一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法

本发明涉及植物组织培养技术，具体为一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法。

背景技术：

1、膜荚黄芪(astragalus membranaceus(fisch.)bunge)属豆科黄芪属，主要分布于我国黑龙江、吉林、辽宁、山西、陕西、河北、宁夏及新疆等地，其根作为中药材黄芪入药，具有镇痛、免疫功能、利尿、促进微循环、抗过氧化脂质、增加血浆中环磷酸腺苷的药理作用。此外，膜荚黄芪还可用于绿化美化、防风固沙、饲料等作用，在我国具有悠久的开发利用历史。近年来，由于生态环境变化及过度采挖等因素，野生膜荚黄芪资源急剧减少，市场需求主要为人工种植为主，但存在育苗移栽周期长、种子生产有限、种源种质退化等问题。

2、植物组织培养可在无菌条件下将植物的组织、器官、细胞及原生质体分离接种并通过不同类型的培养基进行培养以获得不定苗，是植物人工繁育的重要途径之一，对解决营养繁殖技术难题，实现良种无性扩繁等具有重要意义。膜荚黄芪愈伤组织培养已有相关报道，研究材料大多为人工种植植株，所选用的外植体包括叶片、叶柄、子叶、种子、幼茎和下胚轴等，且大都是经过外植体-愈伤组织-不定芽-不定芽生根-不定苗等过程，花费时间较长。因此，利用野生种为材料，通过组织培养快速获得纯化无性系进行种质资源扩繁，进而选育并工厂化生产优良品质的种苗显得尤为重要。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供一种由野生膜荚黄芪幼茎诱导获得不定苗的方法，通过组织培养的方法，使用野生膜荚黄芪无菌苗幼茎直接诱导形成不定芽，不定芽经生根获得不定苗，快速简便，缩短周期降低了成本，有利于野生膜荚黄芪的种植资源的开发和保护。

2、一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，其特征在于包括如下步骤：

3、s1、无菌苗获取：取野生膜荚黄芪成熟种子，消毒后接种至ms培养基中培养，获得无菌野生膜荚黄芪完整植株；

4、s2、幼茎诱导不定芽：取野生膜荚黄芪植株幼茎，以野生膜荚黄芪的幼茎为外植体，以ms为基本培养基，分别添加激素6-ba和iaa诱导不定芽分化；

5、s3、生根培养：将单个不定芽转接于1/2ms添加iaa和iba的生根培养基进行不定根的诱导；

6、s4、炼苗与移栽：取不定芽诱导生根培养的组培苗，进行炼苗处理，炼苗处理后进行移栽。

7、优选的，s1中野生膜荚黄芪种子需要进行预处理，具体为用细沙搓5min，再用流水冲洗2h，在超净工作台中用无菌水冲洗4-5遍，75％的无水乙醇浸泡30s，15％的naclo消毒5～15min，消毒结束后再用75％的酒精浸泡30s，无菌水冲洗4～5次，无菌滤纸吸干水分，将野生膜荚黄芪种子接种至ms培养基中，观察无菌苗生长情况，获得野生膜荚黄芪完整植株。

8、优选的，naclo消毒时间为10min。

9、优选的，s2中6-ba浓度为1.5mg/l，iaa浓度为0.2mg/l。

10、优选的，s3中iba浓度为0.5mg/l，iaa浓度为1.0mg/l。

11、优选的，s4中炼苗时间为3～5d，炼苗时组培瓶为半开。

12、优选的，培养条件为选择基础培养基ms，分别添加琼脂3.5g/l，蔗糖15g/l，形成ms培养基，1/2ms培养基的以上组分减半，ph为5.8，115℃高温灭菌30min，培养温度为(23±1)℃，光照度为3000lx，光周期12h/d。

13、有益效果如下：

14、本发明最大的有益效果是提供了一个适用于野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，同时确定了该方法的具体流程和最佳参数，填补了野生膜荚黄芪快速诱导不定苗方法的空白。

15、其次：

16、(1)通过利用野生膜荚黄芪无菌苗幼茎为外植体，接种至添加相应激素的培养基上诱导不定苗，可以达到省时省力的效果，相比于传统的方法培育周期能节省40天；

17、(2)所选用的6-ba和iaa是常见的激素，价格便宜；

18、(3)试验耗时短，可大量处理材料及进行不定苗诱导；

19、(4)操作简单，对设备要求较低；

20、(6)从野生膜荚黄芪扩繁角度来讲，该方法能快速诱导出不定苗，且该方法出芽率高可用于大量不定苗的诱导，大大缩短了野生膜荚黄芪育苗周期以及减少了成本，为野生膜荚黄芪种质资源保护、种苗快速繁殖和遗传改良奠定了良好的基础。

技术特征：

1.一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，其特征在于包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，其特征在于：

3.根据权利要求2所述的一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，其特征在于：

4.根据权利要求1所述的一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，其特征在于：s2中6-ba浓度为1.5mg/l，iaa浓度为0.2mg/l。

5.根据权利要求4所述的一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，其特征在于：s3中iba浓度为0.5mg/l，iaa浓度为1.0mg/l。

6.根据权利要求5所述的一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，其特征在于：s4中炼苗时间为3～5d，炼苗时组培瓶为半开。

7.根据权利要求1-6任一所述的一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，其特征在于：培养条件为选择基础培养基ms，分别添加琼脂3.5g/l，蔗糖15g/l，形成ms培养基，1/2ms培养基的以上组分减半，ph为5.8，115℃高温灭菌30min，培养温度为(23±1)℃，光照度为3000lx，光周期12h/d。

技术总结
本发明公开了一种野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，该方法通过组织培养选用野生膜荚黄芪无菌苗幼茎为外植体，接种至添加不同浓度6‑BA、IAA和IBA的MS培养基中诱导不定苗。通过调整不同激素的配比，筛选出适合野生膜荚黄芪不定苗的最佳诱导条件，建立了一套适用于野生膜荚黄芪快速诱导不定苗的方法，丰富了野生膜荚黄芪诱导不定苗的方法，且该方法出芽率高可用于大量不定苗的诱导，大大缩短了野生膜荚黄芪育苗周期以及减少了成本，为野生膜荚黄芪种质资源保护和种苗快速繁殖奠定了良好的基础。

技术研发人员：梁文裕,李晶晶,王玲霞,杨雪,朱强
受保护的技术使用者：宁夏大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23