大口黑鲈的RELA基因、蛋白、氨基酸位点、突变蛋白及应用

本发明属于生物工程，具体涉及大口黑鲈的rela基因、蛋白、氨基酸位点、突变蛋白及应用。

背景技术：

1、大口黑鲈作为主要的肉食性鱼类品种，由于其生长速度快，肉质鲜美和较高的市场价值，已成为我国重要的商业养殖品种之一。目前，随着配合饲料替代冰鲜鱼，需要提高大口黑鲈饲料中淀粉含量，但肉食性鱼类长期摄入高淀粉饲料会出现血糖持续较高，物质代谢紊乱，进而肝脏出现异常的脂肪蓄积、肝脏肿大、肝细胞坏死、炎症增加及肝脏纤维化等病理现象。一旦肝脏出现病变，不仅影响鱼类的生产性能和商业价值，制约产业发展。

2、公开号为cn108522858a的中国专利文献公开了胆汁酸在制备用于大口黑鲈的饲料添加剂中的应用，发现饲料中添加适量胆汁酸可有效促进摄食和生长性能，降低大口黑鲈肝脏中mda含量，提高抗氧化能力。公开号为cn109198261a的中国专利文献公开了一种大口黑鲈低糖配合饲料及其制备方法，研究得到饲料中最适的淀粉添加量，可提高大口黑鲈鱼体的生长速率及降低死亡率，同时提高鱼体的免疫力，减轻肝脏的损伤。公开号为cn114376117a的中国专利文献公开了一种饲料添加剂及其在大口黑鲈饲料中的应用，通过向饲料添加剂中加入鞣酸蛋白，可以降低水解单宁酸的用量，用于大口黑鲈饲料，能够显著降低大口黑鲈的肝脏糖原含量及血清甘油三酯水平，提高成活率及抗氧化水平。目前公开的文献中，主要从饲料配方和添加剂角度调节动物的营养代谢，改善肝脏健康。

3、目前，由蛋白源替代尤其是植物蛋白替代和高淀粉饲料所诱发的肝脏代谢性疾病的研究较少且发病机理尚不明确，缺乏精准的靶向预防策略。肝脏炎症和肝脏纤维化是大口黑鲈在摄食高淀粉饲料或高植物蛋白饲料后常出现的病理表型。因此，揭示大口黑鲈肝脏纤维化的发病机制是为肝病精准预防提供可靠靶点的重要途径，同时为靶向营养调控和靶向品种选育提供靶点和理论支撑。目前关于大口黑鲈的专利主要从配合饲料和添加剂的角度改善肝脏健康，未见可调控肝脏代谢性疾病的调控靶点报道。

技术实现思路

1、本发明解决的技术问题是提供大口黑鲈的rela基因、蛋白、氨基酸位点、突变蛋白及应用，rela乙酰化修饰水平的降低或relak119位点的去乙酰化修饰介导大量促炎因子的释放，从而加速肝脏炎症和纤维化，因此大口黑鲈rela基因及上述的乙酰化修饰位点，可为大口黑鲈的肝病精准预防提供可靠靶点。sirt7与rela存在蛋白互作并直接介导rela的去乙酰化修饰，sirt7特异性抑制剂通过恢复由高糖高脂饲料介导的rela乙酰化修饰水平的降低，显著抑制了rela的转录活性和核定位及其靶基因的表达，从而缓解了肝脏炎症和纤维化。

2、为了解决上述问题，本发明的第一方面提供一种大口黑鲈的rela基因，所述大口黑鲈的rela基因的编码区的核苷酸序列如seq id no：1所示。

3、本发明的第二方面提供一种大口黑鲈的rela基因编码的蛋白质，所述蛋白质的氨基酸序列如seq id no：2所示。

4、本发明的第三方面提供一种调控大口黑鲈炎症因子的表达的氨基酸位点，所述氨基酸位点为大口黑鲈rela的k119位点。

5、优选地，所述氨基酸位点为大口黑鲈rela乙酰化修饰的k119位点。

6、本发明的第四方面提供一种大口黑鲈rela的突变蛋白，所述突变蛋白为大口黑鲈rela的k119位点的赖氨酸被精氨酸或谷氨酰胺替换。

7、本发明的第五方面提供一种载体，所述载体中含有上述的大口黑鲈rela的突变蛋白。

8、本发明的第六方面提供一种宿主细胞，所述宿主细胞含有上述的大口黑鲈rela的突变蛋白。

9、本发明的第七方面提供调控大口黑鲈rela的乙酰化修饰水平或调控大口黑鲈rela的k119位点的乙酰化修饰的化合物在制备调控大口黑鲈炎症因子的表达的药物或预防或治疗大口黑鲈肝脏代谢性疾病的药物中的应用。

10、优选地，所述化合物通过避免或减少或恢复rela的乙酰化修饰水平的降低，或者通过避免或减少rela的k119位点的去乙酰化修饰，抑制rela的转录活性或核定位或其靶基因的表达，减少大口黑鲈炎症因子的表达或缓解大口黑鲈的肝脏炎症或肝脏纤维化。

11、优选地，所述化合物为sirt7特异性抑制剂。

12、本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

13、本发明提供了来自大口黑鲈的rela基因及其编码的蛋白，并通过将rela k119位点的赖氨酸突变成精氨酸或谷氨酰胺以分别模拟relak119的去乙酰化状态和乙酰化状态，发现rela k119位点的去乙酰化修饰介导大量促炎因子的释放，从而加速肝脏炎症和纤维化。本发明提供的来自大口黑鲈rela基因及上述的乙酰化修饰位点，可为大口黑鲈的肝病精准预防提供可靠靶点，同时为靶向营养调控和靶向品种选育等种质创新提供靶点支撑。

14、本发明发现sirt7与rela存在蛋白互作并直接介导rela的去乙酰化修饰，sirt7特异性抑制剂通过恢复由高糖高脂饲料介导的rela乙酰化修饰水平的降低，显著抑制了rela的转录活性和核定位及其靶基因的表达，从而缓解了肝脏炎症和纤维化，为创制耐高糖高脂大口黑鲈种质提供明确的靶标基因。

技术特征：

1.一种大口黑鲈的rela基因，其特征在于，所述大口黑鲈的rela基因的编码区的核苷酸序列如seq id no：1所示。

2.一种大口黑鲈的rela基因编码的蛋白质，其特征在于，所述蛋白质的氨基酸序列如seq id no：2所示。

3.一种调控大口黑鲈炎症因子的表达的氨基酸位点，其特征在于，所述氨基酸位点为大口黑鲈rela的k119位点。

4.根据权利要求3所述的调控大口黑鲈炎症因子的表达的氨基酸位点，其特征在于，所述氨基酸位点为大口黑鲈rela乙酰化修饰的k119位点。

5.一种大口黑鲈rela的突变蛋白，其特征在于，所述突变蛋白为大口黑鲈rela的k119位点的赖氨酸被精氨酸或谷氨酰胺替换。

6.一种载体，其特征在于，所述载体中含有如权利要求5所述的大口黑鲈rela的突变蛋白。

7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求5所述的大口黑鲈rela的突变蛋白。

8.调控大口黑鲈rela的乙酰化修饰水平或调控大口黑鲈rela的k119位点的乙酰化修饰的化合物在制备调控大口黑鲈炎症因子的表达的药物或预防或治疗大口黑鲈肝脏代谢性疾病的药物中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述化合物通过避免或减少或恢复rela的乙酰化修饰水平的降低，或者通过避免或减少rela的k119位点的去乙酰化修饰，抑制rela的转录活性或核定位或其靶基因的表达，减少大口黑鲈炎症因子的表达或缓解大口黑鲈的肝脏炎症或肝脏纤维化。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述化合物为sirt7特异性抑制剂。

技术总结
本发明提供大口黑鲈的RELA基因、蛋白、氨基酸位点、突变蛋白及应用。大口黑鲈的RELA基因的编码区的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。RELA基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。调控大口黑鲈炎症因子的表达的氨基酸位点为大口黑鲈RELA的K119位点。本发明研究发现，RELA乙酰化修饰水平的降低或RELA K119位点的去乙酰化修饰介导大量促炎因子的释放，加速肝脏炎症和纤维化，因此大口黑鲈RELA基因及上述乙酰化修饰位点，可为大口黑鲈的肝病精准预防提供可靠靶点。SIRT7与RELA存在蛋白互作并直接介导RELA的去乙酰化修饰，SIRT7特异性抑制剂通过恢复由高糖高脂饲料介导的RELA乙酰化修饰水平的降低，显著抑制了RELA的转录活性和核定位及其靶基因的表达，缓解肝脏炎症和纤维化。

技术研发人员：梁晓芳,薛敏,武小亮,郑银桦,王杰,王昊,吴秀峰
受保护的技术使用者：中国农业科学院饲料研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23