一种纳米控释系统制剂及其制备方法与应用
本发明涉及纳米生物医疗，具体而言，涉及一种纳米控释系统制剂及其制备方法与应用。
背景技术：
1、急性心肌梗死等缺血性心脏病是目前全球死亡的主要原因之一。急性心肌梗死多发生在冠状动脉粥样硬化斑块狭窄的基础上，斑块发生侵蚀或破裂，血栓形成，部分或完全阻塞冠状动脉管腔，导致心肌缺血坏死。
2、直接经皮冠状动脉介入治疗和静脉溶栓治疗均是有效的再灌注治疗,但心肌梗死后的再灌注治疗会引起炎性细胞在缺血组织聚集造成免疫刺激，局部活性氧簇浓度增高氧化应激，造成缺血后微循环的无复流现象，加重心肌损伤。在心肌细胞内，活性氧簇(ros)通过各种途径大量产生，促进自由基损伤并触发缺血区dna链断裂，最终导致细胞功能障碍与细胞死亡。
3、心肌梗死后的再灌注治疗会引起炎性细胞在缺血组织聚集造成免疫刺激，使局部活性氧簇浓度增高，同时造成缺血后微循环的无再流现象，加重心肌损伤。而死亡受体5融合蛋白有明确的心肌保护作用，但作为生物大分子，具有在体内容易被酶等代谢，易降解及生物利用度很低等特点，影响其在病灶处的选择性吸收。
4、因此，亟需一种纳米控释系统制剂及其制备方法与应用，以解决上述提到的问题。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种纳米控释系统制剂及其制备方法与应用，在起到靶向递送死亡受体5融合蛋白治疗心肌缺血再灌注损伤同时，发挥降低病灶区微环境中活性氧簇含量、减少微循环坏死、改善微环境的作用，并最终实现心肌保护的增效作用。
2、本发明的实施例是这样实现的：
3、本申请实施例提供一种纳米控释系统制剂制备方法，其使用含有过氧草酸酯键链接的ros响应性载体材料,通过自组装包载死亡受体5融合蛋白，得到负载死亡受体5融合蛋白的ros响应性纳米缓控释系统制剂。
4、在本发明的一些实施例中，纳米控释系统制剂制备方法包括以下步骤：
5、步骤1：将6s-plga-po-peg和死亡受体5融合蛋白用二氯甲烷溶解，在冰浴条件下进行超声乳化，并混合药物；
6、步骤2：在pva溶液中加入含有药物的二氯甲烷溶液，并超声乳化得到纳米粒乳液；
7、步骤3：将步骤2中的纳米粒乳液置于通风橱内常压下磁力搅拌并进行溶剂挥发，使有机溶剂挥发形成稳定的纳米粒；
8、步骤4：高速离心机离心后收集沉淀，将沉淀用蒸馏水复溶再离心，离心洗涤后除去游离pva；
9、步骤5：将纳米粒在冷冻干燥机中冻干，得到负载死亡受体5融合蛋白的ros响应性纳米缓控释系统制剂。
10、在本发明的一些实施例中，上述步骤1中，6s-plga-po-peg为100mg、死亡受体5融合蛋白为15mg、二氯甲烷溶解为2ml；冰浴条件为温度10℃。
11、在本发明的一些实施例中，上述步骤1中，超声的功率为100～150w，剪切率为30％，超声的时间为5min。
12、在本发明的一些实施例中，上述步骤2中，乳化剂pva溶液配制浓度为1％；超声乳化的功率为100～150w，剪切率为35％，超声的时间为10min。
13、在本发明的一些实施例中，上述步骤4中，离心转速为23000rpm，离心时长为30min，离心温度为10℃。
14、在本发明的一些实施例中，上述过氧草酸酯键链接的ros响应性载体材料的合成包括以下步骤：
15、步骤1.1：采用肌醇作引发剂，辛酸亚锡作催化剂，通过开环聚合丙交酯和已交酯进行合成6s-plga；
16、步骤1.2：将草酰氯与羟基反应使其生成末端带有酰氯基团，将peg与过量的草酰氯反应后，得到两端带有酰氯的peg；
17、步骤1.3：在碱性条件下将6s-plga滴加到过量的peg中，从而使plga与peg通过过氧草酸酯键(po)相连接得到嵌段聚合物6s-plga-po-peg。
18、在本发明的一些实施例中，上述步骤1.1中，肌醇与单体比例为1:100，辛酸亚锡与单体的比例为1:10000，乙交酯与丙交酯的比例为1:3。
19、一种纳米控释系统制剂，上述纳米控释系统制剂制备方法得到的负载死亡受体5融合蛋白的ros响应性纳米缓控释系统制剂。
20、一种纳米控释系统制剂应用方法，包括上述纳米控释系统制剂在制备靶向递送心肌缺血再灌注损伤治疗药物、制备降低机体病灶区微环境中ros含量的治疗药物或制备可靶向富集于心肌梗死区域的药物。
21、相对于现有技术，本发明的实施例至少具有如下优点或有益效果：
22、(1)虽然死亡受体5融合蛋白有明确的心肌保护作用，但作为生物大分子，具有在体内容易被酶等代谢，易降解及生物利用度很低等特点，影响其在病灶处的选择性吸收。而本发明利用靶向纳米粒搭载蛋白的控释技术可以有效减少蛋白类药物在体内的降解，在提高生物利用度、降低毒副作用的同时，实现了长效缓释的优势。
23、(2)心肌梗死后的再灌注治疗会引起炎性细胞在缺血组织聚集造成免疫刺激，使局部活性氧簇浓度增高，同时造成缺血后微循环的无再流现象，加重心肌损伤。而传统治疗心梗的纳米递药系统仅能单纯地实现将包载药物靶向递送至心肌梗死相关区域的功能，然而本发明所开发的纳米递送系统中的ros响应性聚合物材料6s-plga-po-peg除了可以实现心肌梗死区域的靶向富集外，还可以有效降低梗死相关区域活性氧簇浓度，抑制炎性细胞聚集和炎症因子的产生，为保护心肌、治疗缺血再灌注损伤提供增效。
技术特征：
1.一种纳米控释系统制剂制备方法，其特征在于，使用含有过氧草酸酯键链接的ros响应性载体材料,通过自组装包载死亡受体5融合蛋白，得到负载死亡受体5融合蛋白的ros响应性纳米缓控释系统制剂。
2.根据权利要求1所述的纳米控释系统制剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的纳米控释系统制剂制备方法，其特征在于，所述步骤1中，6s-plga-po-peg为100mg、死亡受体5融合蛋白为15mg、二氯甲烷溶解为2ml；冰浴条件为温度10℃。
4.根据权利要求2所述的纳米控释系统制剂制备方法，其特征在于，所述步骤1中，超声的功率为100～150w，剪切率为30％，超声的时间为5min。
5.根据权利要求2所述的纳米控释系统制剂制备方法，其特征在于，所述步骤2中，乳化剂pva溶液配制浓度为1％；超声乳化的功率为100～150w，剪切率为35％，超声的时间为10min。
6.根据权利要求2所述的纳米控释系统制剂制备方法，其特征在于，所述步骤4中，离心转速为23000rpm，离心时长为30min，离心温度为10℃。
7.根据权利要求1所述的纳米控释系统制剂制备方法，其特征在于，所述过氧草酸酯键链接的ros响应性载体材料的合成包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的纳米控释系统制剂制备方法，其特征在于，所述步骤1.1中，肌醇与单体比例为1:100，辛酸亚锡与单体的比例为1:10000，乙交酯与丙交酯的比例为1:3。
9.一种纳米控释系统制剂，其特征在于，使用根据权利要求1-8所述的纳米控释系统制剂制备方法得到的负载死亡受体5融合蛋白的ros响应性纳米缓控释系统制剂。
10.根据权利要求1-8所述的纳米控释系统制剂在制备药物中的应用，包括其在制备靶向递送心肌缺血再灌注损伤治疗药物、制备降低机体病灶区微环境中ros含量的治疗药物或制备可靶向富集于心肌梗死区域的药物。
技术总结
本发明提出了一种纳米控释系统制剂及其制备方法与应用，涉及纳米生物医疗技术领域。包括：使用含有过氧草酸酯键链接的ROS响应性载体材料,通过自组装包载死亡受体5融合蛋白，得到负载死亡受体5融合蛋白的ROS响应性纳米缓控释系统制剂；与现有技术相比，其在起到靶向递送死亡受体5融合蛋白治疗心肌缺血再灌注损伤同时，发挥降低病灶区微环境中活性氧簇含量、减少微循环坏死、改善微环境的作用，并最终实现心肌保护的增效作用。
技术研发人员：曾勇,张阳,杨菁,梁晓玉,李全,叶益聪,赵昔良,屠琛琛
受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京安贞医院
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23