一种融合蛋白及其制备与在免疫检测中的应用的制作方法

本发明涉及免疫检测，具体涉及一种融合蛋白及其制备与其在免疫检测中的应用，尤其涉及一种鼠抗体fc与alfa标签的融合蛋白及其制备与在免疫检测中的应用。

背景技术：

1、抗体是自身免疫系统中产生的一类蛋白质，具有特异性识别和结合外来物质(抗原)的能力。抗体分子由二条相同的分子量较小的肽链称为轻链和二条相同的分子量较大的肽链称为重链组成的。每条链包含一个n端(氨基端)和一个c端(羧基端)。

2、igg(免疫球蛋白)是人血清中最丰富的抗体。根据血清中的丰度，igg分为四个亚类：igg1、igg2、igg3和igg4。免疫检测中，通常使用一抗来识别检测靶点，然后使用二抗来识别一抗，从而放大信号。抗体fc，即抗体的fc片段，是抗体的重要组成部分，是免疫检测当中二抗的主要识别靶点。抗体igg1的fc，也即免疫球蛋白g1(igg1)的fc片段。

3、标签抗体，能够高度特异性识别通过重组技术构建的融合蛋白上特殊表位的抗体，因此常用于标记抗体以提高抗体的特异性和亲和力。alfa标签是一种新型的表位标签，13个氨基酸的多肽，即srleeelrrrlte。文献the alfa-tag is a highly versatile toolfor nanobody-based bioscience applications，nat commun.2019sep 27；10(1):4403.doi:10.1038/s41467-019-12301-7.报道了alfa标记蛋白的纳米体(nbalfa)能以高亲和力识别该标签，能超分辨率显微镜、免疫沉淀和蛋白质印迹，也可以在体内检测蛋白质。

4、但现有技术并未公开其与鼠抗体fc融合，能提高免疫检测的灵敏度，本发明拟提供一种鼠igg1的fc与alfa标签融合制得的融合蛋白及其制备方法与其在免疫检测中的应用。

技术实现思路

1、本发明要解决的技术问题是：针对现有技术存在的问题，提供一种融合蛋白及其制备与在免疫检测中的应用，该融合蛋白能提高免疫检测的灵敏度，能广泛应用于重组抗体。

2、为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种融合蛋白，所述融合蛋白包括如下模块：

4、鼠igg1的fc，连接子，alfa标签以及il-2的信号肽；

5、鼠igg1的fc的c端通过所述连接子与所述alfa标签融合，鼠igg1的fc的n端连接所述il-2的信号肽。

6、进一步地，所述融合蛋白具有如seq id no:1所示的氨基酸序列。

7、进一步地，

8、所述il-2的信号肽的氨基酸序列如seq id no:1的第1～20位所示。

9、所述鼠igg1(即小鼠免疫球蛋白g1)的fc，其氨基酸序列如seq id no:1的第21～234位所示。

10、所述连接子的氨基酸序列如seq id no:1的第235～237位所示。

11、所述alfa标签为由13个氨基酸组成的多肽，其氨基酸序列如seq id no:1的第238～250位所示。

12、第二方面，本发明还提供与所述的融合蛋白相关的生物材料，所述生物材料包括如下材料中的任一种：

13、(1)编码权利要求1-3任一所述的融合蛋白的基因，所述基因具有如seq id no:2所示的核苷酸序列；

14、(2)含有(1)所述基因的表达试剂盒；

15、(3)含有(1)所述基因的重组载体；

16、(4)含有(1)所述基因的重组生物细胞。

17、进一步地，所述重组载体为含有编码所述融合蛋白基因的质粒pcdna3.1。

18、进一步地，所述重组生物细胞为含有编码所述融合蛋白基因的hek293t细胞。

19、第三方面，本发明还提供所述的融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：

20、(1)表达载体的构建：

21、选取鼠igg1的fc片段，然后在fc的c端通过连接子gsp与alfa标签融合，fc的n端使用il-2的信号肽，合成基因序列后插入载体pcdna3.1的kpn i和bamh i酶切位点，得到质粒pcdna3.1-fc-alfa；

22、(2)fc与alfa标签的融合蛋白的表达：

23、使用转染试剂pei将质粒pcdna3.1-fc-alfa转染入hek293t细胞，细胞培养、分离、纯化即得所述融合蛋白，记为fc-alfa蛋白。

24、第四方面，本发明还提供一种免疫检测产品，包括所述的融合蛋白。

25、进一步地，所述的免疫检测产品包括酶联免疫吸附(elisa)检测试剂、免疫组织化学检测试剂、免疫荧光检测试剂、免疫印迹检测试剂、免疫亲和层析试剂中的一种。

26、第五方面，本发明还提供所述的融合蛋白或所述免疫检测产品在免疫检测中的应用，用于提高免疫检测的灵敏度。

27、技术效果：

28、本发明提供的融合蛋白，包括鼠igg1的fc，连接子，alfa标签以及il-2的信号肽；所述鼠igg1的fc的c端通过连接子gsp与所述alfa标签融合，所述鼠igg1的fc的n端连接所述il-2的信号肽。本发明通过合适的连接子构建igg1的fc与alfa标签的融合蛋白，本发明提供的融合蛋白通过常用的基因合成方法即可制得，并且其为鼠igg1的fc片段与alfa标签的融合，其分子量低于常规的抗体，具有较强的亲和力和特异性，且相比普通抗体，本发明提供的融合蛋白更容易制备和大量生产。将所述的fc与alfa标签的融合蛋白应用在免疫检测当中，可以提高免疫检测的灵敏度，可以广泛应用于重组抗体。

技术特征：

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括如下模块：

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，

4.与权利要求1-3任一所述的融合蛋白相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括如下材料中的任一种：

5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，

6.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，

7.一种如权利要求1-3任一所述的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

8.一种免疫检测产品，其特征在于，包括权利要求1-3任一所述的融合蛋白。

9.如权利要求8所述的免疫检测产品，其特征在于，为酶联免疫吸附检测试剂、免疫组织化学检测试剂、免疫荧光检测试剂、免疫印迹检测试剂、免疫亲和层析试剂中的任一种。

10.权利要求1-3任一所述的融合蛋白或权利要求8-9任一所述免疫检测产品在免疫检测中的应用，用于提高免疫检测的灵敏度。

技术总结
本发明公开一种融合蛋白及其制备与其在免疫检测中的应用。所述融合蛋白包括如下模块：鼠IgG1的Fc，连接子，ALFA标签以及IL‑2的信号肽；所述鼠IgG1的Fc的C端通过所述连接子与所述ALFA标签融合，所述鼠IgG1的Fc的N端连接所述IL‑2的信号肽。所述融合蛋白具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，编码所述融合蛋白的基因具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。本发明提供的融合蛋白其分子量低，具有较强的亲和力和特异性，且相比普通抗体，更容易制备和大量生产。将本发明的Fc与ALFA标签的融合蛋白应用在免疫检测当中，可以提高免疫检测的灵敏度，可以广泛应用于重组抗体。

技术研发人员：贺彪
受保护的技术使用者：湖南至纯生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23