IL10变体及其用途的制作方法

背景技术：

1、细胞因子和生长因子配体通常通过细胞表面受体亚基的多聚化发出信号。在一些情况下，细胞因子充当多特异性(例如，双特异性或三特异性)配体，其促进受体亚基的胞外结构域的缔合，并相应地使它们的胞内结构域接近，从而可以发生胞内信号传导。细胞因子配体的性质及其与受体亚基胞外结构域的相互作用决定了哪些受体亚基缔合以形成配体受体复合物以及此类亚基组合的胞内信号传导特征。

2、细胞因子受体亚基的胞内结构域具有富含脯氨酸的janus激酶(“jak”)结合结构域，其通常位于细胞膜内表面附近的细胞因子受体亚基的胞内结构域的盒1/盒(box1/box)区域。胞内jak激酶与jak结合结构域关联。当细胞因子受体亚基的胞内结构域接近(通常通过受体的同源细胞因子配体与受体亚基的胞外结构域的结合)，jak使彼此磷酸化。已在哺乳动物细胞中鉴定出jak1、jak2、jak3和tyk2四种janus激酶。ihle等.(1995)nature 377(6550):591-4,1995；o'shea和plenge(2012)immunity 36(4):542-50。jak的磷酸化诱导jak中的构象变化，从而提供jak进一步磷酸化其他胞内蛋白质的能力。所产生的磷酸化级联导致多种胞内因子的活化，其转导与细胞因子配体的受体活化相关的胞内信号。在许多情况下，被jak磷酸化的蛋白质是转录信号转导子和激活子(或“stat”)蛋白家族的成员。迄今为止，已鉴定出哺乳动物stat家族的七个成员：stat1、stat2、stat3、stat4、stat5a、stat5b和stat6。delgoffe,等，(2011)curr opin immunol.23(5):632-8；levy和darnell(2002)nat rev mol cell biol.3(9):651-62以及murray,(2007)j immunol.178(5):2623-9。活化的jak和stat蛋白的选择性相互作用，统称为jak/stat通路，提供了响应细胞因子结合而观察到的多种胞内反应。这种由细胞因子与其受体结合引发的胞内反应通常称为下游信号传导。

3、抗炎细胞因子人白细胞介素-10(hil10)，也称为人细胞因子合成抑制因子(csif)，被归类为2型(类)细胞因子，一组细胞因子包括il19、il20、il22、il24(mda-7)和il26、干扰素(ifn-α、-β、-γ、-δ、-ε、-κ、-ω和-τ)和干扰素样分子(诸如利米汀(limitin)、il28a、il28b和il29)。hil10是分子量为37kda的非共价同二聚体，其包含两个hil10单体多肽。各hil10单体多肽是具有两个胞内二硫键的160个氨基酸的多肽。各hil10单体表达为包含178个氨基酸的前蛋白，其中前18个氨基酸包含信号肽。尽管hil10主要在巨噬细胞中表达，但在活化的t细胞、b细胞、肥大细胞和单核细胞中也检测到表达。

4、人il10通过与hil10受体(hil10r)相互作用发挥作用。hil10r是一种ii型细胞因子受体，其包含hil10rα和hil10rβ亚基，也分别称为hil10r1和hil10r2。hil10r活化的特征是各hil10单体与hil10r的一个hil10rα和一个hil10rβ亚基结合，二聚hil10细胞因子产生了包含两个hil10单体、两个hil10rα亚基和两个hil10rβ亚基的六聚配体/受体hil10r复合物。

5、hil10rα受体亚基是跨膜蛋白，其表达为包含n末端21个氨基酸信号序列的578个氨基酸的前蛋白。成熟的经典hil10ra受体亚基的氨基酸序列是有以下序列的557个氨基酸的多肽：

6、hgtelpsppsvwfeaeffhhilhwtpipnqsestcyevallrygieswnsisncsqtlsydltavtldlyhsngyrarvravdgsrhsnwtvtntrfsvdevtltvgsvnleihngfilgkiqlprpkmapandtyesifshfreyeiairkvpgnftfthkkvkhenfslltsgevgefcvqvkpsvasrsnkgmwskeecisltrqyftvtnviiffafvlllsgalayclalqlyvrrrkklpsvllfkkpspfifisqrpspetqdtihpldeeaflkvspelknldlhgstdsgfgstkpslqteepqfllpdphpqadrtlgnreppvlgdscssgssnstdsgiclqepslspstgptweqqvgsnsrgqddsgidlvqnsegragdtqggsalghhsppepevpgeedpaavafqgylrqtrcaeekatktgcleeespltdglgpkfgrclvdeaglhppalakgylkqdplemtlassgaptgqwnqpteewsllalsscsdlgisdwsfahdlaplgcvaapggllgsfnsdlvtlplisslqsse(seq id no:83)

7、(uniprot参考号q13651)。

8、人il10r(hil10rβ)受体亚基是跨膜蛋白，其表达为包含19个氨基酸n末端信号的325个氨基酸的前-蛋白。成熟的经典hil10rb受体亚基的氨基酸序列是有以下序列的306个氨基酸多肽：

9、mvpppenvrmnsvnfknilqwespafakgnltftaqylsyrifqdkcmnttltecdfsslskygdhtlrvraefadehsdwvnitfcpvddtiigppgmqvevladslhmrflapkieneyetwtmknvynswtynvqywkngtdekfqitpqydfevlrnlepwttycvqvrgflpdrnkagewsepvceqtthdetvpswmvavilmasvfmvclallgcfallwcvykktkyafsprnslpqhlkeflghphhntllffsfplsdendvfdklsviaedsesgkqnpgdscslgtppgqgpqs(seq id no:84)

10、(uniprot参考号q08334)。氨基酸20-220(成熟hil10rβ蛋白的氨基酸1-201)对应于胞外结构域，氨基酸221-242(成熟hil10rβ蛋白的氨基酸202-223)对应于22个氨基酸的跨膜结构域，氨基酸243-325(成熟hil10rβ蛋白的氨基酸224-306)对应于胞内结构域。

11、鼠il10rβ(mil10rβ)受体亚基表达为包含19个氨基酸的n末端信号序列的349个氨基酸前-蛋白。成熟的经典hil10rb受体亚基的氨基酸序列是有以下序列的330个氨基酸多肽：

12、mipppekvrmnsvnfknilqwevpafpktnltftaqyesyrsfqdhckrtastqcdfshlskygdytvrvraeladehsewvnvtfcpvedtiigppemqieslaeslhlrfsapqienepetwtlkniydswayrvqywkngtnekfqvvspydsevlrnlepwttyciqvqgflldqnrtgewsepicertgndeitpswivaiilivsvlvvflfllgcfvvlwliykktkhtfrsgtslpqhlkeflghphhstfllfsfpppeeaevfdklsiiseesegskqspedncaseppsdpgpreleskdeapspphddpklltstsev(seq id no:85)

13、mil2rβ在uniprotkb数据库中被引为条目q61190。氨基酸20-220(成熟蛋白的氨基酸1-201)对应于胞外结构域，氨基酸221-241(成熟蛋白的氨基酸202-222)对应于21个氨基酸的跨膜结构域，氨基酸242-349(成熟蛋白的氨基酸223-330)对应于胞内结构域。

14、il10与其受体和受体亚基的相互作用已在科学文献中进行了研究和描述。pletnev等提供了与il10r2可溶性受体链和il10/sil10r1/sil10r2三元复合物的结构以及参与配体-受体和受体-受体相互作用的残基相关的信息。pletnev等.(2005)bmcstructural biology 5:10。虽然hil10与hil10rα受体亚基之间的相互作用是特异性的高亲和力相互作用，但hil10与hil10rβ的缔合是相对低亲和力的相互作用。报告表明，hil10与hil10rα的相互作用会诱导hil10和/或hil10rα中的构象变化，从而促进[hil10:hil10rα]复合物与hil10rβ的结合。三元[hil10:hil10rα:hil10rβ]复合物的形成被认为是起始hil10信号传导的限制因素。

15、il-10与il10r的相互作用影响jak1(与hil10rα相关)和tyk2(与hil10rβ相关)的活化，并诱导stat1、stat3以及一些细胞中stat5的活化。通过hil10rα细胞质结构域中的两个酪氨酸残基中的任一个，stat3直接招募到hil-10/hil-10r复合物中，这两个酪氨酸残基响应hil-10发生磷酸化，并且是hil-10信号传导所必需的。stat3的同二聚化导致其从受体中释放，并将磷酸化的stat同二聚体易位到细胞核中，在细胞核中结合至许多基因启动子(包括受stat3正向调节的il10启动子)中的stat3结合元件。hil10受体胞内结构域拥有与其抗炎活性相关的特定序列，而其他stat3活化细胞因子受体则不共有这些序列。riley等(1999)journal of biological chemistry 274(23):15967-16664。

16、hil10rα和il10rb受体亚基的表达随细胞类型和细胞活化状态的不同而变化。hil10rα受体亚基是hil10受体独有的“私有”或“专有”亚基。相比之下，hil10rβ亚基与包括il22、il26、il28和干扰素λl1(ifnλ1)受体复合物的其他细胞因子受体共有。表达hil10rα的细胞的活化状态可能导致表达水平的大幅变化。造血细胞中hil10rα的表达(组成性表达低水平的hil10rα)经常因各种刺激而大幅上调。不同于主要在造血细胞上表达的hil10rα，il10rb受体亚基是普遍表达的。虽然某些细胞类型以不同水平表达hil10rβ，但与hil10rα相比，给定细胞类型中hil10rβ的表达水平受细胞活化状态的影响通常较小。

17、hil10与多种功能相关，并通过与t细胞、b细胞、巨噬细胞和抗原呈递细胞(apc)的相互作用表现出免疫抑制和免疫刺激活性。hil10的免疫抑制活性已有充分记录。hil10与抑制活化单核细胞和活化巨噬细胞中il1α、il1β、il6、il8、tnfα、gm-csf和g-csf的表达以及抑制nk细胞产生促炎细胞因子干扰素-γ(infγ)相关。然而，hil10还通过刺激cd8+t细胞产生促炎细胞因子ifn-γ表现出免疫刺激作用。hil10的免疫刺激和免疫抑制特性已被证明是hil10在人疾病治疗的临床应用中的挑战。

18、saxton等描述了il10与il10rb亚基的相互作用和参与il10与il10rβ结合的氨基酸残基，并且这些残基的修饰可能提供il10变体，其保留il10对髓样细胞的免疫抑制功能但减少对cd8+t细胞的促炎活性。saxton等(2021)science371:eabc8433。

技术实现思路

1、本公开提供用于调节由白介素-10(il10)介导的信号转导的组合物。具体地，本公开提供了包含至少一种il10单体变体的il10突变蛋白，该单体变体包含一个或多个氨基酸取代。还提供了可用于产生此类il10单体变体的组合物和方法，以及用于调节il10介导的信号传导和用于治疗与il10介导的信号转导扰动相关的病况的方法。

2、在一个方面中，本公开提供hil10单体变体，其与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，并且在对应于seq id no:1(成熟人il10肽)的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代。换言之，在一个方面中，本公开提供了hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代，其中所述hil10单体变体的氨基酸序列与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)。在一些实施方式中，本公开提供hil10单体变体，其在选自以下组的seq id no:1的氨基酸残基处包含一个或多个氨基取代：h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100。

3、在一些实施方式中，位置h14处的氨基酸取代选自以下组：h14c、h14f、h14p、h14w和h14g。

4、在一些实施方式中，位置n18处的氨基酸取代选自以下组：n18r和n18k。

5、在一些实施方式中，位置n21处的氨基酸取代选自以下组：n21c、n21d和n21e。

6、在一些实施方式中，位置m22处的氨基酸取代选自以下组：m22d、m22s、m22t和m22w。

7、在一些实施方式中，位置d25处的氨基酸取代选自以下组：d25p和d25q。

8、在一些实施方式中，位置r32处的氨基酸取代选自以下组：r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f和r32y。

9、在一些实施方式中，位置s93处的氨基酸取代是s93g。

10、在一些实施方式中，位置e96处的氨基酸取代选自以下组：e96c、e96f、e96y和e96w。

11、在一些实施方式中，位置t100处的氨基酸取代是t100c。

12、在一些实施方式中，本公开提供了与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的hil10单体变体，所述hil10单体变体包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c。在一些实施方式中，本公开提供了hil10单体变体，其包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c，其中所述hil10单体变体的氨基酸序列与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)。在一些实施方式中，本公开提供了hil10单体变体，其包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c。

13、在一些实施方式中，本公开提供了与表1中的氨基酸序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的hil10单体变体。在一些实施方式中，hil10单体变体由表1中的核酸序列编码。在一些实施方式中，hil10单体变体包含与表1中的氨基酸序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)而没有氨基末端序列mgwsciilflvatatgvhsahhhhhhhhgs的序列。在一些实施方式中，hil10单体变体由表1中的核酸序列编码，而没有编码氨基酸序列mgwsciilflvatatgvhsahhhhhhhhgs的5'核酸序列(例如，没有核酸序列atgggatggtcctgcatcatcctgtttctggtggctaccgccaccggtgtcc actctgctcaccatcaccatcaccaccatcacggatcc)。

14、在一些实施方式中，本公开提供了与表2中的氨基酸序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的hil10单体变体。在一些实施方式中，本公开提供了与选自seqid no:88至seq id no:126(例如，seq id no:88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125或126)的氨基酸序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性)的hil10单体变体。在一些实施方式中，本公开提供了hil10单体变体，其包含选自seq id no:88至seq id no:126(例如，seq id no:88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125或126)的氨基酸序列。

15、在一些实施方式中，本公开提供了与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的hil10单体变体，并且所述hil10单体变体包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c，任选地进一步包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个其它的氨基酸取代：h14a、h14d、h14e、h14i、h14k、h14l、h14m、h14n、h14q、h14r、h14s、h14t、h14y、h14v、n18y、n18f、n18a、n18d、n18e、n18l、n18v、n18s、n18t、n18i、n18v、n18m、n18h、n21a、n21r、n21q、n21h、n21k、n21s、n21v、n21i、n21l、n21m、n21t、m22a、m22v、m22i、m22l、m22n、m22q、r24e、r24d、r24n、r24q、r24a、r24s、r24t、d25a、d25n、d25h、d25i、d25k、d25l、d25v、d28a、d28e、d28l、d28v、d28s、d28t、d28i、d28v、d28m、d28h、d28k、d28r、r32a、r32d、r32e、r32l、r32v、r32s、r32t、r32i、r32v、r32m、r32h、e74a、e74d、e74l、e74v、e74s、e74t、e74i、e74v、e74m、e74h、e74k、e74r、h90a、h90d、h90e、h90i、h90k、h90l、h90m、h90n、h90q、h90r、h90s、h90t、h90y、h90v、n92d、n92q、n92e、n92h、n92k、n92s、n92v、n92i、n92l、n92m、n92t、n92a、s93e、s93a、s93r、s93n、s93d、s93q、s93e、s93i、s93l、s93k、s93m、s93v、e96a、e96n、e96d、e96q、e96h、e96k、e96s、t100d、t100v、t100e、t100a、t100r、t100n、t100q、t100e、t100i、t100l、t100k、t100m、t100s、r104a、r104w、r104y、r104f、r104h、r104d、r104e、r104n、r104q、r104s、r104t、r104i、r104l、r104v和r104m。在一些实施方式中，本公开提供了hil10单体变体，其包含选自以下组的根据seqid no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c，并且任选地进一步包含选自以下组的根据seq idno:1编号的一个或多个其他氨基酸取代：h14a、h14d、h14e、h14i、h14k、h14l、h14m、h14n、h14q、h14r、h14s、h14t、h14y、h14v、n18y、n18f、n18a、n18d、n18e、n18l、n18v、n18s、n18t、n18i、n18v、n18m、n18h、n21a、n21r、n21q、n21h、n21k、n21s、n21v、n21i、n21l、n21m、n21t、m22a、m22v、m22i、m22l、m22n、m22q、r24e、r24d、r24n、r24q、r24a、r24s、r24t、d25a、d25n、d25h、d25i、d25k、d25l、d25v、d28a、d28e、d28l、d28v、d28s、d28t、d28i、d28v、d28m、d28h、d28k、d28r、r32a、r32d、r32e、r32l、r32v、r32s、r32t、r32i、r32v、r32m、r32h、e74a、e74d、e74l、e74v、e74s、e74t、e74i、e74v、e74m、e74h、e74k、e74r、h90a、h90d、h90e、h90i、h90k、h90l、h90m、h90n、h90q、h90r、h90s、h90t、h90y、h90v、n92d、n92q、n92e、n92h、n92k、n92s、n92v、n92i、n92l、n92m、n92t、n92a、s93e、s93a、s93r、s93n、s93d、s93q、s93e、s93i、s93l、s93k、s93m、s93v、e96a、e96n、e96d、e96q、e96h、e96k、e96s、t100d、t100v、t100e、t100a、t100r、t100n、t100q、t100e、t100i、t100l、t100k、t100m、t100s、r104a、r104w、r104y、r104f、r104h、r104d、r104e、r104n、r104q、r104s、r104t、r104i、r104l、r104v和r104m。

16、在一些实施方式中，本公开提供了hil10单体变体，其包含选自以下组的根据seqid no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c，任选地进一步包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个其他的氨基酸取代：h14a、h14d、h14e、h14i、h14k、h14l、h14m、h14n、h14q、h14r、h14s、h14t、h14y、h14v、n18y、n18f、n18a、n18d、n18e、n18l、n18v、n18s、n18t、n18i、n18v、n18m、n18h、n21a、n21r、n21q、n21h、n21k、n21s、n21v、n21i、n21l、n21m、n21t、m22a、m22v、m22i、m22l、m22n、m22q、r24e、r24d、r24n、r24q、r24a、r24s、r24t、d25a、d25n、d25h、d25i、d25k、d25l、d25v、d28a、d28e、d28l、d28v、d28s、d28t、d28i、d28v、d28m、d28h、d28k、d28r、r32a、r32d、r32e、r32l、r32v、r32s、r32t、r32i、r32v、r32m、r32h、e74a、e74d、e74l、e74v、e74s、e74t、e74i、e74v、e74m、e74h、e74k、e74r、h90a、h90d、h90e、h90i、h90k、h90l、h90m、h90n、h90q、h90r、h90s、h90t、h90y、h90v、n92d、n92q、n92e、n92h、n92k、n92s、n92v、n92i、n92l、n92m、n92t、n92a、s93e、s93a、s93r、s93n、s93d、s93q、s93e、s93i、s93l、s93k、s93m、s93v、e96a、e96n、e96d、e96q、e96h、e96k、e96s、t100d、t100v、t100e、t100a、t100r、t100n、t100q、t100e、t100i、t100l、t100k、t100m、t100s、r104a、r104w、r104y、r104f、r104h、r104d、r104e、r104n、r104q、r104s、r104t、r104i、r104l、r104v和r104m，其中hil10单体变体的氨基酸序列与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)。

17、在一些实施方式中，本公开提供包含至少一种hil10单体变体的同二聚体或异二聚体hil10突变蛋白，所述hil10单体变体与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，并且所述hil10单体变体在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代。在一些实施方式中，本公开提供包含至少一种hil10单体变体的同二聚体或异二聚体hil10突变蛋白，所述hil10单体变体在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代，其中所述hil10单体变体的氨基酸序列与seqid no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)。在一些实施方式中，本公开提供了包含至少一种hil10单体变体的同二聚体或异二聚体hil10突变蛋白，所述hil10单体变体在选自以下组的seq id no:1的氨基酸残基处包含一个或多个氨基取代：h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100。

18、在一些实施方式中，本公开提供了包含至少一种hil10单体变体的同二聚体或异二聚体hil10突变蛋白，所述hil10单体变体与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，并且所述hil10单体变体包含选自以下组的根据seqid no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c，任选地进一步包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个其他的氨基酸取代：h14a、h14d、h14e、h14i、h14k、h14l、h14m、h14n、h14q、h14r、h14s、h14t、h14y、h14v、n18y、n18f、n18a、n18d、n18e、n18l、n18v、n18s、n18t、n18i、n18v、n18m、n18h、n21a、n21r、n21q、n21h、n21k、n21s、n21v、n21i、n21l、n21m、n21t、m22a、m22v、m22i、m22l、m22n、m22q、r24e、r24d、r24n、r24q、r24a、r24s、r24t、d25a、d25n、d25h、d25i、d25k、d25l、d25v、d28a、d28e、d28l、d28v、d28s、d28t、d28i、d28v、d28m、d28h、d28k、d28r、r32a、r32d、r32e、r32l、r32v、r32s、r32t、r32i、r32v、r32m、r32h、e74a、e74d、e74l、e74v、e74s、e74t、e74i、e74v、e74m、e74h、e74k、e74r、h90a、h90d、h90e、h90i、h90k、h90l、h90m、h90n、h90q、h90r、h90s、h90t、h90y、h90v、n92d、n92q、n92e、n92h、n92k、n92s、n92v、n92i、n92l、n92m、n92t、n92a、s93e、s93a、s93r、s93n、s93d、s93q、s93e、s93i、s93l、s93k、s93m、s93v、e96a、e96n、e96d、e96q、e96h、e96k、e96s、t100d、t100v、t100e、t100a、t100r、t100n、t100q、t100e、t100i、t100l、t100k、t100m、t100s、r104a、r104w、r104y、r104f、r104h、r104d、r104e、r104n、r104q、r104s、r104t、r104i、r104l、r104v、和r104m。

19、在一些实施方式中，本公开提供包含至少一种hil10单体变体的同二聚体或异二聚体hil10突变蛋白，所述hil10单体变体包含选自下组的根据seq id no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c，任选地进一步包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个其他氨基酸取代：h14a、h14d、h14e、h14i、h14k、h14l、h14m、h14n、h14q、h14r、h14s、h14t、h14y、h14v、n18y、n18f、n18a、n18d、n18e、n18l、n18v、n18s、n18t、n18i、n18v、n18m、n18h、n21a、n21r、n21q、n21h、n21k、n21s、n21v、n21i、n21l、n21m、n21t、m22a、m22v、m22i、m22l、m22n、m22q、r24e、r24d、r24n、r24q、r24a、r24s、r24t、d25a、d25n、d25h、d25i、d25k、d25l、d25v、d28a、d28e、d28l、d28v、d28s、d28t、d28i、d28v、d28m、d28h、d28k、d28r、r32a、r32d、r32e、r32l、r32v、r32s、r32t、r32i、r32v、r32m、r32h、e74a、e74d、e74l、e74v、e74s、e74t、e74i、e74v、e74m、e74h、e74k、e74r、h90a、h90d、h90e、h90i、h90k、h90l、h90m、h90n、h90q、h90r、h90s、h90t、h90y、h90v、n92d、n92q、n92e、n92h、n92k、n92s、n92v、n92i、n92l、n92m、n92t、n92a、s93e、s93a、s93r、s93n、s93d、s93q、s93e、s93i、s93l、s93k、s93m、s93v、e96a、e96n、e96d、e96q、e96h、e96k、e96s、t100d、t100v、t100e、t100a、t100r、t100n、t100q、t100e、t100i、t100l、t100k、t100m、t100s、r104a、r104w、r104y、r104f、r104h、r104d、r104e、r104n、r104q、r104s、r104t、r104i、r104l、r104v和r104m，其中所述hil10单体变体的氨基酸序列与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)。

20、在一些实施方式中，hil10突变蛋白以包含各自具有相同氨基酸序列的两个hil10变体多肽单体的同二聚体形式提供。在其他实施方式中，本公开提供异二聚体hil10突变蛋白，其中包含hil10突变蛋白的hil10单体具有不同的氨基酸序列。在一个方面，本公开提供包含以下的异二聚体hil10突变蛋白：(a)hil10变体多肽单体，其与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，并且其在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代；以及(b)野生型hil10单体。在一个方面，本公开提供包含以下的异二聚体hil10突变蛋白：(a)hil10变体多肽单体，其在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代，其中所述hil10变体多肽单体的氨基酸序列与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)；以及(b)野生型hil10单体。在一个实施方式中，本公开提供包含以下的异二聚体hil10突变蛋白：(a)hil10变体多肽单体，其在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代；以及(b)野生型hil10单体。

21、在另一个方面，本公开提供包含以下的异二聚体hil10突变蛋白：(a)第一hil10变体多肽单体，其与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)并且在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、r32、h90、n92、s93、e96、k99和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代；以及(b)第二hil10变体多肽单体，其与seq idno:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，并且在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、r32、h90、n92、s93、e96、k99和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代；其中所述第一hil10变体多肽单体和第二hil10变体多肽单体是相同的(即，第一和第二hil10变体多肽单体均具有相同的氨基酸序列)。在一个方面，本公开提供了包含以下的异二聚体hil10突变蛋白：(a)第一hil10变体多肽单体，其在对应于seq idno:1的残基h14、n18、n21、m22、r32、h90、n92、s93、e96、k99和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代，其中所述hil10变体多肽单体的氨基酸序列与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性；以及(b)第二hil10变体多肽单体，其在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、r32、h90、n92、s93、e96、k99和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代，其中所述hil10变体多肽单体的氨基酸序列与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)；其中所述第一hil10变体多肽单体和第二hil10变体多肽单体相同(即，第一和第二hil10变体多肽单体均具有相同的氨基酸序列)。

22、在另一个方面，本公开提供包含以下的异二聚体hil10突变蛋白：(a)第一hil10变体多肽单体，其与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)并且在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、r32、h90、n92、s93、e96、k99和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代；以及(b)第二hil10变体多肽单体，其与seq idno:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，并且在对应于seqid no:1的残基h14、n18、n21、m22、r32、h90、n92、s93、e96、k99和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代；其中所述第一hil10变体多肽单体和第二hil10变体多肽单体不同(即，第一和第二hil10变体多肽单体具有不同的氨基酸序列)。在一个方面，本公开提供了包含以下的异二聚体hil10突变蛋白：(a)第一hil10变体多肽单体，其在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、r32、h90、n92、s93、e96、k99和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代，其中所述hil10变体多肽单体的氨基酸序列与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性；以及(b)第二hil10变体多肽单体，其在对应于seq idno:1的残基h14、n18、n21、m22、r32、h90、n92、s93、e96、k99和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代，其中所述hil10变体多肽单体的氨基酸序列与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)；其中所述第一hil10变体多肽单体和第二hil10变体多肽单体不同(即，第一和第二hil10变体多肽单体具有不同的氨基酸序列)。

23、在一些实施方式中，本公开提供hil10单体变体，其与包含自seq id no:1的氨基末端缺失1至10个连续氨基酸(例如，缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸)的序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)。在一些实施方式中，本公开提供了hil10单体变体，其与包含自seq id no:1氨基末端处的氨基酸序列spgqgtqsen中缺失1至10个连续氨基酸(例如，缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸)(例如，自seq id no:1的氨基末端缺失s、sp、spg、spgq、spgqg、spgqgt、spgqgtq、spgqgtqs、spgqgtqse或spgqgtqsen)的序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)。

24、在一些实施方式中，本文所述的hil10单体变体与包含自seq id no:1的氨基末端缺失1至10个连续氨基酸(例如，缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸)的氨基末端缺失的序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，所述hil10单体变体在对应于seqid no:1的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代。在一些实施方式中，本文所述的hil10单体变体与包含自seq id no:1的氨基末端缺失1至10个连续氨基酸(例如，缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸)的氨基末端缺失的序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，所述hil10单体变体包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c。在一些实施方式中，本文所述的hil10单体变体与包含自seq id no:1的氨基末端缺失1至10个连续氨基酸(例如，缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)的氨基末端缺失的序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，所述hil10单体变体进一步包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14a、h14d、h14e、h14i、h14k、h14l、h14m、h14n、h14q、h14r、h14s、h14t、h14y、h14v、n18y、n18f、n18a、n18d、n18e、n18l、n18v、n18s、n18t、n18i、n18v、n18m、n18h、n21a、n21r、n21q、n21h、n21k、n21s、n21v、n21i、n21l、n21m、n21t、m22a、m22v、m22i、m22l、m22n、m22q、r24e、r24d、r24n、r24q、r24a、r24s、r24t、d25a、d25n、d25h、d25i、d25k、d25l、d25v、d28a、d28e、d28l、d28v、d28s、d28t、d28i、d28v、d28m、d28h、d28k、d28r、r32a、r32d、r32e、r32l、r32v、r32s、r32t、r32i、r32v、r32m、r32h、e74a、e74d、e74l、e74v、e74s、e74t、e74i、e74v、e74m、e74h、e74k、e74r、h90a、h90d、h90e、h90i、h90k、h90l、h90m、h90n、h90q、h90r、h90s、h90t、h90y、h90v、n92d、n92q、n92e、n92h、n92k、n92s、n92v、n92i、n92l、n92m、n92t、n92a、s93e、s93a、s93r、s93n、s93d、s93q、s93e、s93i、s93l、s93k、s93m、s93v、e96a、e96n、e96d、e96q、e96h、e96k、e96s、t100d、t100v、t100e、t100a、t100r、t100n、t100q、t100e、t100i、t100l、t100k、t100m、t100s、r104a、r104w、r104y、r104f、r104h、r104d、r104e、r104n、r104q、r104s、r104t、r104i、r104l、r104v和r104m。

25、在一些实施方式中，本公开提供包含至少一种hil10单体变体的同二聚体或异二聚体hil10突变蛋白，所述hil10单体变体与包含自seq id no:1的氨基末端缺失1至10个连续氨基酸(例如，缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸)的序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)。在一些实施方式中，本公开提供包含至少一种hil10单体变体的同二聚体或异二聚体hil10突变蛋白，所述hil10单体变体与包含在seq id no:1氨基末端处的氨基酸序列spgqgtqsen中缺失1至10个连续氨基酸(例如，缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸)的序列(例如，自seq id no:1的氨基末端缺失s、sp、spg、spgq、spgqg、spgqgt、spgqgtq、spgqgtqs、spgqgtqse或spgqgtqsen)具有至少70％序列同一性(例如，与seq id no:1具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)。

26、在一些实施方式中，本文所述的包含至少一种hil10单体变体的同二聚体或异二聚体hil10突变蛋白，其中所述hil10单体变体与包含自seq id no:1的氨基末端缺失1至10个连续氨基酸(例如，缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个连续氨基酸，或缺失s、sp、spg、spgq、spgqg、spgqgt、spgqgtq、spgqgtqs、spgqgtqse或spgqgtqsen)的序列具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，其包含：(i)在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处的一个或多个氨基酸取代；(ii)选自以下组的根据seq idno:1编号的一个或多个氨基酸取代：h14c、h14f、h14p、h14w、h14g、n18r、n18k、n21c、n21d、n21e、m22d、m22s、m22t、m22w、d25p、d25q、r32n、r32q、r32g、r32c、r32p、r32f、r32y、s93g、e96c、e96f、e96y、e96w和t100c；或(iii)进一步包含选自以下组的根据seq id no:1编号的一个或多个其他氨基酸取代：h14a、h14d、h14e、h14i、h14k、h14l、h14m、h14n、h14q、h14r、h14s、h14t、h14y、h14v、n18y、n18f、n18a、n18d、n18e、n18l、n18v、n18s、n18t、n18i、n18v、n18m、n18h、n21a、n21r、n21q、n21h、n21k、n21s、n21v、n21i、n21l、n21m、n21t、m22a、m22v、m22i、m22l、m22n、m22q、r24e、r24d、r24n、r24q、r24a、r24s、r24t、d25a、d25n、d25h、d25i、d25k、d25l、d25v、d28a、d28e、d28l、d28v、d28s、d28t、d28i、d28v、d28m、d28h、d28k、d28r、r32a、r32d、r32e、r32l、r32v、r32s、r32t、r32i、r32v、r32m、r32h、e74a、e74d、e74l、e74v、e74s、e74t、e74i、e74v、e74m、e74h、e74k、e74r、h90a、h90d、h90e、h90i、h90k、h90l、h90m、h90n、h90q、h90r、h90s、h90t、h90y、h90v、n92d、n92q、n92e、n92h、n92k、n92s、n92v、n92i、n92l、n92m、n92t、n92a、s93e、s93a、s93r、s93n、s93d、s93q、s93e、s93i、s93l、s93k、s93m、s93v、e96a、e96n、e96d、e96q、e96h、e96k、e96s、t100d、t100v、t100e、t100a、t100r、t100n、t100q、t100e、t100i、t100l、t100k、t100m、t100s、r104a、r104w、r104y、r104f、r104h、r104d、r104e、r104n、r104q、r104s、r104t、r104i、r104l、r104v和r104m。

27、在一些实施方式中，相对于具有较低hil10rβ受体亚基表面表达的细胞，本公开的hil10突变蛋白在具有较高hil10rβ亚基表面表达的细胞(例如，骨髓来源的细胞)上提供更高的活性。表征为具有hil10rβ亚基的高表面表达的细胞类型包括骨髓来源的细胞。表征为具有hil10r2受体亚基低表面表达的细胞类型包括淋巴细胞(例如cd8+t细胞、cd4+t细胞、b细胞或nk细胞)。

28、在一些实施方式中，本公开提供在哺乳动物对象体内表现出延长的作用时间的hil10突变蛋白，及其药学上可接受的制剂。在一些实施方式中，此类在体内具有延长的作用时间的hil10突变蛋白通过将同二聚或异二聚hil10突变蛋白的hil10多肽单体之一或二者都偶联至一种或多种运载体分子来实现。在一些实施方式中，运载体分子是蛋白质运载体分子(例如人血清白蛋白)，其可以作为与一种或两种hil10多肽单体的融合蛋白提供，任选地包含hil10单体和人血清白蛋白序列之间的多肽接头序列。

29、在一些实施方式中，当hil10变体作为fc融合蛋白提供时，所述hil10变体包含：(a)含有第一hil10多肽单体和第一fc单体的融合蛋白，任选地包含在第一il10单体序列和第一fc单体序列之间的第一接头分子，和(b)含有第二hil10多肽单体和第二fc单体的融合蛋白，任选地包含第二il10单体序列和第二fc单体序列之间的第二接头分子，其中一个或多个hil10多肽单体是hil10单体变体，其包含对应于选自以下组的seq id no:1的氨基酸残基的一个或多个氨基取代：h14、n18、n21、m22、r32、h90、n92、s93、e96、k99和t100。在一些实施方式中，修饰第一和第二fc单体以促进异二聚化(例如，“杵臼”)，这在包含hil10变体的第一和第二hil10单体不同(例如异二聚体hil10/fc突变蛋白)时尤其有用，以维持不同hil10单体的1:1比率。在一些实施方式中，修饰fc单体以降低效应子功能、消除糖基化位点、延长作用持续时间、消除未配对的半胱氨酸残基及其组合。

30、在一些实施方式中，此类在体内具有延长的作用时间的hil10突变蛋白通过将hil10变体的hil10多肽单体之一或二者都偶联至水溶性聚合物运载体来实现。在一些实施方式中，水溶性聚合物运载体是聚乙二醇(peg)。在一些实施方式中，peg是具有以下分子量的直链或支化peg分子：约2,000至约80,000道尔顿、约5,000道尔顿至约80,000道尔顿或约2,000至约70,000道尔顿或约5,000至约50,000道尔顿或约10,000至约50,000道尔顿或约20,000至约50,000道尔顿或约30,000至约50,000道尔顿或约20,000至约40,000道尔顿或约30,000至约40,000道尔顿。在本公开的一个实施方式中，peg为包含两个20kd臂的40kd支化peg。在一些实施方式中，peg偶联至hil10突变蛋白的n末端。在一些实施方式中，peg偶联至hil10突变蛋白的一个或两个hil10单体多肽的n末端。在一些实施方式中，运载体分子经由接头偶联至hil10突变蛋白。在一些实施方式中，运载体分子经由接头偶联至hil10突变蛋白的一个或两个hil10单体。在一些实施方式中，本公开提供了包含“单peg化/单聚乙二醇化的”hil10突变蛋白(即，hil10突变蛋白，其中hil10突变蛋白中仅一个hil10单体被聚乙二醇化)和“二peg化/二聚乙二醇化的”hil10突变蛋白(即，hil10突变蛋白，其中hil10突变蛋白的两个hil10单体均被聚乙二醇化)的混合物的组合物。在一些实施方式中，这种组合物中单聚乙二醇化hil10突变蛋白和二聚乙二醇化hil10突变蛋白种类的比率为约1:1。在一些实施方式中，本公开提供了hil10突变蛋白组合物，其包含非聚乙二醇化hil10突变蛋白、单聚乙二醇化hil10突变蛋白和二聚乙二醇化hil10突变蛋白的混合物以及一种或多种药学上可接受的运载体。

31、在另一个方面，本公开提供了核酸分子，其包含编码本文公开的hil10单体变体或突变蛋白的核酸序列。在一些实施方式中，核酸序列进一步编码信号肽。在一些实施方式中，核酸序列进一步编码肽接头。在一些实施方式中，核酸序列操作性地连接至一个或多个异源核酸序列。在一些实施方式中，异源核酸序列是表达控制序列。在一些实施方式中，表达控制序列在哺乳动物细胞中具有功能。

32、在另一个方面，本公开提供了载体，其包含编码本文公开的hil10单体变体或突变蛋白的核酸序列。在一些实施方式中，载体是表达载体。在一些实施方式中，载体是病毒载体。在一些实施方式中，载体是非病毒载体。

33、在另一个方面，本公开提供了包含本公开的核酸分子或载体的经重组修饰的细胞。

34、在另一个方面，本公开提供了一种细胞培养物，其包含至少一种本公开的重组修饰细胞和培养基。

35、本公开进一步提供了本文所述的hil10突变蛋白的重组生产、分离、纯化和表征的方法。因此，在另一个方面，本公开提供了用于产生本公开的hil10突变蛋白的方法。在一些实施方式中，该方法包括a)提供一种或多种重组修饰的细胞，其包含核酸分子或载体，所述核酸分子或载体包含编码本文所述hil10突变蛋白的核酸序列；以及b)在培养基中培养所述一种或多种细胞，使得细胞产生由所述核酸序列编码的hil10突变蛋白。在一些实施方式中，该方法进一步包括步骤(c)分离和/或纯化hil10突变蛋白。

36、在另一个方面，本公开提供了通过上述方法产生的hil10突变蛋白。

37、在另一个方面，本公开提供了药物组合物。在一些实施方式中，药物组合物包含本公开的hil10突变蛋白单体或二聚体。在一些实施方式中，药物组合物包含药学上可接受的运载体。

38、在一些实施方式中，本公开提供了包含“单聚乙二醇化”hil10突变蛋白(即，hil10突变蛋白，其中hil10突变蛋白中仅一个hil10单体被聚乙二醇化)和“二聚乙二醇化”hil10突变蛋白(即，hil10突变蛋白，其中hil10突变蛋白的两个hil10单体均被聚乙二醇化)的混合物和一种或多种药学上可接受的运载体的药物组合物。在一些实施方式中，这种药物制剂中单聚乙二醇化hil10突变蛋白和二聚乙二醇化hil10突变蛋白种类的比率为约1:1。在一些实施方式中，本公开提供了药物制剂，其包含非聚乙二醇化hil10突变蛋白、单聚乙二醇化hil10突变蛋白和二聚乙二醇化hil10突变蛋白的混合物以及一种或多种药学上可接受的运载体。在一些实施方式中，药物组合物包含本公开的核酸分子或载体。在一些实施方式中，药物组合物包含本公开的经重组修饰的细胞。在一些实施方式中，所述经重组修饰的细胞是哺乳动物细胞。

39、在另一个方面，本公开提供了一种用于调节对象中il10介导的信号传导的方法，该方法包括向对象给予有效量的本文所述的药物组合物。在一些实施方式中，il10介导的信号传导包括stat3介导的信号传导。在一些实施方式中，stat3介导的信号传导通过选自以下组的试验测定：基因表达试验、磷酸流信号传导试验和酶联免疫吸附试验(elisa)。在一些实施方式中，与参考水平相比，对象中stat3介导的信号传导减少约20％至约100％。在一些实施方式中,所给予的组合物导致诱导对象中选自ifn-γ、颗粒酶b、颗粒酶a、穿孔素、tnf-α、gm-csf和mip1α的促炎基因表达的能力降低。

40、本公开的hil10变体可用于治疗或预防哺乳动物对象的疾病。因此，在另一个方面，本公开提供了用于治疗有其需要的对象的健康状况的方法，该方法包括向对象给予治疗有效量的组合物，该组合物包含：本文所述的hil10变体或hil10突变蛋白；核酸分子或载体，其包含编码本文所述的hil10变体或hil10突变蛋白的核酸序列；包含本文所述的核酸分子或载体的重组修饰的细胞；或本文所述的药物组合物。在另一个方面，本公开提供了一种在有其需要的对象中治疗自体免疫或炎性疾病、病症或病况或病毒感染的方法，所述方法包括向对象给予治疗有效量的本文所述的hil10变体hil10突变蛋白或本文所述的药物组合物。

41、在一些实施方式中，本公开通过给予治疗有效量的本公开的hil10突变蛋白来提供治疗或预防哺乳动物对象的自体免疫病。在一些实施方式中，本公开通过给予治疗有效量的本公开的hil10突变蛋白来为哺乳动物对象的传染性疾病(包括病毒和慢性病毒感染)提供治疗或预防。在一些实施方式中，本公开通过给予治疗有效量的本公开的hil10突变蛋白来为哺乳动物对象的肿瘤疾病提供治疗或预防。在一些实施方式中，本公开通过组合给予治疗有效量的本公开的hil10突变蛋白和一种或多种补充治疗剂来治疗或预防哺乳动物对象的肿瘤、传染性疾病或自体免疫病。在一些实施方式中，给予哺乳动物对象的hil10突变蛋白是单体或二聚体。

42、在另一个方面，本公开提供一种试剂盒，其用于在对象中调节il10介导的信号传导或治疗有其需要的对象的健康状况。在一些实施方式中，所述试剂盒包含本文所述的hil10变体或hil10突变蛋白；核酸分子或载体，其包含编码本文所述的hil10变体或hil10突变蛋白的核酸序列；包含本文所述的核酸分子或载体的重组修饰的细胞；或本文所述的药物组合物。

43、在一些实施方式中，本文所述的hil10突变蛋白是il10受体的部分激动剂。

技术特征：

1.一种hil10单体变体，其与seq id no:1具有至少70％序列同一性(例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)，并且在对应于seq id no:1的残基h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100的位置处包含一个或多个氨基酸取代。

2.根据权利要求1所述的hil10单体变体，其在对应于选自以下组的seq id no:1的氨基酸残基的位置处包含一个或多个氨基取代：h14、n18、n21、m22、d25、r32、s93、e96和t100，其中

3.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其进一步包含选自以下组的一个或多个氨基取代：

4.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的n18的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：y、f、a、d、e、l、v、s、t、i、v、m和h。

5.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的n21的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：a、r、q、h、k、s、v、i、l、m和t。

6.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的m22的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：a、v、i、l、n和q。

7.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的r24的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：e、d、n、q、a、s和t。

8.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的d25的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：a、n、h、i、k、l和v。

9.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的d28的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：a、e、l、v、s、t、i、v、m、h、k和r。

10.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的r32的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：a、d、e、l、v、s、t、i、v、m和h。

11.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的e74的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：a、d、l、v、s、t、i、v、m、h、k和r。

12.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的h90的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：a、d、e、i、k、l、m、n、q、r、s、t、y和v。

13.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的n92的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：d、q、e、h、k、s、v、i、l、m、t和a。

14.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的s93的位置处进一步包含选自以下组的氨基取代：e、a、r、n、d、q、e、i、l、k、m和v。

15.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的e96的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：a、n、d、q、h、k和s。

16.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的t100的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：d、v、e、a、r、n、q、e、i、l、k、m和s。

17.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其在对应于seq id no:1的r104的位置处进一步包含选自以下组的氨基酸取代：a、w、y、f、h、d、e、n、q、s、t、i、l、v和m。

18.根据权利要求2所述的hil10单体变体，其中il10多肽进一步包含选自以下组的氨基酸取代：h14a、h14d、h14e、h14i、h14k、h14l、h14m、h14n、h14q、h14r、h14s、h14t、h14y和h14v。

19.一种hil10突变蛋白，其包含如权利要求1-18中任一项所述的hil10单体变体，以及野生型hil10单体。

20.一种hil10突变蛋白，其包含如权利要求1-18中任一项所述的第一hil10单体变体和如权利要求1-18中任一项所述的第二hil10单体变体。

21.根据权利要求20所述的hil10突变蛋白，其中所述第一hil10单体变体和所述第二hil10单体具有相同的氨基酸序列。

22.根据权利要求20所述的hil10突变蛋白，其中所述第一hil10单体变体和所述第二hil10单体具有不同的氨基酸序列。

23.一种hil10突变蛋白，其包含如权利要求1-18中任一项所述的hil10单体变体，其中所述hil10突变蛋白具有：(i)骨髓细胞中的pstat3 e最大值大于骨髓细胞中il10的pstat3e最大值的20％；和(b)淋巴细胞中的pstat3 e最大值小于淋巴细胞中il10的pstat3 e最大值的70％但大于20％。

24.根据权利要求23所述的hil10突变蛋白，其中所述淋巴细胞是cd8+t细胞、cd4+t细胞、b细胞或nk细胞。

25.根据权利要求23所述的hil10突变蛋白，其中所述骨髓细胞是嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞或单核细胞。

26.根据权利要求23所述的hil10突变蛋白，其中所述单核细胞是树突细胞或巨噬细胞。

27.根据权利要求23所述的hil10突变蛋白，其中所述巨噬细胞是库普弗细胞。

28.根据权利要求19-22中任一项所述的hil10突变蛋白，其包含偶联至一个或多个运载体分子的如权利要求1-18中任一项所述的hil10单体变体。

29.根据权利要求28所述的hil10突变蛋白，其中所述运载体分子选自蛋白质运载体分子、fc多肽和白蛋白多肽。

30.根据权利要求28所述的hil10突变蛋白，其中所述运载体分子是水溶性聚合物运载体。

31.根据权利要求30所述的hil10突变蛋白，其中所述水溶性聚合物运载体是聚乙二醇(peg)。

32.根据权利要求31所述的hil10突变蛋白，其中所述peg是直链或支化peg分子，其具有约5kda至约80kda的分子量。

33.根据权利要求31所述的hil10突变蛋白，其中所述peg偶联至所述il10多肽的n末端。

34.根据权利要求28-33中任一项所述的hil10突变蛋白，其中所述运载体分子通过接头偶联至少一种hil10单体多肽。

35.一种核酸分子，其包含编码如权利要求1-18中任一项所述的hil10单体变体的核酸序列。

36.根据权利要求35所述的核酸分子，其中所述核酸分子进一步编码信号肽。

37.根据权利要求35或36所述的核酸分子，其中所述核酸分子进一步编码接头。

38.根据权利要求35-37所述的核酸分子，其中所述核酸序列操作性地连接至异源核酸序列。

39.根据权利要求38所述的核酸分子，其中所述异源核酸序列是表达控制序列。

40.一种表达载体，其包含如权利要求35-39中任一项所述的核酸分子。

41.一种经重组修饰的细胞，其包含如权利要求35-39中任一项所述的核酸分子。

42.根据权利要求41所述的细胞，其中所述细胞是原核细胞。

43.根据权利要求41所述的细胞，其中所述原核细胞是细菌细胞。

44.根据权利要求41所述的细胞，其中所述细胞是真核细胞。

45.根据权利要求41所述的细胞，其中所述真核细胞是哺乳动物细胞。

46.一种细胞培养物，其包含如权利要求41-45中任一项所述的至少一种细胞，以及培养基。

47.一种产生如权利要求19-23中任一项所述的hil10突变蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

48.根据权利要求47所述的方法，其中所述方法进一步包括以下步骤：

49.一种hil10突变蛋白，其通过如权利要求47-48中任一项所述的方法产生。

50.一种药物组合物，其包含药学上可接受的运载体和：

51.一种用于调节对象中的il10介导的信号传导的方法，所述方法包括向所述对象给予如权利要求50所述的有效量的药物组合物。

52.根据权利要求51所述的方法，其中所述il10介导的信号传导包括stat3介导的信号传导。

53.根据权利要求52所述的方法，其中所述stat3介导的信号传导通过选自下组的试验测定：基因表达试验、磷酸流信号传导试验和酶联免疫吸附试验(elisa)。

54.根据权利要求51-53中任一项所述的方法，其中对象中所述stat3介导的信号传导与参考水平相比降低约20％至约100％。

55.根据权利要求51-54中任一项所述的方法，其中所给予的组合物导致诱导对象中选自ifn-γ、颗粒酶b、颗粒酶a、穿孔素、tnf-α、gm-csf和mip1α的促炎基因表达的能力降低。

56.一种用于治疗有需要的对象的健康状况的方法，所述方法包括向所述对象给予组合物，所述组合物包含：

57.一种试剂盒，其用于在对象中调节il10介导的信号传导或治疗有其需要的对象的健康状况，所述试剂盒包含：

技术总结
本公开总体上涉及用于调节由白介素‑10(IL10)介导的信号转导的组合物和方法。具体地，本公开提供了对白介素‑10受体亚基β(IL10Rβ)具有改变的结合亲和力的IL10多肽变体。还提供了可用于产生此类IL10多肽变体的组合物和方法，以及用于调节IL10介导的信号传导和/或用于治疗与IL10介导的信号转导扰动相关的病况的方法。

技术研发人员：M·王,S·麦克考雷,A·莫林
受保护的技术使用者：辛德凯因股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23