慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法
本申请涉及生物医药，具体涉及一种慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法。
背景技术：
1、细胞衰老是是指细胞在执行生命活动过程中，随着时间的推移，细胞增殖与分化能力和生理功能逐渐发生衰退的变化过程。慢性炎症和衰老可形成密不可分的恶性循环，相互作用加重疾病进程。为了解决上述存在的问题，公开号为cn 114958766 a的中国专利公开了“一种衰老细胞模型的构建方法”，该发明通过在人皮肤成纤维细胞中过表达蛋白progerin构建一种衰老细胞模型。
2、但例如口腔扁平苔藓这类常见的慢性口腔黏膜皮肤疾病，在炎性微环境众多的非免疫细胞成分中，成纤维细胞是间质中数量最庞大的一组细胞。上述衰老模型未针对炎性微环境以及炎性衰老，因此亦无法满足如口腔扁平苔藓这类疾病的后续基础研究的需求。现阶段的研究也没有提出针对上述特殊的炎性微环境造成的成纤维细胞衰老模型。
3、基于此，亟需一种针对口腔扁平苔藓这种特殊的炎性微环境造成的成纤维细胞衰老模型。
技术实现思路
1、本申请提供一种慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法，以解决上述问题。
2、在本申请实施例第一方面提供一种慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法，所述方法包括：
3、获取口腔扁平苔藓原代成纤维细胞并培养，得到培养细胞；
4、采用预设刺激浓度的炎症因子刺激所述培养细胞，在预设刺激时间后，得到慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型。
5、在本申请可选的一实施例中，所述预设刺激浓度的范围为10ng/ml-40ng/ml，所述预设刺激时间的范围为24h-96h。
6、在本申请可选的一实施例中，所述炎症因子包括ifn-γ、tnf-α、il-6、il-1β、nf-κb和c反应蛋白的至少一种或多种。
7、在本申请可选的一实施例中，获取人口腔扁平苔藓原代成纤维细胞并培养，得到培养细胞，包括：
8、获取口腔扁平苔藓患者的临床组织；
9、采用双抗浸泡所述临床组织，并重复清洗预设次数，得到预处理后的临床组织；
10、去除所述预处理后的临床组织的脂肪组织，并将剩余组织剪碎后放置于dmem培养基中，在5％co2的37℃恒温培养箱中培育，每2-3天更换dmem培养基，直至得到第三代原代细胞作为所述培养细胞。
11、在本申请可选的一实施例中，在所述慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型中，衰老标记蛋白p16、p21和p53的表达量均增加，并且g0/g1期占比增加。
12、在本申请实施例第二方面提供一种慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建系统，所述系统包括：
13、第一培养子系统，用于获取人口腔扁平苔藓原代成纤维细胞并培养，得到培养细胞；
14、第二培养子系统，用于采用预设刺激浓度的炎症因子刺激所述培养细胞，在预设刺激时间后，得到慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型。
15、在本申请可选的一实施例中，所述第二培养子系统中的所述预设刺激浓度的范围为10ng/ml-40ng/ml，所述预设刺激时间的范围为24h-96h。
16、在本申请可选的一实施例中，所述第二培养子系统中的所述炎症因子包括ifn-γ、tnf-α、il-6、il-1β、nf-κb和c反应蛋白的至少一种或多种。
17、在本申请可选的一实施例中，所述第一培养子系统包括：
18、获取模块，用于获取口腔扁平苔藓患者的临床组织；
19、预处理模块，用于采用双抗浸泡所述临床组织，并重复清洗预设次数，得到预处理后的临床组织；
20、培养模块，用于去除所述预处理后的临床组织的脂肪组织，并将剩余组织剪碎后放置于dmem培养基中，在5％co2的37℃恒温培养箱中培育，每2-3天更换dmem培养基，直至得到第三代原代细胞作为所述培养细胞。
21、在本申请可选的一实施例中，所述第二培养子系统中的所述慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型中的衰老标记蛋白p16、p21和p53的表达量均增加，并且g0/g1期占比增加。
22、本申请包括以下优点：本申请实施例提供一种慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法，通过获取口腔扁平苔藓原代成纤维细胞并培养，得到培养细胞；采用预设刺激浓度的炎症因子刺激所述培养细胞，在预设刺激时间后，得到慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型。通过以口腔扁平苔藓原代成纤维细胞的第三代原代细胞为对象，采用本申请提出的炎症因子在预设刺激时间和预设刺激浓度下，可得到同时具备炎性和衰老的成纤维细胞模型。该方法与通过脂多糖刺激动物巨噬细胞或者在患者细胞中进行蛋白表达相比，更加简单高效，适应于工业生产，同时，该模型更适合应用于炎性微环境以及炎性衰老的研究，更适用于对口腔扁平苔藓这类疾病的后续基础研究。进一步地，本申请构建的慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型对于细化研究该类具有炎症迁移难愈的炎症性疾病具有重要的临床意义和价值。
技术特征：
1.一种慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述预设刺激浓度的范围为10ng/ml-40ng/ml，所述预设刺激时间的范围为24h-96h。
3.根据权利要求1所述的慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法，其特征在于，所述炎症因子包括ifn-γ、tnf-α、il-6、il-1β、nf-κb和c反应蛋白的至少一种或多种。
4.根据权利要求1所述的慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法，其特征在于，获取人口腔扁平苔藓原代成纤维细胞并培养，得到培养细胞，包括：
5.根据权利要求1所述的慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法，其特征在于，在所述慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型中，衰老标记蛋白p16、p21和p53的表达量均增加，并且g0/g1期占比增加。
6.一种慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建系统，其特征在于，所述系统包括：
7.根据权利要求6所述的慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建系统，其特征在于，所述第二培养子系统中的所述预设刺激浓度的范围为10ng/ml-40ng/ml，所述预设刺激时间的范围为24h-96h。
8.根据权利要求6所述的慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建系统，其特征在于，所述第二培养子系统中的所述炎症因子包括ifn-γ、tnf-α、il-6、il-1β、nf-κb和c反应蛋白的至少一种或多种。
技术总结
本申请提供一种慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型的构建方法，具体涉及生物医药技术领域，通过获取口腔扁平苔藓原代成纤维细胞并培养，得到培养细胞；采用预设刺激浓度的炎症因子刺激培养细胞，在预设刺激时间后，得到慢性低度炎症刺激形成衰老成纤维细胞模型。通过以口腔扁平苔藓原代成纤维细胞的第三代原代细胞为对象，采用本申请提出的炎症因子在预设刺激时间和预设刺激浓度下，可得到同时具备炎性和衰老的成纤维细胞模型。该方法与通过脂多糖刺激动物巨噬细胞或者在患者细胞中进行蛋白表达相比，更加简单高效，适应于工业生产。且该模型更适合应用于炎性微环境以及炎性衰老的研究，更适用于对口腔扁平苔藓这类疾病的后续基础研究。
技术研发人员：王诗萌,刘俊江,周红梅,吴芳龙,杨津,李昕
受保护的技术使用者：四川大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23