一种基于胞内区截短体的嵌合抗原受体
本发明涉及嵌合抗原受体领域，具体涉及一种基于胞内区截短体的嵌合抗原受体。
背景技术：
1、嵌合抗原受体简称car(chimeric antigen receptor)，搭载针对特定肿瘤抗原car的t细胞称为car-t细胞。car-t疗法在肿瘤的治疗中应用广泛，但仍然存在诸多局限，例如在临床上治疗白血病和实体瘤所遇到的细胞因子风暴、car-t细胞向nk细胞转型(nk化)、容易细胞耗竭和疗效有待提高的问题，尤其是实体瘤免疫治疗的应用。
2、现有技术cn112500492a对嵌合抗原受体的胞内结构域和跨膜结构域的连接顺序进行改造，发现当细胞内结构域为：cd3ε胞内区+共刺激信号传导区胞内区+cd3ζ胞内域时，得到的嵌合抗原受体在肿瘤治疗效果中好且副作用少，但是该嵌合抗原受体分子膜水平下降，容易nk化和细胞耗竭，且生长能力、持续增殖能力、杀伤能力和抗原敏感性有待进一步提升。
3、因此，需要设计一款疗效更好且副作用更少的嵌合抗原受体，从而为car-t疗法提供新的思路。
技术实现思路
1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种嵌合抗原受体及其用途。
2、为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种嵌合抗原受体。包括：
3、依次连接的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域；
4、所述胞外结构域包括抗原识别区和铰链区；
5、所述胞内结构域包括依次连接的cd3ε胞内区的截短体、共刺激信号传导区和cd3ζ胞内区。
6、本发明第二方面提供一种多核苷酸序列，该多核苷酸序列选自：
7、(1)编码权利要求前述的嵌合抗原受体的多核苷酸序列；和/或
8、(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列；
9、本发明第三方面提供一种核酸构建物，所述核酸构建物含有前述多核苷酸序列。
10、本发明第四方面提供慢病毒载体系统，所述慢病毒载体系统含有前述的核酸构建物及慢病毒载体辅助成分。
11、本发明第五方面提供一种基因修饰的t细胞，所述t细胞含有前述多核苷酸序列，或含有前述核酸构建物，或感染了前述慢病毒载体系统。
12、本发明第六方面提供前述嵌合抗原受体、前述多核苷酸序列、前述核酸构建物或前述慢病毒载体系统在制备以下任一种或多种用途产品中的应用：(1)制备car-t细胞；(2)提升car-t细胞的膜表面car分子水平；(3)提高car-t细胞抗原敏感性；(4)抑制car-t细胞的细胞因子ifn-γ、il-2、tnf分泌；(5)促进car-t细胞静息态的自然生长；(6)增强car-t细胞经靶细胞刺激后的持续增殖能力；(7)提高car-t细胞反复杀伤力；(8)减弱car-t细胞nk化和细胞耗竭；(9)提高car-t的干性和记忆细胞亚群。
13、本发明第七方面提供前述嵌合抗原受体、前述多核苷酸序列、前述核酸构建物、前述慢病毒载体系统或前述基因修饰的t细胞在制备肿瘤治疗产品中的应用。
14、如上所述，本发明的嵌合抗原受体及其用途，具有以下有益效果：
15、1、本发明的嵌合抗原受体相对于现有技术来说，疗效更好且副作用更少，体现在car-t细胞的膜表面car分子水平提高；形成更好的免疫突触；抗原敏感性更好；细胞因子更少；生长能力更好；持续增殖能力更好；反复杀伤能力更好；减弱了nk化和细胞耗竭；提高car-t的干性和记忆细胞亚群。
16、2、本发明的嵌合抗原受体可进一步提高肿瘤的治疗效果，同时因其下调自身细胞因子来降低巨噬细胞单核细胞活化产生炎性细胞因子，从而可早期预防细胞因子风暴。
技术特征：
1.一种嵌合抗原受体，包括：
2.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，相对于cd3ε胞内区，所述cd3ε胞内区的截短体仅保留依次连接的brs序列和itam序列，在brs序列和itam序列之间还包括连接序列。
3.如权利要求2所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述连接序列包括若干个氨基酸残基；所述连接序列的氨基酸残基包括甘氨酸和/或丝氨酸；进一步地，所述连接序列的氨基酸残基数量为0～9个；更进一步地，所述cd3ε胞内区的截短体的氨基酸序列如seq id no：1所示。
4.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述共刺激信号传导区选自cd27、cd28、cd134、4-1bb和icos的胞内区中的一种或多种。
5.如权利要求4所述的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
6.如权利要求1所述的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
7.如权利要求6所述的嵌合抗原受体，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
8.如权利要求1-7任一所述的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如seq id no：5、seq id no：6、或seq id no：20所示。
9.一种多核苷酸序列，该多核苷酸序列选自：
10.如权利要求9所述的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列如seq id no：7、seq id no：8、或seq id no：18所示。
11.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有权利要求9-10任一所述的多核苷酸序列；
12.一种慢病毒载体系统，所述慢病毒载体系统含有权利要求11所述的核酸构建物及慢病毒载体辅助成分。
13.一种基因修饰的t细胞，其特征在于，所述t细胞含有权利要求9-10任一所述的多核苷酸序列，或含有权利要求11所述的核酸构建物，或感染了权利要求12所述的慢病毒载体系统。
14.权利要求1-8中任一项所述的嵌合抗原受体、或权利要求9-10任一所述的多核苷酸序列，或权利要求11所述的核酸构建物，或权利要求12所述的慢病毒载体系统在制备以下任一种或多种用途产品中的应用：(1)制备car-t细胞；(2)提升car-t细胞的膜表面car分子水平；(3)提高car-t细胞抗原敏感性；(4)抑制car-t细胞的细胞因子ifn-γ、il-2、tnf分泌；(5)促进car-t细胞静息态的自然生长；(6)增强car-t细胞经靶细胞刺激后的持续增殖能力；(7)提高car-t细胞反复杀伤力；(8)减弱car-t细胞nk化和细胞耗竭；(9)提高car-t的干性和记忆细胞亚群。
15.权利要求1-8中任一项所述的嵌合抗原受体、或权利要求9-10任一所述的多核苷酸序列，或权利要求11所述的核酸构建物，或权利要求12所述的慢病毒载体系统，或权利要求13所述的基因修饰的t细胞在制备肿瘤治疗产品中的应用。
技术总结
本发明提供一种基于胞内区截短体的嵌合抗原受体，包括：依次连接的胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域；所述胞外结构域包括抗原识别区和铰链区；所述胞内结构域包括依次连接的CD3ε胞内区的截短体、共刺激信号传导区和CD3ζ胞内区。本发明的嵌合抗原受体相对于现有技术来说，疗效更好且副作用更少，体现在CAR‑T细胞的膜表面CAR分子水平提高；形成更好的免疫突触；抗原敏感性更好；细胞因子更少；生长能力更好；持续增殖能力更好；反复杀伤能力更好；减弱了NK化和细胞耗竭；提高CAR‑T的干性和记忆细胞亚群。本发明的嵌合抗原受体可进一步提高肿瘤的治疗效果，同时因其下调自身细胞因子来降低巨噬细胞单核细胞活化产生炎性细胞因子，可早期预防细胞因子风暴。
技术研发人员：许琛琦,徐心怡,徐晓敏,陈昊天,吴微
受保护的技术使用者：中国科学院分子细胞科学卓越创新中心
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23