乳酸克鲁维酵母及其用途的制作方法
本发明属于生物发酵，具体涉及乳酸克鲁维酵母及其用途。
背景技术：
1、乳酸克鲁维酵母( kluyeromyces lactis)是广泛存在于自然界的一种非致病酵母菌，其具有降解酶种类多和分解能力强的良好生物特性，在乳制品中作为乳糖酶和菊粉酶重要来源，其在农业生产中广泛使用安全性较佳。乳酸克鲁维酵母具有高的分泌蛋白的能力和高的生物量，可用于生产酶制剂，并且可以用来构建重组蛋白表达系统。乳酸克鲁维酵母底盘细胞作为异源表达宿主还具有诸多优势：第一，它已被美国食品药品监督管理局认证为食品安全级 (generally recognized as safe，gras) 微生物；第二，其遗传背景清晰，易于进行遗传操作，且基因游离表达和整合表达的稳定性均较高；第三，糖基化适度；第四，其可以在标准酵母培养基中生长，大规模发酵时不需要甲基营养型酵母（例如巴斯德毕赤酵母和多形汉逊酵母）所需的防爆发酵设备。
2、现有的乳酸克鲁维酵母胞外蛋白分泌量少，这可能是目前乳酸克鲁维酵母在重组蛋白表达应用上的限制，因此，急需寻找新的乳酸克鲁维酵母以解决胞外蛋白分泌等问题。
技术实现思路
1、为了克服现有技术上的缺陷，本发明的目的在于提供一种新的乳酸克鲁维酵母，以改善胞外蛋白分泌不佳的问题。
2、本发明第一方面提供了一种乳酸克鲁维酵母（ kluyveromyces lactis），其保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为cctcc no: m 20241460。
3、本发明第二方面提供了一种前述乳酸克鲁维酵母的发酵方法，其包括以下步骤：
4、所述乳酸克鲁维酵母在氮源和碳源存在下进行发酵，收集胞外蛋白。
5、在一些实施方案中，所述发酵方法还包括分离纯化胞外蛋白。
6、在一些实施方案中，所述碳源至少包括葡萄糖。
7、在一些实施方案中，所述氮源至少包括硫酸铵。
8、在一些实施方案中，所述碳源与所述氮源的质量比为(1-5): 1。
9、在一些实施方案中，所述发酵的时间为32-80小时。
10、在一些实施方案中，所述发酵的温度为25-40℃。
11、在一些实施方案中，所述乳酸克鲁维酵母的接种量为0.05%-5%。
12、在一些优选的实施方案中，所述乳酸克鲁维酵母在硫酸铵葡萄糖培养基或玉米浆培养基中进行发酵。
13、本发明第三方面提供了前述乳酸克鲁维酵母在表达异源蛋白中的用途。
14、本发明第四方面提供了前述乳酸克鲁维酵母在制备食品或饲料添加剂中的用途。
15、本发明第五方面提供了一种食品组合物或饲料组合物，其包含前述所提供的乳酸克鲁维酵母或其培养物。
16、本发明提供的乳酸克鲁维酵母克服了现有技术的缺陷，显著改善了胞外蛋白分泌不佳的问题。在100 ml摇瓶中发酵，检测胞外总蛋白分泌约为0.58 ± 0.06 mg/ml，所获得的胞外总蛋白分泌量远远超过现有技术的水平。
17、保藏信息：
18、分类命名：乳酸克鲁维酵母yn2-1 kluyveromyces lactisyn2-1
19、保藏日期：2024年07月03日
20、保藏编号：cctcc no: m 20241460
21、保藏单位：中国典型培养物保藏中心
22、保藏地址：中国.武汉.武汉大学。
技术特征：
1.一种乳酸克鲁维酵母，其特征在于，其保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为cctcc no: m 20241460。
2.一种根据权利要求1所述的乳酸克鲁维酵母的发酵方法，其特征在于，其包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵方法还包括分离纯化胞外蛋白。
4.根据权利要求2或3所述的发酵方法，其特征在于，所述碳源至少包括葡萄糖。
5.根据权利要求4所述的发酵方法，其特征在于，所述氮源至少包括硫酸铵。
6.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于，所述碳源与所述氮源的质量比为 (1-5): 1。
7.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵的时间为32-80小时。
8.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵的温度为25-40℃。
9.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于，所述乳酸克鲁维酵母的接种量为0.05%-5%。
10.根据权利要求2所述的发酵方法，其特征在于，所述乳酸克鲁维酵母在硫酸铵葡萄糖培养基或玉米浆培养基中进行发酵。
11.根据权利要求1所述的乳酸克鲁维酵母在表达外源蛋白中的用途。
12.根据权利要求1所述的乳酸克鲁维酵母在制备食品或饲料添加剂的用途。
13.一种食品组合物或饲料组合物，其特征在于，其包含权利要求1所述的乳酸克鲁维酵母或其培养物。
技术总结
本发明属于生物发酵技术领域，具体涉及乳酸克鲁维酵母及其用途。本发明提供了一种乳酸克鲁维酵母，其保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC NO:M 20241460。所述乳酸克鲁维酵母显著改善了胞外蛋白分泌不佳的问题，是蛋白表达的良好宿主选择。
技术研发人员：骆滨,王松伟,邱博书,许昱,张改改
受保护的技术使用者：上海昌进生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23