一株枯草芽孢杆菌菌株及其发酵方法和应用与流程

本发明属于微生物，特别涉及一株枯草芽孢杆菌菌株及其发酵方法和应用。

背景技术：

1、石斛属(dendrobium)植物主要在归胃、肾经方面作用较为突出，《神农本草经》等古医学典籍以及《中国药典》均对其有所记载，被历代医家视为珍品，民间甚至称其为“九大仙草”之一。大量现代医学研究表明，石斛中的多糖、生物碱、酚类、菲类和联苄类等活性成分具有较好的抗肿瘤、抗衰老、抗氧化、降血糖以及提高免疫力等药用功效。其中，石斛碱(dendrobine，c16h25o2n)是石斛属植物所特有的一种倍半萜类生物碱，被认为是中药石斛增强免疫力的有效成分。

2、中草药作为饲料添加剂在中国历史上早有记载，在著名农业技术典籍《齐民要术》中就有其在畜禽及水产养殖中发挥多方面的功效、兼具营养和药用双重作用的记载。但由于中草药的活性成分纷繁复杂以及水产动物肠道较短排泄快等特点，在水产饲料中直接添加中草药会导致药剂有效成分释放不足，在肠道中吸收时间短、吸收少、治疗效果欠佳、适口性差等问题，易造成中草药资源的浪费及水质的污染。利用特定的微生物对中草药进行发酵，可促进其药效成分的释放，提高中草药的利用价值。

3、植物内生菌是存在于健康植物内部器官或组织中的细菌、真菌、放线菌等内生微生物群体，其经过与宿主植物长期的协同、共生关系，在宿主植物的生长发育周期中发挥着不可替代的作用。大量研究表明，植物内生菌在进行体外培养时，其自身所产生的次级代谢产物与宿主所产生的功能物质具有相同或相似的功效活性，且药用植物与众不同的次级活性代谢物极有可能与其相关微生物群落的高特异性有关。利用药用植物内生菌对其进行发酵，相比于异源微生物发酵，更能起到协同增效的作用。

技术实现思路

1、本发明提供了一株可高产纤维素酶的枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)，已于2016年09月19日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为cgmcc no.13010。

2、进一步，所述枯草芽孢杆菌的16s rdna序列如序列表seq id no.1所示。

3、本发明还提供了含有所述枯草芽孢杆菌的微生态制剂。

4、本发明还提供了含有所述枯草芽孢杆菌的饲料。

5、本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌的发酵方法，具体为：

6、发酵培养基为：按照重量份计，碳源1～4份、氮源1～4份、余量为微量元素；发酵条件为：ph 5.5～7.5，培养温度33～41℃，培养时间为18～24h。

7、优选地，上述发酵方法，发酵培养基中，碳源为葡萄糖，氮源为酵母粉，碳氮比为1:2；发酵条件为：ph 7.0，培养温度37℃，培养时间为20h。

8、本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌在发酵石斛中的应用。具体为通过发酵石斛制备石斛碱。

9、本发明还提供了一种发酵石斛，所述发酵石斛由所述枯草芽孢杆菌发酵石斛茎粉获得。

10、本发明还提供了所述发酵石斛在制备促进水产动物生长和(或)免疫性能的药物或饲料中的应用。

11、本发明还提供了所述枯草芽孢杆菌在制备纤维素酶中的应用。

12、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

13、本发明提供了一株新的石斛内生枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)，该菌株可高产纤维素酶，经过发酵培养基和发酵条件优化，其纤维素酶活力最高可达55.73u/ml。并可利用自身产生的纤维素酶降解石斛细胞壁中的纤维素，促进其细胞中有效成分的释放。含有所述菌株发酵石斛的水产功能性生物饲料可显著提升南美白对虾以及大黄鱼等水产动物的免疫力、成活率以及生长性能。

技术特征：

1.一株枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)菌株，其特征在于，其保藏编号为cgmccno.13010。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌，其特征在于，其16s rdna序列如表seq idno.1所示。

3.含有权利要求1或2所述枯草芽孢杆菌的微生态制剂。

4.含有权利要求1或2所述枯草芽孢杆菌的饲料。

5.权利要求1或2所述枯草芽孢杆菌产纤维素酶的发酵方法，其特征在于：

6.根据权利要求5所述的发酵方法，其特征在于：

7.权利要求1或2所述枯草芽孢杆菌在发酵石斛中的应用。

8.一种发酵石斛，其特征在于，所述发酵石斛由权利要求1或2所述的枯草芽孢杆菌发酵石斛茎粉获得。

9.权利要求8所述的发酵石斛在制备促进水产动物生长和(或)免疫性能的药物或饲料中的应用。

10.权利要求1或2所述枯草芽孢杆菌在制备纤维素酶中的应用。

技术总结
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株枯草芽孢杆菌菌株及其发酵方法和应用。本发明从药用植物石斛中分离得到一株高产纤维素酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，已于2016年09月19日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No.13010。该菌可产较高活性的纤维素酶，能分解石斛细胞壁中的纤维素，促进石斛碱等有效成分的溶出。将该菌株发酵过的石斛用于水产养殖，可提高南美白对虾、大黄鱼等水产动物的生长性能和免疫机能。

技术研发人员：汪攀,王珊珊,王珺,朱传忠,胡婷,晁珊珊,鲁晏宏,丁清华
受保护的技术使用者：福建大北农华有水产科技集团有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23