更有效的释放，得到细胞碎片几乎消失且更均匀的二裂酵母发酵产物溶胞产物，使得胞内活性物质充分得到有效利用，并且不容易絮凝。并获得安全性高的二裂酵母发酵产物溶胞产物，实现快速获得高纯度和高安全性性能的二裂酵母发酵产物溶胞产物。

2、本公开提供的长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物能够修复皮肤屏障；

3、长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物能够改善皮肤的三层屏障功能；(1)微生物屏障(2)物理屏障，(3)免疫屏障。

4、本公开提供的长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物，在3d皮肤模型(epikutis)中，能促进角质细胞的抗菌肽ll-37的表达，增强机体自身对致病菌的抵御能力，此外，抗菌肽有助于抑制皮肤中过度生长的致病菌，调节皮肤微生态，进而恢复皮肤微生物的稳态，预防和改善相关皮肤疾病，提升皮肤微生物屏障。

5、本公开提供的长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物，在3d皮肤模型中，能够显著促进角质细胞屏障蛋白兜甲蛋白(lor)的表达，增强皮肤的物理隔离效果，对皮肤屏障起加固作用。

6、本公开提供的长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物在月桂基硫酸钠(sls)刺激的3d皮肤炎症模型中，能降低炎性因子肿瘤坏死因子(tnf-α)的含量，从而缓解炎症、提高皮肤的免疫屏障。

7、双歧杆菌属下具有上百种双歧杆菌，由于不同的双歧杆菌菌株基因组存在一定的差异，使得发酵物的胞内物质的成分也存在差异，由于氨基酸、蛋白质、多肽的种类及表达的含量的差异对调节皮肤免疫机能有重要影响；本公开验证了本公开提供的长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物能够调节或修复皮肤屏障。

8、为了实现本公开的上述目的，特采用以下技术方案：

9、本公开提供的长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物在修复或调节皮肤屏障中的应用，所述长双歧杆菌为长双歧杆菌mnh 06105，又名mnbl105，保藏于广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，保藏名称为bifidobacterium longum mnh 06105，保藏编号为gdmccno.63740，保藏时间2023年8月23日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学院微生物研究所，提议的分类名称为bifidobacterium longum；

10、本公开提供的二裂酵母发酵产物溶胞产物通过超声波破碎后获得，其中，破碎压力900-1200bar。

11、进一步地，所述皮肤屏障包含以下至少一种：微生物屏障、皮肤的物理屏障和皮肤的免疫屏障。

12、进一步地，所述修复或调节皮肤屏障选自以下至少一种：修复或调节受损和/或发炎的皮肤的屏障功能；修复或调节因增强紫外线照射导致的皮肤屏障损伤；修复或调节皮肤老化引起的屏障损伤；修复或调节角质层变薄引起的皮肤屏障损伤；修复或调节敏感肌肤或脆弱肌肤引起的屏障功能的降低；修复或调节角质层干燥引起的皮肤屏障损伤；修复或调节氧化酶导致的皮肤屏障损伤。

13、进一步地，修复或调节皮肤屏障包括以下至少一种：促进角质细胞的抗菌肽ll-37的表达；促进角质细胞屏障蛋白lor的表达；调节皮肤微生物提升皮肤微生物的稳态；增加皮肤持水量。

14、进一步地，所述长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物用于：粉底、乳液、精华液、润肤液、洗面奶、面霜、面膜、营养水中的至少一种。

15、进一步地，所述长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物能改善皮肤暗淡。

16、进一步地，所述长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物能够改善皮肤干燥、发痒、灼热、刺痛、紧绷中至少一种症状。

17、进一步地，粉底、乳液、精华液、润肤液、洗面奶、面霜、面膜、营养水中含有质量百分比为0.1％～20％的二裂酵母发酵产物溶胞产物。

18、进一步地，所述长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物通过局部施用或口服。

19、与现有技术相比，本公开的有益效果为：

20、本公开所述的长双歧杆菌属于非严格厌氧长双歧杆菌，具有在嗜酸的环境ph 5～6的环境中生长速率较快，且在有氧的条件下稳定存活率高的优势，解决了现有长双歧杆菌生长缓慢、活性低、易染杂菌等问题，提高菌株的生长速度和发酵产物的理化性质，通过发酵裂解获得安全性高的二裂酵母发酵产物溶胞物，实现快速获得高纯度和高安全性性能的二裂酵母发酵产物溶胞物。

21、本公开提供的二裂酵母发酵产物溶胞产物能够改善皮肤的三层屏障功能，(1)微生物屏障调节，本公开提供的二裂酵母发酵产物溶胞产物，在3d皮肤模型(epikutis)中，能促进角质细胞的抗菌肽ll-37的表达，增强机体自身对致病菌的抵御能力，提升皮肤微生物屏障；此外，抗菌肽有助于抑制皮肤中过度生长的致病菌，调节皮肤微生态，进而恢复皮肤微生物的稳态，预防和改善相关皮肤疾病。(2)物理屏障调节，本公开提供的二裂酵母发酵产物溶胞产物，在3d皮肤模型中，能够显著促进角质细胞屏障蛋白兜甲蛋白(lor)的表达，增强皮肤的物理隔离效果，对皮肤屏障起加固作用。(3)免疫屏障调节，本公开提供的二裂酵母发酵产物溶胞产物在月桂基硫酸钠(sls)刺激的3d皮肤炎症模型中，能降低炎性因子肿瘤坏死因子(tnf-α)的含量，从而缓解炎症、提高皮肤的免疫屏障，可广泛用于皮肤屏障修复的化妆品和护肤品的制备。

22、由于皮肤充分的持水量能够促进皮肤细胞的代谢，加速新陈代谢，从而改善肌肤质地和修复受损细胞实现修复和增强皮肤屏障功能。本公开提供的二裂酵母发酵产物溶胞产物能增加皮肤持水量实现保湿功能进而实现修复或增强皮肤屏障的功能。

技术特征：

1.长双歧杆菌(bifidobacterium longum)的二裂酵母发酵产物溶胞产物在修复或调节皮肤屏障中的应用，其特征在于，所述长双歧杆菌的保藏编号为gdmcc no.63740；保藏名称为bifidobacterium longum mnh 06105；保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心gdmcc；保藏日期为2023年08月23日。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述二裂酵母发酵产物溶胞产物通过破碎后获得，其中，破碎压力为900-1200bar。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述皮肤屏障包含以下至少一种：微生物屏障、皮肤的物理屏障和皮肤的免疫屏障。

4.如权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述应用选自以下至少一种：

5.如权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，修复或调节皮肤屏障包括以下至少一种：促进角质细胞的抗菌肽ll-37的表达；促进角质细胞屏障蛋白lor的表达；调节皮肤微生物提升皮肤微生物的稳态；增加皮肤持水量。

6.长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物在用于处理和/或预防皮肤炎症中的应用，其特征在于，所述长双歧杆菌的保藏编号为gdmcc no.63740；保藏名称为：bifidobacterium longum mnh 06105；保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心gdmcc；保藏日期为2023年08月23日；所述处理和/或预防皮肤炎症包括以下中的至少一种：缓解皮肤炎症；修复或调节受损和/或发炎的皮肤；修复或调节紫外线照射导致的受损或发炎的皮肤。

7.如权利要求1-3、6任一项所述的应用，其特征在于，所述长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物用于：粉底、乳液、精华液、润肤液、洗面奶、面霜、面膜、营养水中的至少一种。

8.如权利要求1-3、6任一项所述的应用，其特征在于，所述长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物能改善皮肤暗淡。

9.如权利要求1-3、6任一项所述的应用，其特征在于，所述长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物能够改善皮肤干燥、发痒、灼热、刺痛、紧绷中至少一种症状。

10.如权利要求7任一项所述的应用，其特征在于，所述粉底、乳液、精华液、润肤液、洗面奶、面霜、面膜和/或营养水中含有质量百分比为0.1％～20％的二裂酵母发酵产物溶胞产物。

技术总结
本公开提供了一种长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)的二裂酵母发酵产物溶胞产物在修复、调节皮肤屏障及舒缓抗炎的应用，属于微生物发酵技术领域。所述长双歧杆菌的二裂酵母发酵产物溶胞产物能改善皮肤的微生物屏障、皮肤的物理屏障、皮肤的免疫屏障三层屏障功能，同时具有修复并调节皮肤屏障损伤，修复或调节受损和/或发炎的皮肤的屏障功能，增强皮肤屏障的作用。可广泛用于皮肤屏障修复和舒缓抗炎的化妆品和护肤品的制备。

技术研发人员：苏敦,陈文杰,李晓敏,毛新亮,王杰,梁锏文,王琳
受保护的技术使用者：广东完美生命健康科技研究院有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23