一种检测白术水煎液指纹图谱的方法及其指纹图谱与流程

本发明属于分析化学，具体涉及一种检测白术水煎液指纹图谱的方法及其指纹图谱。

背景技术：

1、目前中国药典项下中药材的鉴别主要有性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别，其中理化鉴别包括物理鉴别、化学鉴别、光谱鉴别、色谱鉴别等，色谱鉴别仍以薄层色谱鉴别为主。而中药材不同品种鉴别在中国药典中甚少体现，主要原因是由于中药材不同品种的物质成分差异研究存在不足，化学信息差异难以把控。

2、中药指纹图谱是一种综合可量化的鉴定手段，主要用于评价中药及其制剂质量的真实性、优良性与稳定性。能提供丰富鉴别信息的检测方法，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对中药及制剂质量进行整体描述和评价。为了更好地对中药及制剂质量进行控制，保证其临床疗效，建立其成分检测方法全面评价该中药及制剂质量。

3、白术为菊科植物白术的干燥根茎，其性温，味苦、甘，归脾、胃经，具有健脾益气、燥湿利水、止汗、安胎之功效，可用于治疗脾虚食少、腹胀泄泻、痰饮眩悸、水肿，自汗，胎动不安。白术的主要化学成分包括挥发油类、内酯类、多糖类和苷类等，现代药理研究表明，白术提取物或从中分离的单个化合物具有保肝、抗菌抗炎、抗肿瘤、调节胃肠功能、调节免疫系统、调节神经系统、调节脂质代谢、抗抑郁等多种生物活性。

4、目前，药典中收载白术质量控制方面只有性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别和浸出物，由于中药多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的方法。白术中化学成分较多，有必要对其中的化学成分进行检测，以更好地实现对白术药材及饮片的质量控制和评价。目前关于白术的研究多以醇提取为主，但临床上中药材的使用多以水提取为主，故针对白术水煎液成分的研究较为欠缺。

5、因此，开发一种操作简便、成本低、特征性强、准确度高的针对白术水煎液的鉴别方法是本领域的研究重点。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种检测白术水煎液指纹图谱的方法及其指纹图谱，所得指纹图谱特征性强、准确度高，可以对白术药材进行全面的质量评价。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、（1）将白术待测药材制备成供试品溶液；

4、（2）将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到指纹图谱，根据所述指纹图谱对所述白术待测药材进行质量评价。

5、本发明提供检测白术药材指纹图谱检测的方法，可利用该方法对白术药材中所含化学成分的种类与数量进行全面的检测，据此建立白术药材指纹图谱，该指纹图谱方法专属性强，各色谱峰分离较好，基线平稳，峰形好，能全面地反映其中所含化学成分的种类与数量，进而对白术药材进行整体描述和评价。

6、优选地，所述供试品溶液采用如下方法制备，所述方法包括：将所述白术待测药材，切片后，进行适当粉碎，将所述白术药材粉末置提取容器中，进行浸泡，水提，得到水提液，将所述水提液进行稀释后过滤或直接过滤得到所述供试品溶液。

7、优选地，所述提取容器为砂锅。

8、优选地，所述供试品溶液为水提液直接过滤得到。

9、优选地，所述白术药材，切片后，粉碎至过三号药典筛。

10、本发明在进行方法验证中的重复性试验时发现，初定的共有峰相对峰面积的rsd均较大，故对供试品制备过程中关键因素进行考察，主要包括样品均匀性、提取溶剂倍量、提取次数、提取方式，设计相关实验，以重复性试验中各共有峰相对峰面积的rsd作为评价依据，通过对上述数据进行分析，样品粒度大小以及提取方式对供试品溶液的制备影响较大，采用砂锅煎煮受热更均匀，平行性较回流提取更佳。

11、 优选地，所述水提时料液比为1:(30-50)，白术药材粉末浸泡时间为5-30 min，水提保持微沸时间为10-50 min。

12、优选地，所述水提时料液比为1:(35-45)，例如可以为1:36、1:40、1:44等，以白术药材粉末为1 g计，水为35-45 ml。

13、优选地，所述浸泡的时间为10-20 min，例如可以为12 min、15 min、18 min等。

14、优选地，所述水提保持微沸25-35 min，例如可以为26 min、30 min、34 min等。

15、上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

16、优选地，优选地，所述稀释采用的稀释剂为甲醇。

17、优选地，所述高效液相色谱法检测的条件如下：检测波长为0~12分钟为245-265nm，例如可以为247 nm、250 nm、254 nm、260 nm等，12~50分钟为215-235nm，例如可以为217 nm、220 nm、230 nm、234 nm等，流动相a为乙腈，流动相b为水，进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2 ml/min，例如可以为0.9 ml/min、1 ml/min、1.1 ml/min等，柱温为25-35℃，例如可以为26℃、28℃、30℃、32℃、34℃等。

18、优选地，所述梯度洗脱的过程为：0-15 min，例如可以为2 min、4 min、6 min、8min、10 min、12 min、14 min等，流动相a：0-16%，例如可以为2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%等，流动相b：100-84%，例如可以为98%、96%、94%、92%、90%、88%、86%等，15-30 min，例如可以为16 min、18 min、20 min、22 min、24 min、26 min、28 min等，流动相a：16-50%，例如可以为18%、22%、26%、30%、34%、38%、42%、46%、48%等，流动相b：84-50%，例如可以为82%、78%、74%、70%、66%、62%、58%、54%、52%等，30-45 min，例如可以为32 min、34 min、36 min、38 min、40min、42 min、44 min等，流动相a：50-75%，例如可以为52%、56%、60%、64%、68%、72%、74%等，流动相b：50-25%，例如可以为48%、44%、40%、36%、32%、28%、26%等，45-50 min，例如可以为46min、47 min、48 min、49 min等，流动相a： 75-0%，流动相b：25-100%，50-56 min，流动相a：0%，流动相b：100%。

19、优选地，所述检测方法还包括制备对照品溶液的步骤，以及采用和供试品溶液相同的检测方法，检测对照品溶液得到特征谱图的步骤。

20、优选地，所述对照品溶液采用如下方法进行制备，所述方法包括：将白术对照药材进行水提，得到滤液进行浓缩、过滤，得到所述对照品溶液。

21、优选地，所述水提时料液比为1:(90-110)，例如可以为1:92、1:96、1:100、1:104、1:108等。

22、优选地，所述水提加热回流0.8-1.2 h，例如可以为0.9 h、1 h、1.1 h等。

23、优选地，所述浓缩时浓缩至1/8-1/12体积，例如可以为1/9、1/10、1/11等。

24、优选地，所述对照品溶液制备方式为水提液浓缩后直接过滤。

25、作为优选技术方案，所述方法包括如下步骤：

26、（1）将所述白术待测药材，切片后，粉碎至过三号药典筛，将所述白术药材粉末置砂锅中，进行浸泡，水提，保持微沸时间为10-50min，得到水提液，将所述水提液进行稀释后过滤或直接过滤得到所述供试品溶液，所述水提时料液比为1:(30-50)，所述白术药材粉末浸泡时间为5-30min；

27、优选地，所述水提保持微沸时间为25-35 min，所述水提时料液比为1:(35-45)；所述白术药材粉末浸泡时间为10-20min；

28、（2）将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到指纹图谱，根据所述指纹图谱对所述白术待测药材进行质量评价；

29、所述高效液相色谱法检测的条件如下：检测波长为0~12分钟为245-265nm，12~50分钟为215-235nm，流动相a为乙腈，流动相b为水，进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2 ml/min，柱温为25-35℃，所述梯度洗脱的过程为：0-15 min，流动相a：0-16%，，流动相b：100-84%；15-30 min，流动相a：16-50%，流动相b：84-50%；30-45 min，流动相a：50-75%，流动相b：50-25%；45-50 min，流动相a： 75-0%，流动相b：25-100%；50-56 min，流动相a：0%，流动相b：100%。

30、第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的方法检测得到的指纹图谱，所述指纹图谱包括7个特征峰。

31、优选地，按照出峰顺序，以峰5为参照峰，所述7个特征峰的相对保留时间依次为0.47-0.57（例如可以为0.48、0.50、0.52、0.54、0.56等）、0.53-0.65（例如可以为0.54、0.56、0.58、0.60、0.62、0.64等）、0.63-0.77（例如可以为0.64、0.66、0.68、0.70、0.72、0.74、0.76等）、0.65-0.79（例如可以为0.66、0.68、0.70、0.72、0.74、0.76、0.78等）、1.00、2.57-3.14（例如可以为2.58、2.64、2.70、2.76、2.82、2.88、2.94、3.00、3.06、3.12等）、2.92-3.56（例如可以为2.94、3.00、3.06、3.12、3.18、3.24、3.30、3.36、3.42、3.48、3.54等）。

32、优选地，按照出峰顺序，以峰5为参照峰，所述7个特征峰的相对保留时间依次为0.49-0.55、0.56-0.62、0.67-0.74、0.68-0.76、1.00、2.71-2.99、3.08-3.40。

33、经表征，峰3所属化合物为腺嘌呤（adenine），其结构式如下所示：。

34、

35、经表征，峰4所属化合物为鸟苷（guanosine），其结构式如下所示：。

36、

37、经表征，峰5所属化合物为l-色氨酸（l-tryptophan），其结构式如下所示：。

38、

39、经表征，峰6所属化合物为白术内酯iii（atractylenolide iii），其结构式如下所示：。

40、

41、经表征，峰7所属化合物为白术内酯ii（atractylenolide ii），其结构式如下所示：。

42、

43、上述各项数值范围中的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。

44、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

45、本发明提供检测白术药材指纹图谱检测的方法，可利用该方法对白术药材中所含化学成分的种类与数量进行全面的检测，据此建立白术药材指纹图谱，该指纹图谱方法专属性强，各色谱峰分离较好，基线平稳，峰形好，能全面地反映其中所含化学成分的种类与数量，进而对白术药材进行整体描述和评价。

46、本发明处理待测白术样品时，将白术药材粉末置砂锅中，进行浸泡，水提，并且对于样品粉碎粒度进行控制，有效提高检测结果的重复性；同时本发明在测试过程中分离出三个暂无报道白术中含有的成分，对于临床白术药材质量控制具有十分重要的意义。

技术特征：

1.一种检测白术水煎液指纹图谱的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液采用如下方法制备，所述方法包括：将所述白术待测药材切片后，进行适当粉碎，将所述白术药材粉末置提取容器中，进行浸泡，水提，得到水提液，将所述水提液进行稀释后过滤或直接过滤得到所述供试品溶液；

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述白术药材切片后粉碎至过三号药典筛。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述水提时料液比为1:(30-50)，白术药材粉浸泡时间为5-30 min，水提保持微沸时间为10-50 min；

5.根据权利要求2-4任一项所述的方法，其特征在于，所述稀释采用的稀释剂为甲醇。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法检测的条件如下：检测波长为0-12分钟为245-265 nm，12-50分钟为215-235 nm，流动相a为乙腈，流动相b为水，进行梯度洗脱，流速为0.8-1.2 ml/min，柱温为25-35 ℃。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱的过程为：0-15 min，流动相a：0-16%，流动相b：100-84%；15-30 min，流动相a：16-50%，流动相b：84-50%；30-45 min，流动相a：50-75%，流动相b：50-25%；45-50 min，流动相a： 75-0%，流动相b：25-100%；50-56min，流动相a：0%，流动相b：100%。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，所述检测方法还包括制备对照品溶液的步骤，以及采用和供试品溶液相同的检测方法，检测对照品溶液得到特征谱图的步骤。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

10.一种如权利要求1-9任一项所述的方法检测得到的指纹图谱，其特征在于，所述指纹图谱包括7个特征峰，按照出峰顺序，以峰5为参照峰，所述7个特征峰的相对保留时间依次为0.47-0.57、0.53-0.65、0.63-0.77、0.65-0.79、1.00、2.57-3.14、2.92-3.56。

技术总结
本发明提供一种检测白术水煎液指纹图谱的方法及其指纹图谱，所述方法包括如下步骤：(1)将白术待测药材制备成供试品溶液；(2)将所述供试品溶液进行高效液相色谱检测，得到指纹图谱，根据所述指纹图谱对所述白术待测药材进行质量评价。本发明提供检测白术药材指纹图谱检测的方法，可对白术药材中所含化学成分的种类与数量进行全面的检测，据此建立白术药材指纹图谱，该指纹图谱方法专属性强，各色谱峰分离较好，基线平稳，峰形好，能全面地反映其中所含化学成分的种类与数量，进而对白术药材进行整体描述和评价。

技术研发人员：韩豫,徐保磊,成亮,魏茂陈
受保护的技术使用者：上海硕方医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23