家蚕seroin1启动子及其重组表达载体和应用的制作方法
本发明涉及生物，具体涉及家蚕seroin1启动子，还涉及含有家蚕seroin1启动子的重组表达载体，和所述重组载体在驱动目的基因在家蚕丝腺特异表达中的应用。
背景技术：
1、蚕丝纤维为蛋白质纤维，是一种在纺织工业、生物医学等领域具有广泛应用的纤维材料。但由于蚕丝蛋白结构上的缺陷，蚕丝纤维的力学性能相比合成纤维较差，从而制约了其在新型高分子纤维、特种材料等领域的应用。此外，蚕丝纤维最大的问题在于脱胶，脱胶完全会损坏丝纤维本身，脱胶不完全则会影响丝纤维的品质。本发明探究seroin1蛋白启动子与丝胶和丝素蛋白之间的结合紧密度之间的关系，以期获得蚕丝脱胶更容易的家蚕品种。
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种家蚕seroin1启动子；本发明的目的之二在于提供含有所述家蚕seroin1启动子的重组表达载体；本发明的目的之三在于提供所述重组表达载体在驱动目的基因在家蚕丝腺特异表达中的应用。
2、为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
3、1、家蚕seroin1启动子，所述家蚕seroin1启动子的核酸序列如seq id no.3所示。
4、2、含有所述家蚕seroin1启动子的重组表达载体。
5、本发明优选的，所述重组表达载体为基础载体pslfa1180fa 或pbac[3×p3-dsredaf]改造获得。
6、本发明进一步优选的，所述重组表达载体的构建过程为：首先将家蚕hr3增强子、seroin1启动子、目的基因序列和ser1polya终止信号组成的目的框[hr3-seroin1p-目的基因-ser1polya]插入穿梭载体pslfa1180fa的多克隆位点中，获得重组载体psl[hr3-seroin1p-目的基因-ser1polya]，然后再用asci从载体psl[hr3-seroin1p-目的基因-ser1polya]中切下[hr3-seroin1p-目的基因-ser1polya]片段，与同样经asci酶切的载体pbac[3×p3-dsredaf]载体连接，即得。
7、3、所述重组表达载体在驱动目的基因在家蚕丝腺特异表达中的应用。
8、本发明优选的，具体包括如下步骤：将所述重组表达载体与编码piggybac转座酶的助载体混合显微注射蚕卵，胶水封口，25℃催青至孵化，人工饲料饲育至成虫后进行自交制种，筛选出在眼睛或神经特异发射红色荧光的转基因个体。
9、本发明的有益效果在于：本发明利用蛋白质组学手段鉴定到一个在家蚕丝腺特异性且高量表达的seroin1蛋白，证实seroin1启动子可以作为家蚕丝腺特异性启动子应用于外源基因的表达，从而为生产应用打下理论基础，本发明提供的含有seroin1启动子的重组表达载体为上述研究提供了有力的工具。
技术特征：
1.家蚕seroin1启动子，其特征在于，所述家蚕seroin1启动子的核酸序列如seq idno.3所示。
2.含有权利要求1所述家蚕seroin1启动子的重组表达载体。
3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为基础载体pslfa1180fa 和pbac[3×p3-dsredaf]改造获得。
4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体的构建过程为：首先将家蚕hr3增强子、seroin1启动子、目的基因序列和ser1polya终止信号组成的表达框[hr3-seroin1p-目的基因-ser1polya]插入穿梭载体pslfa1180fa的多克隆位点中，获得重组载体psl[hr3-seroin1p-目的基因-ser1polya]，然后再用asci从载体psl[hr3-seroin1p-目的基因-ser1polya]中切下[hr3-seroin1p-目的基因-ser1polya]片段，与同样经asci酶切的载体pbac[3×p3-dsredaf]载体连接，即得。
5.权利要求4所述重组表达载体在驱动目的基因在家蚕丝腺特异表达中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，具体包括如下步骤：将权利要求4所述重组表达载体与编码piggybac转座酶的助载体混合显微注射蚕卵，胶水封口，25℃催青至孵化，人工饲料饲育至成虫后进行自交制种，筛选出在眼睛或神经特异发射红色荧光的转基因个体。
技术总结
本发明公开了家蚕seroin1启动子及其重组表达载体和应用，利用蛋白质组学手段鉴定得到一个在家蚕丝腺特异性且高量表达的丝蕊蛋白Seroin1，证实Seroin1启动子可以作为家蚕丝腺特异性启动子应用于外源基因的表达，本发明提供的含有seroin1启动子的重组表达载体为上述研究提供了有力的工具。
技术研发人员：张晓璐,段经敏,郭凯雨,赵萍
受保护的技术使用者：西部（重庆）科学城种质创制大科学中心
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23