一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液及其制备方法与流程

本发明涉及医学诊断，尤其涉及一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液及其制备方法。

背景技术：

1、肺结核是一种常见的呼吸系统传染性疾病。随着我国医疗水平的不断深入发展，对肺结核的防控力度也逐步加强。但据医学调查显示，肺结核患者发病率仍然居高不下，现已成为全世界突出的公共卫生问题。据估计，全球四分之一的人口(约20亿人)感染过结核分枝杆菌。大部分人感染后没有症状，被归类为潜伏性结核感染。如果不治疗，5～10％的潜伏性结核感染会进展为结核病。未经治疗的潜伏性结核感染进展为结核病，约占中国结核病病例的80％。因此，治疗潜伏性结核感染能有效阻止其进展为结核病。

2、肺结核危害巨大，但如果肺结核患者能够及时被发现，并且得到早期规律的治疗，完全可以被治愈。从总体上来讲，肺结核筛查能了解筛查对象中结核潜伏感染和肺结核患者的总体情况，分析肺结核潜伏感染和患者的基本特征，以及肺结核分枝杆菌潜伏感染和患者的来源地的分布。肺结核筛查能够对肺结核患者进行早期治疗管理并帮助患者恢复身体健康，有利于对结核潜伏感染者开展早期预防性治疗和医学观察，同时可减少和防止结核病的传播，保护易感者的身心健康。

3、分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60％，特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入，一般不易着色。传统的染色方法要经过加热和延长染色时间来促使其着色。例如，传统萋-尼氏抗酸染色法是用石碳酸复红染液将标本着色后用水冲洗并用3％浓度盐酸酒精进行脱色，再加碱性美蓝复染后用油镜观察；复染后分枝杆菌为红色，其他细菌和背景中的物质为蓝色。传统染色方法的优势在于：①可直接发现病原菌，作为考核和评价疗效的重要指标，具有重要的临床诊断价值；②操作简便，价格低廉，适于各级实验室开展；但也存在以下问题：①敏感性较低：通常每毫升含5000～10000条以上抗酸菌才可得到阳性结果；②操作步骤较为繁琐，染色时间较长；③需要进行加热等步骤，增加苯酚的挥发，对操作者身体伤害较大。

4、为解决上述问题，亟需一种时间短、操作简单、标本适用范围广的检测试剂。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液及其制备方法，解决传统染色方法存在的敏感性低、时间长、步骤繁琐的问题。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液，包括第一试剂和第二试剂；

4、以所述第一试剂的总质量分数100％为基准，所述第一试剂包含盐0.6～1％、促溶剂15～20％、保湿剂20～30％、荧光素0.05～0.2％、抗荧光淬灭剂0.1～4％，余量为水；

5、以所述第二试剂的总质量分数100％为基准，所述第二试剂包含酸0.1～0.5％、醇71～84％、复染剂0.2～0.8％，余量为水；

6、其中，所述抗荧光淬灭剂为l-抗坏血酸、三乙烯二胺、没食子酸丙酯、柠檬酸钾中的一种或几种。

7、优选的，在所述一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液中，所述第一试剂中，所述盐为氯化钠或氯化钾，所述促溶剂为二甲基亚砜或氯仿，所述保湿剂为丙二醇、甘油、聚乙二醇或聚丙二醇，所述荧光素为金胺o。

8、优选的，在所述一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液中，所述第二试剂中，所述酸为盐酸，所述醇为甲醇、乙醇或丙醇，所述复染剂为甲基绿。

9、优选的，在所述一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液中，所述第一试剂包含盐0.8～1％、促溶剂16～18％、保湿剂22～26％、荧光素0.08～0.12％、抗荧光淬灭剂0.2～3.5％，余量为水。

10、优选的，在所述一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液中，所述第一试剂包含盐0.9％、促溶剂16.5％、保湿剂25％、荧光素0.1％、抗荧光淬灭剂3～3.2％，余量为水。

11、优选的，在所述一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液中，所述第二试剂包含酸0.2～0.4％、醇74～78％、复染剂0.4～0.6％，余量为水。

12、本发明还提供了一种所述结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液的制备方法，包括以下步骤：

13、将盐、促溶剂、保湿剂、荧光素、抗荧光淬灭剂与水按照质量分数混合，得到第一试剂；

14、将酸、醇、复染剂与水按照质量分数混合，得到第二试剂。

15、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

16、本发明提供的防淬灭抗酸荧光染色液中不含苯酚，比传统的抗酸染色液更安全；且在染色时无需加热，通过含有金胺o的第一试剂染色及第二试剂复染后，用含有蓝光光源的荧光显微镜检查即可，只需两步操作，2min左右即可完成染色，临床使用更加方便、快捷，可大大提高结核分枝杆菌的检测效率；同时添加抗荧光淬灭剂，大大增加了荧光染色强度和荧光保留时间。

技术特征：

1.一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液，其特征在于，包括第一试剂和第二试剂；

2.如权利要求1所述的一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液，其特征在于，所述第一试剂中，所述盐为氯化钠或氯化钾，所述促溶剂为二甲基亚砜或氯仿，所述保湿剂为丙二醇、甘油、聚乙二醇或聚丙二醇，所述荧光素为金胺o。

3.如权利要求1所述的一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液，其特征在于，所述第二试剂中，所述酸为盐酸，所述醇为甲醇、乙醇或丙醇，所述复染剂为甲基绿。

4.如权利要求1或2所述的一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液，其特征在于，所述第一试剂包含盐0.8～1％、促溶剂16～18％、保湿剂22～26％、荧光素0.08～0.12％、抗荧光淬灭剂0.2～3.5％，余量为水。

5.如权利要求4所述的一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液，其特征在于，所述第一试剂包含盐0.9％、促溶剂16.5％、保湿剂25％、荧光素0.1％、抗荧光淬灭剂3～3.2％，余量为水。

6.如权利要求1或3所述的一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液，其特征在于，所述第二试剂包含酸0.2～0.4％、醇74～78％、复染剂0.4～0.6％，余量为水。

7.权利要求1～6任一项所述的一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结
本发明属于医学诊断技术领域，公开了一种结核分枝杆菌防淬灭抗酸荧光染色液及其制备方法。所述染色液包括第一试剂和第二试剂；第一试剂包含盐0.6～1％、促溶剂15～20％、保湿剂20～30％、荧光素0.05～0.2％、抗荧光淬灭剂0.1～4％，余量为水；第二试剂包含酸0.1～0.5％、醇71～84％、复染剂0.2～0.8％，余量为水。本发明提供的防淬灭抗酸荧光染色液中不含苯酚，比传统的抗酸染色液更安全；且在染色时无需加热，只需两步操作，2min左右即可完成染色，临床使用更加方便、快捷，可大大提高结核分枝杆菌的检测效率；同时添加抗荧光淬灭剂，大大增加了荧光染色强度和荧光保留时间。

技术研发人员：陈文芳,蒲英飞,廖丽芳
受保护的技术使用者：朗禾（天津）医疗科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23