一种间充质干细胞制剂及其在治疗非梗阻性无精子症中的应用的制作方法

本发明涉及一种间充质干细胞制剂及其在治疗非梗阻性无精子症中的应用，属于生物医药。

背景技术：

1、间充质干细胞是一类最早从骨髓组织中发现的非造血多潜能细胞，其不仅具有分化为成骨细胞、成脂肪细胞和成内皮细胞等多种类细胞，还具有自我更新能力，即持续不断地进行自我复制，维持干细胞池的稳定。间充质干细胞作为一种拥有多向分化潜能的干细胞，同时具有低度免疫原性、高相容性等特性，被越来越多的研究者关注。

2、非梗阻性无精子症是男性不育的常见原因，无精子症的原因是精子发生异常。目前治疗主要包括药物治疗、手术治疗和辅助生殖技术。以卵胞浆内单精子注射(icsi)为标准治疗方式的体外受精技术的建立，使这些男性有机会通过手术从睾丸中取出精子成功地养育了一个孩子。干细胞移植成为治疗非梗阻性无精子症的一个新方向，干细胞移植可以更好的恢复精子活力，同时也可以提高单精子注射成功率。

3、构建一种间充质干细胞制剂并应用于非梗阻性无精子症是本领域急需解决的问题。

4、本发明旨在提供一种间充质干细胞制剂及其在治疗非梗阻性无精子症中的应用。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种间充质干细胞制剂及其在治疗非梗阻性无精子症中的应用。

2、本发明所述多粘类芽孢杆菌cgmcc 1.878(paenibacillus polymyxa)为市购，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心；所述多粘类芽孢杆菌cgmcc 1.547(paenibacillus polymyxa)为市购，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心；所述植物乳杆菌cgmcc 1.573(lactobacillus plantarum)为市购，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。

3、本发明所需要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现。

4、一种间充质干细胞制剂的制备如下：

5、(1)制备多粘类芽孢杆菌cgmcc1.878提取液；将多粘类芽孢杆菌cgmcc1.878在营养肉汁琼脂培养基配上划线，37℃需氧培养48小时后，挑选菌落稀释成1*107cfu/ml种子液，按0.5％接种量接种该种子液于营养肉汁液体培养基中24小时，37℃，150r/min，需氧培养24小时后，使用0.22um滤膜过滤得到的多粘类芽孢杆菌cgmcc1.878提取液，4℃保存备用；

6、(2)选用小鼠胫骨制备间充质干细胞悬液：将1周龄c57bl/6n雄性小鼠脱颈处死，乙醇浸泡消毒，处理小鼠暴露胫骨，将其剪断放进装有含双抗的mem alpha basic培养基的瓶中，用1ml注射器吸取培养基，冲出骨髓，直至胫骨发白。将胫骨转移至装有ii型胶原酶的ep管内，剪碎消化30min，离心弃上清，pbs冲洗3遍后，将骨片转移至含10％胎牛血清及双抗的mem alpha basic培养基中，置于37℃、5％co2培养箱中培养。每3天换液1次；当细胞生长至80％汇合度进行传代。将p3代的细胞培养好后将细胞悬浮，稀释成1*106个/ml的浓度；

7、(3)混合：将步骤(1)和(2)制备得到的多粘类芽孢杆菌cgmcc1.878提取液和小鼠间充质干细胞悬液按照1：1的比例混合得到该间充质干细胞制剂。

8、本发明的优点：

9、本发明人发现，使用多粘类芽孢杆菌cgmcc1.878提取液联合间充质干细胞可以明显提升非梗阻性无精子症小鼠的生殖能力，在非梗阻性无精子症治疗领域具有广阔的应用前景。

技术特征：

1.一种间充质干细胞制剂，其包括：多粘类芽孢杆菌cgmcc1.878提取液和间充质干细胞悬液。

2.权利要求1所述的间充质干细胞制剂的制备，其特征在于制备方法如下：

3.权利要求1所述的间充质干细胞制剂，其特征在于可用于治疗非梗阻性无精子症。

技术总结
本发明公开了一种间充质干细胞制剂及其在治疗非梗阻性无精子症中的应用，其包括：首先制备多粘类芽孢杆菌CGMCC1.878提取液，其次制备间充质干细胞悬液，将多粘类芽孢杆菌CGMCC1.878提取液和间充质干细胞悬液按照1：1混合得到该间充质干细胞制剂，其可用于治疗非梗阻性无精子症。

技术研发人员：吴雪梅,沈诚博
受保护的技术使用者：吴雪梅
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23