一种CSAD-VB12SeMet微球水凝胶的制备方法及其应用
本发明涉及微球水溶胶，具体涉及一种csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法及其应用。
背景技术：
1、硒是动物和人类机体必需的微量元素，具有抗氧化性、抗炎、化学预防和抗病毒等特性。在自然界中，硒以有机硒（硒代氨基酸、硒多糖及含硒醚）和无机硒（亚硒酸盐、硒化物）形式存在，无机硒安全范围窄，毒性大，使用剂量难以把控；而有机硒毒性低，对环境污染小，在吸收、抗氧化和组织积累方面更有效，但其在预混料和饲料中使用时不稳定，利用率低，难以应用于生产实践中。纳米制剂是近年来应用较为广泛的药物传递系统，与传统的其他剂型相比，具有改善药物口服效果的作用，常用于提高药物稳定性和利用率，控制药物释放，降低药物毒性。
2、脂质体与细胞膜形态相似，具有良好的的生物相容性和生物降解性，而且能够结合各种物质，被广泛用作多种生物活性物质的递送系统。海藻酸钠是由β-d-甘露糖酸（m）和α-l-古洛糖醛酸（g）两种己糖醛酸残基组成的线性阴离子多糖，具有高生物相容性、生物降解性、无毒性和无免疫原性，对其进行疏水改性得到的两亲性海藻酸衍生物于水溶液中自组装可形成具有核壳结构的纳米胶囊，两者联合作为药物载体具有提高药物包封率和靶向作用的特点。目前，已有研究利用多糖包裹硒制备纳米粒子，其可以提高硒的生物活性和安全性，但仍存在稳定性差，过早释放有效成分等问题。因此，需要开发一种新的脂质体、海藻酸钠包裹硒的微球，提高稳定性并实现稳定缓释效果。
技术实现思路
1、本发明要解决的技术问题是提供一种csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法及其应用，以脂质体和包含vb12（维生素b12）的csad（两亲性胆固醇接枝海藻酸钠衍生物）为载体包裹semet（硒代蛋氨酸），利用薄膜水合法和自组装法制备csad-vb12/semet微球水凝胶材料，制得的csad-vb12/semet微球水凝胶体系稳定性较好，具有较强的抗氧化能力且能缓解氟诱导的雄性小鼠生殖损伤。
2、为了解决上述技术问题，本发明一方面提供了一种csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法，包括如下步骤：
3、s1、将卵磷脂、胆固醇、维生素e混合溶解并蒸发成薄膜；
4、s2、将所述薄膜溶解到semet溶液中，超声处理，得到脂质体溶液；
5、s3、将所述脂质体溶液加入csad-vb12溶液中混合反应，得到csad-vb12/semet微球水凝胶。
6、本发明采用卵磷脂、胆固醇为主要原料制备脂质体，卵磷脂分子中有两条疏水烃链和一个亲水基团，其亲水基团面向两侧的水相，疏水烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂质体，胆固醇对于脂质体起着脂质体膜流动性调节剂的作用，添加维生素e用于维持脂质体的完整性，保持其稳定性，并有利于增强其抗氧化性能；通过脂质体和csad-vb12包裹semet，制备csad-vb12/semet微球水凝胶材料，csad-vb12/semet微球水凝胶体系稳定性较好，具有较强的抗氧化能力。
7、进一步的，所述semet溶液的浓度为1-10 g/l，所述csad-vb12溶液中csad-vb12的浓度为8-16 g/l。
8、进一步的，所述脂质体溶液和csad-vb12溶液的体积比为1：（1-2）。
9、进一步的，s3中，所述混合反应的条件为磁力搅拌12-24h。
10、进一步的，s2中，所述超声处理时间为0.5-1h，超声处理前，磁力搅拌1-2h。
11、进一步的，s1中，所述蒸发具体为：25-35℃旋转蒸发5-6h，随后真空干燥箱蒸发3-4h。
12、进一步的，s1中，所述混合溶解的溶剂为无水乙醇。
13、进一步的，所述semet溶液的制备方法为：将富晒酵母和胰蛋白酶溶解到100mmol/l的三羟甲基氨基甲烷缓冲液（ph为7.0-8.0）中，35-40℃水浴摇床上反应24-48h，以3000-5000 r/min离心0.5-1 h，移取上清液，用0.22-0.45 μm针式过滤器过滤，得到semet溶液。
14、进一步的，所述卵磷脂的添加量与semet溶液中semet的质量比为（12-18）:1。
15、进一步的，所述卵磷脂和胆固醇的质量比为（10-5）：1。
16、进一步的，所述csad-vb12溶液的制备方法为：将海藻酸钠和无水对甲苯磺酸溶解于无水二甲基亚砜中，50-70℃搅拌0.5-1 h，加入n,n'-二环己基碳酰亚胺、4-二甲氨基吡啶和含有胆固醇的氯仿，室温磁力搅拌24-48h，无水乙醇洗涤沉淀后，于30-50℃真空干燥箱干燥24-48 h得到csad；将csad溶解于无水二甲基亚砜中作为试剂一备用，将vb12和n,n'-羰基二咪唑溶解于无水二甲基亚砜中，室温氮气氛围中搅拌1-2 h作为试剂二，将试剂一和试剂二混合后在黑暗室温氮气氛围中搅拌24-48 h后，加入丙酮沉淀，3000-4000 r/min离心0.5-1 h得到csad-vb12，沉淀用蒸馏水溶解，并调节ph至6-8，得到csad-vb12溶液。
17、进一步的，所述csad和vb12的质量比为（10-18）：1。
18、本发明csad-vb12/semet微球水凝胶的制备原理为：卵磷脂分子中有两条较长的疏水烃链和一个亲水基团，将适量的磷脂加至缓冲溶液中，磷脂分子定向排列，其亲水基团面向两侧的水相，疏水的烃链彼此相对缔和为双分子层，构成脂质体，附加剂胆固醇为两亲性物质，与磷脂混合使用，可调节双分子层的流动性，降低脂质体膜的通透性，使脂质体更稳定。海藻酸钠是由β-d-甘露糖酸（m）和α-l-古洛糖醛酸（g）两种己糖醛酸残基组成的线性阴离子多糖，在n,n'-二环己基碳酰亚胺和二甲氨基吡啶两种催化剂作用下，通过与胆固醇发生酯化反应对其羧基进行化学改性，提高了海藻酸钠的疏水性，这种海藻酸钠胆固醇酯在水溶液中能够自聚集形成纳米粒子，进而实现对semet的进一步包封。
19、本发明第二方面提供第一方面所述的制备方法制备得到的csad-vb12/semet微球水凝胶，所述csad-vb12/semet微球的粒径为900-1200 nm。
20、进一步的，所述csad-vb12/semet微球水凝胶的保存温度为0-8℃。
21、本发明第三方面提供第二方面所述的csad-vb12/semet微球水凝胶在氟中毒所致生殖损伤缓解制剂中的应用。
22、进一步的，所述缓解制剂中csad-vb12/semet微球水凝胶的使用剂量为0.4-0.6mg/kg•bw。
23、本发明的有益效果：
24、本发明通过脂质体和csad-vb12包裹semet，制备csad-vb12/semet微球水凝胶材料，制备方法简单，且制备效果好，csad-vb12/semet微球水凝胶体系稳定性较好，具有较强的抗氧化能力。
25、本发明采用的主要原料卵磷脂、胆固醇、海藻酸钠廉价、易得，同时具有抗氧化、生物相容性高、生物降解性高、无免疫原性、毒性较低的优点。
26、本发明制备的csad-vb12/semet微球水凝胶，可以有效抑制高氟诱导雄性小鼠生殖系统的氧化应激，并通过促进精子生成拮抗氟的生殖毒性；增加血清硒含量，显著升高了的谷胱甘肽过氧化物酶4、总胆固醇和睾酮含量，从而缓解氟诱导的雄性小鼠生殖损伤。
技术特征：
1.一种csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法，其特征在于，所述semet溶液的浓度为1-10 g/l，所述csad-vb12溶液中csad-vb12的浓度为8-16 g/l。
3.如权利要求2所述的csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法，其特征在于，所述脂质体溶液和csad-vb12溶液的体积比为1：（1-2）。
4.如权利要求1所述的csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法，其特征在于，s1中，所述蒸发具体为：25-35℃旋转蒸发5-6h，随后真空干燥箱蒸发3-4h。
5.如权利要求1所述的csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法，其特征在于，所述semet溶液的制备方法为：将富晒酵母和胰蛋白酶溶解到三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，35-40℃反应，得到semet溶液。
6.如权利要求1所述的csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法，其特征在于，所述卵磷脂的添加量与semet溶液中semet的质量比为（12-18）:1。
7.如权利要求1所述的csad-vb12/semet微球水凝胶的制备方法，其特征在于，所述卵磷脂和胆固醇的质量比为（10-5）：1。
8.一种权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到的csad-vb12/semet微球水凝胶，所述csad-vb12/semet微球的粒径为900-1200 nm。
9.一种权利要求8所述csad-vb12/semet微球水凝胶在氟中毒所致生殖损伤缓解制剂中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述缓解制剂中csad-vb12/semet微球水凝胶的使用剂量为0.4-0.6 mg/kg•bw。
技术总结
本发明公开了一种CSAD‑VB12/SeMet微球水凝胶的制备方法及其应用，制备方法包括如下步骤：将卵磷脂、胆固醇、维生素E混合溶解并蒸发成薄膜；将所述薄膜溶解到SeMet溶液中，超声处理，得到脂质体溶液；将所述脂质体溶液加入CSAD‑VB12溶液中混合反应，得到CSAD‑VB12/SeMet微球水凝胶。本发明通过脂质体和CSAD‑VB12包裹SeMet，制备CSAD‑VB12/SeMet微球水凝胶材料，制备方法简单，且制备效果好，CSAD‑VB12/SeMet微球水凝胶体系稳定性较好，具有较强的抗氧化能力，且能缓解氟诱导的雄性小鼠生殖损伤。
技术研发人员：王金明,李梦,刘金剑,张琼,赵建华,席志俊,王天玉,李媛媛,边学伟,赵晖,李浩洁,高宇凤,王良羽,许洋,张文慧,赵天瑞,王英卉,赵阳飞,王俊东
受保护的技术使用者：山西农业大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23