一株促进植物生长的固氮内生菌骆驼刺泛菌HHNXJC4G-3及其应用的制作方法
本发明属于农业微生物领域，具体涉及一株促进植物生长的固氮内生菌骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3及其应用。
背景技术：
1、我国以全球耕地面积的7%养活了世界19%的人口，由于人地矛盾问题突出导致我国农业种植一味追求高亩产、连续耕作，这样需要大量使用化肥实现增产。据世界粮农统计，在全球氮肥中用量中，中国氮肥用量占30%，但氮肥的利用率平均只有28%-41%，明显低于世界水平。氮肥损失进入环境会引起一些系列的环境问题，例如土壤板结、土壤污染等，不仅造成资源浪费，而且严重影响农业的可持续发展以及人类健康。因此，减少化肥施用，提高氮肥利用率是当前农业生产的重要任务。
2、内生固氮菌是指那些定殖在植物内部与宿主植物联合固氮的微生物，主要是细菌，它们的部分或整个生活周期寄居在植物组织特别是营养繁殖的组织中生存、繁衍、传播而不会对植物引起明显的损害。植物内生固氮菌是一个不同于共生固氮和联合固氮的高效固氮体系，其主要生活在非豆科植物体内，避免了化合态氮的抑制剂土著微生物的竞争，具有更高的固氮效率。利用生物固氮是目前减少氮肥施用量最为有效的途径。
3、磷是植物体内合成核酸和磷脂等生命大分子物质必不可少的元素，土壤中90%以上的磷以无机盐的形式存在，植物难以直接吸收利用。生长素(indole-3-acetic acid，iaa)在植物的形态建成，器官发生和多种生理过程中都发挥着很重要的作用，尤其对植物的生长发育有着至关重要的作用。
4、因此，筛选具有生物固氮、解磷、产iaa的微生物对开发促生防病微生物菌剂具有非常重要的作用。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一株具有固氮能力且能分泌植物生长素，具有酸性磷酸酶活性、萘酚-as-bi-磷酸水解酶活性、β-半乳糖甙酶活性，在盐渍化、干旱的环境中耐受力强，能将土壤中难以被植物吸收利用的无机磷转化为有机磷且促进植物生长的骆驼刺泛菌hhnxjc4g-3，并开发出促生防病的微生物菌剂。
2、为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：
3、一株骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3，其特征在于：所述骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其分类命名为骆驼刺泛菌hhnxjc4g-3（骆驼刺泛菌hhnxjc4g-3），保藏编号为gdmcc no：62760，其16srdna 基因序列如seq id no.1所示；所述骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3制成促生防病型微生物菌剂。
4、本发明提供的骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3从新疆昌吉州采集植物样本分离获得，其步骤如下：取其茎部约1g，在超净工作台上先用75％酒精浸1min，用2％次氯酸钠溶液浸泡5min，75％酒精浸30s，无菌水洗2次。置于无菌的研钵中研碎后加入4ml静置5min，取上清液用无菌水做10倍系列稀释，分别取原液和稀释液100μl涂布在ashby（阿须贝氏）无氮培养基(成分为蔗糖10g，nacl 0.2g，kh2po 0.2g，mgso4·7h2o 0.2g，caso4·2h2o 0.1g，caco3 5g，蒸馏水1000ml，ph 7.0)平板上，在30℃培养2-3d 至长出单菌落，菌落长出后，在ashby无氮培养基平板上用划线法进行菌种纯化5次后得到一株固氮内生菌，编号为：hhxjcj4g-3。将菌株hhxjcj4g-3送至上海生工生物测序鉴定部进行测序鉴定，测序结果在核糖体数据库上比对分析。16srdna序列分析结果表明本发明菌株与泛菌属的骆驼刺泛菌的同源性高达99.8%，即该菌株为骆驼刺泛菌。
5、优选的是，所述骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3制成促生防病型微生物菌剂，包括以下组分：骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3 、哈茨木霉、褐藻寡糖、5-氨基乙酰丙酸。
6、优选的是，所述骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3具有酸性磷酸酶活性、萘酚-as-bi-磷酸水解酶活性、β-半乳糖甙酶的酶活性。
7、优选的是，所述骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3在盐渍化、干旱的环境中耐受力强。
8、优选的是，所述含骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3的促生防病型微生物菌剂具体浓度为2×109-10×1010cfu/ml。
9、与选有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明从新疆昌吉州采集的骆驼刺植物中筛选得到的骆驼刺泛菌hhnxjc4g-3具有固氮能力且能分泌植物生长素，具有酸性磷酸酶活性、萘酚-as-bi-磷酸水解酶活性、β-半乳糖甙酶活性，能促进植物中磷酸盐的溶解以及土壤中有机磷转化为植物可吸收的无机磷，通过增加可溶性磷酸盐的含量来提高植物生长素（iaa）的分泌量，显著促进植物的生长，该菌株能提高植物在盐渍化、干旱的环境中的耐受力，作物施用该菌株制备的促生防病微生物菌剂后，有效提高了作物的抗逆性能，作物更加健康，叶面更加嫩绿。
10、【生物保藏信息】
11、骆驼刺泛菌hhnxjc4g-3（pantoea alhagi hhnxjc4g-3 ），于2022年09月02日保藏在广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为gdmcc no：62760。
技术特征：
1.一株骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3，其特征在于：所述骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其分类命名为骆驼刺泛菌hhnxjc4g-3（pantoea alhagi hhnxjc4g-3），保藏编号为gdmcc no：62760，其16srdna 基因序列如seq id no.1所示；
2.如权利要求1所述的骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3，其特征在于，所述菌株具有酸性磷酸水解酶活性、萘酚-as-bi-磷酸水解酶活性、β-半乳糖甙酶的酶活性。
3.根据权利要求2所述骆驼刺泛菌 hhnxjc4g-3的应用，其特征在于：所述促生防病型微生物菌剂具体浓度为2×109-10×1010cfu/ml。
技术总结
本发明属于农业微生物领域，具体涉及一株促进植物生长的固氮内生菌骆驼刺泛菌HHNXJC4G‑3及其应用，从新疆昌吉州采集植物样本，通过对分离纯化后的菌株进行固氮能力测定和对水稻的促生长试验，得到一株促进植物生长的固氮内生菌骆驼刺泛菌HHNXJC4G‑3；所述骆驼刺泛菌HHNXJC4G‑3保藏于广东省微生物菌种保藏中心，其分类命名为骆驼刺泛菌HHNXJC4G‑3，保藏编号为GDMCC NO：62760。该菌株具有酸性磷酸酶和萘酚‑AS‑BI‑磷酸水解酶活性，能促进植物中磷酸盐的溶解以及将土壤中有机磷转化为植物可吸收的无机磷，通过增加可溶性磷酸盐的含量来提高植物生长素（IAA）的分泌量，显著促进植物的生长，该菌株能提高植物在盐渍化、干旱的环境中的耐受力，在促生防病型微生物菌剂的生产中具有广阔的应用前景。
技术研发人员：请求不公布姓名
受保护的技术使用者：南宁汉和生物科技股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23