一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法与流程

本发明涉及药物检测，具体涉及一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法。

背景技术：

1、糖尿病肾病是糖尿病患者的一种重要并发症，由于糖尿病患者长时间患病而导致的蛋白尿与肾小球滤过率 （gfr）进行性降低；目前，糖尿肾病已成为世界末期肾脏病的第二位原因，仅次于肾小球肾炎。糖尿病肾病在早期，往往主要出现的是微量血蛋白尿，随着疾病的发展，蛋白尿会越来越多，进而逐步发展到肾病综合征的范围，其后期甚至会直接影响肾功能，且许多糖尿病肾病患者在后期的发展非常快，会迅速发展到尿毒症，因此，对于糖尿病肾病的前期筛查与治疗至关重要。

2、非奈利酮（finerenone）是一种非甾体选择性盐皮质激素受体拮抗剂，其可被醛固酮和皮质醇激活并调节基因转录，可阻断盐皮质激素受体过度激活而导致的有害影响；在糖尿病患者中，盐皮质激素受体过度激活被认为会导致慢性肾病进展和心血管受损，这可能由代谢、血流动力学或炎症和纤维化等因素驱动。非奈利酮在上皮（如肾脏）与非上皮（如心脏和血管）组织中阻断盐皮质激素受体介质的钠重吸收和盐皮质激素受体的过度激活，对盐皮质激素受体具有高效力和高选择性，进而有助于维护机体正常的水电解质平衡，减少心衰复发和肾脏疾病进展等。非奈利酮片中非奈利酮的含量至关重要，现有技术中，非奈利酮片含量主要采用液相色谱法中的梯度检测法，即检测过程中，通过两相（流动相a与流动相b）、采用梯度洗脱的方式（即一相含量呈梯度减少、另一相含量呈梯度增加）进行非奈利酮含量的检测；然而，此方法检测过程中，存在基线不稳、需要增加捕集柱、成本提升的问题，同时，该检测方法处理与采集过程时间长、分析时间长，易导致测试过程中溶剂挥发，进而出现测试含量结构偏大、准确性差、误差大等问题，且由于非奈利酮在水中的不溶解性，易出现物质提取不完全、不稳定等现象，进一步造成测试误差大、精准性差的问题。

技术实现思路

1、针对以上现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，该检测方法能够快速、高效、精准的测定非奈利酮片中非奈利酮的含量，有效解决现有非奈利酮含量检测过程中采集时间长、基线不稳、溶剂易挥发、非奈利酮未完全溶解等问题。

2、本发明的目的通过以下技术方案实现：

3、一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，包括：

4、非奈利酮片溶解：首先，取一定量的非奈利酮片、加入溶解试剂中进行超声溶解；放置在室温、待非奈利酮片完全溶解后，再加入溶解试剂稀释至特定浓度，并均匀混合；然后，采用0.45μm的滤膜对稀释后并搅拌均匀的溶液进行过滤，获得滤液作为测试溶液；

5、液相色谱法测定：采用超纯硅胶为填充剂的色谱柱，采用含有三氟乙酸的磷酸盐溶液与甲醇溶液组成的混合溶液作为流动相，采用等度洗脱方式进行检测。

6、基于上述方案的进一步优化，所述非奈利酮片超声溶解的时间为9～13min。

7、基于上述方案的进一步优化，所述非奈利酮片稀释后的浓度为0.18～0.22mg/ml。

8、基于上述方案的进一步优化，所述溶解试剂包括乙醇溶液与十二烷基硫酸钠溶液，乙醇溶液与十二烷基硫酸钠溶液之间的体积百分比为25%～35%：65%～75%，且十二烷基硫酸钠溶液的浓度为0.2%～0.3%。

9、基于上述方案的进一步优化，所述十二烷基硫酸钠溶液的制备方法为：取0.2～0.3g十二烷基硫酸钠，并将其置于100ml的容量瓶中；加入温度为60～70℃的纯化水60～70ml，超声处理5～10min，使得十二烷基硫酸钠完全溶解；然后，冷却至室温，并加入纯化水至容量瓶的100ml刻度，均匀混合，即得。

10、基于上述方案的进一步优化，所述色谱柱为ultimate xb c8，4.6mm×150mm，3μm。

11、基于上述方案的进一步优化，所述含有三氟乙酸的磷酸盐溶液与甲醇溶液之间的体积百分比为25%～35%：65%～75%；含有三氟乙酸的磷酸盐溶液中三氟乙酸的占比为0.08～0.12%（即每1000ml含有三氟乙酸的磷酸盐溶液中含有0.8～1.2ml三氟乙酸）；磷酸盐采用磷酸二氢钾与磷酸二氢钠中的任意一种。

12、基于上述方案的进一步优化，所述液相色谱法的流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为235～245nm；柱温为25～35℃，进样体积为5～10μl。

13、以下是本发明方案所具备的技术效果：

14、本申请通过乙醇溶液与十二烷基硫酸钠溶液组成的溶解试剂对非奈利酮进行溶解，一是在短时间内有效提升非奈利酮的溶解度、避免非奈利酮未溶解的问题，二是提高非奈利酮片的稳定性、从而避免溶解后又团聚成固体颗粒或分解产生杂质等问题；同时，通过溶解试剂与含有三氟乙酸的磷酸盐溶液与甲醇溶液组成的流动相，配合超纯硅胶为填充剂的色谱柱，使得主峰出锋时间提前，有效避免溶液中不可避免的杂质对检测结果的影响，确保测定结果的准确性、减小测定误差。本申请测试方法能够有效增加基线稳定性、从而在不适用捕集柱的前提下便能够实现有效、准确的测试，极大缩短采集时间（本申请方法能够在5min内获得检测结果）、节省检测成本，从而实现快速、低成本的非奈利酮含量检测。

15、此外，本申请检测方法灵敏度高、准确性高，定量限为1.022ng、检测限位0.2044ng，能够同时检测非奈利酮原料药含量、非奈利酮片成品或中间品等多种非奈利酮含量，也可用于制剂研发过程清洁确认样品中非奈利酮含量检测，适用范围广，能够高效、可靠、精确的实现非奈利酮含量的检测。

技术特征：

1.一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，其特征在于：包括：

2.根据权利要求1所述的一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，其特征在于：所述非奈利酮片超声溶解的时间为9～13min。

3.根据权利要求1或2所述的一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，其特征在于：所述非奈利酮片稀释后的浓度为0.18～0.22mg/ml。

4.根据权利要求1～3任一项所述的一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，其特征在于：所述溶解试剂包括乙醇溶液与十二烷基硫酸钠溶液，乙醇溶液与十二烷基硫酸钠溶液之间的体积百分比为25%～35%：65%～75%，且十二烷基硫酸钠溶液的浓度为0.2%～0.3%。

5.根据权利要4所述的一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，其特征在于：所述十二烷基硫酸钠溶液的制备方法为：取0.2～0.3g十二烷基硫酸钠，并将其置于100ml的容量瓶中；加入温度为60～70℃的纯化水60～70ml，超声处理5～10min，使得十二烷基硫酸钠完全溶解；然后，冷却至室温，并加入纯化水至容量瓶的100ml刻度，均匀混合，即得。

6.根据权利要4所述的一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，其特征在于：所述色谱柱为ultimate xb c8，4.6mm×150mm，3μm。

7.根据权利要4所述的一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，其特征在于：所述含有三氟乙酸的磷酸盐溶液与甲醇溶液之间的体积百分比为25%～35%：65%～75%；含有三氟乙酸的磷酸盐溶液中三氟乙酸的占比为0.08～0.12%；磷酸盐采用磷酸二氢钾与磷酸二氢钠中的任意一种。

技术总结
本发明提供一种非奈利酮片中非奈利酮的检测方法，涉及药物检测领域，包括非奈利酮片溶解与液相色谱法测定；其中，非奈利酮片溶解具体步骤为：首先，取一定量的非奈利酮片、加入溶解试剂中进行超声溶解，放置在室温、待非奈利酮片完全溶解后，再加入溶解试剂稀释至特定浓度，并均匀混合，然后，采用0.45μm的滤膜对稀释后并搅拌均匀的溶液进行过滤，获得滤液作为测试溶液；液相色谱法测定具体步骤为：采用超纯硅胶为填充剂的色谱柱，采用含有三氟乙酸的磷酸盐溶液与甲醇溶液组成的混合溶液作为流动相，采用等度洗脱方式进行检测。该检测方法能够快速、高效、精准的测定非奈利酮片中非奈利酮的含量。

技术研发人员：陈用芳,杨绪凤,王松,邓美春,宋富文
受保护的技术使用者：重庆康刻尔制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23