一种双药共载脂质体及其制备方法和应用

本发明属于药物制剂，具体涉及一种双药共载脂质体及其制备方法和应用。

背景技术：

1、癌症免疫疗法是继外科干预、化疗和放疗之后的一种革命性治疗方式，旨在通过激活、恢复或增强患者的全身性抗肿瘤免疫反应来对抗癌症。这种方法大大改善了许多患者的生存状况，并具有广泛应用的巨大潜力。然而，在临床实践中，由于肿瘤抗原性不足和免疫抑制性微环境，免疫疗法对某些患者的效果有限，导致治疗反应存在相当大的变异性，对转移和复发的有效性不足。因此，亟需开发更有效的组合治疗策略来应对这些挑战。

2、最近的研究表明，经典的蒽环类广谱化疗药多柔比星(dox)可通过形成损伤相关分子模式(damps)引发免疫原性细胞死亡(icd)，icd可以激活适应性免疫反应，促进树突状细胞(dcs)的成熟，增强特异性效应t细胞对肿瘤的杀伤能力，提高肿瘤的免疫原性，最终促进免疫疗法的有效性。

3、然而，静脉注射dox溶液可能会导致严重的全身毒性。为了解决这一问题，各种研究都将重点放在将dox配制成脂质体上。脂质体是一种主要由磷脂组成的纳米微粒，既能递送亲水性药剂，也能递送疏水性药剂，具有良好的生物相容性。制备脂质体dox可以显著减少药物引起的副作用，延长循环时间，改善不利的生物分布，从而发挥更强的抗肿瘤作用，同时诱导更大的肿瘤抗原性。

4、除了肿瘤细胞抗原性不足外，另一个限制免疫疗法有效性的因素是存在免疫抑制性肿瘤微环境(tme)。其中，肿瘤相关巨噬细胞(tams)是肿瘤微环境中最主要的免疫抑制细胞，在肿瘤发生和发展过程中起着关键的调节作用。暴露于各种刺激后，tams可极化为两种不同类型：免疫刺激型m1表型和免疫抑制型m2表型。m1 tams可通过释放促炎细胞因子激活抗肿瘤免疫反应。相反，m2 tams通过多种机制促进肿瘤生长、转移和复发。

5、咪喹莫特(r837)是fda批准用于癌症免疫疗法的疏水性toll样受体7(tlr7)激动剂之一。它已证明具有良好的安全性和耐受性。r837能与tlr7特异性结合，有效地将促进肿瘤生长的m2 tams重新极化为抗肿瘤的m1 tams，激活适应性免疫反应，并改善免疫抑制性tme。

6、现有技术中大部分将免疫治疗药物和免疫佐剂单独制成脂质体，这导致用药不便。如能将免疫治疗药物和免疫佐剂共载于一种药物中，利用二者的协同作用，促进抗肿瘤免疫疗法，将具有重要的意义。

技术实现思路

1、为了解决上述存在的技术问题，本发明设计了dox/r837共载脂质体(dox/r837@cl)。利用epr效应，该脂质体能将免疫调节剂递送到tme。释放的r837能将m2 tams重新极化为m1 tams，调节免疫抑制性tme。同时，释放的dox可触发icd，增强肿瘤抗原性，协同促进抗肿瘤免疫疗法。

2、本发明采用的技术方案是：一种双药共载脂质体，所述双药共载脂质体是，将免疫治疗药物包载于脂质体内水相中，将免疫佐剂装载于脂质体磷脂双分子层上制得。

3、进一步的，所述免疫治疗药物是亲水性免疫治疗药物。

4、更进一步的，所述亲水性免疫治疗药物是多柔比星(dox)。

5、进一步的，所述免疫佐剂是疏水性免疫佐剂。

6、更进一步的，所述疏水性免疫佐剂是咪喹莫特(r837)。

7、双药共载脂质体的制备方法，包括如下步骤：

8、1)取磷脂(s100)、胆固醇(ch)和免疫佐剂于容器中，用三氯甲烷溶解后，旋转蒸发去除三氯甲烷，形成一层脂质膜；然后加入60-70℃的柠檬酸缓冲液，水合20-30min；再使用探针超声仪对所得混合物进行超声处理8-10min，所得产物通过聚碳酸酯膜过滤去除大颗粒，得脂质体；

9、2)将磷酸钠溶液与步骤1)所得脂质体混合，然后加入免疫治疗药物的盐酸溶液，在60-70℃下处理20-30min，通过阳离子交换树脂，得双药共载脂质体。

10、进一步的，步骤1)中，按质量比，磷脂:胆固醇:免疫佐剂＝9-11:3-5:1。

11、进一步的，步骤2)中，按质量比，磷脂:免疫治疗药物＝9-11:1。

12、进一步的，步骤2)中，磷酸钠溶液浓度为0.4-0.6m。

13、本发明提供的双药共载脂质体在制备癌症免疫疗法药物中的应用。

14、本发明的有益效果为：

15、1、本发明提供的双药共载脂质体dox/r837@cl，dox是一种亲水性免疫治疗药物，主要通过ph梯度载药法包载于脂质体内水相中；r837作为一种疏水性免疫佐剂，主要通过薄膜分散法装载于脂质体磷脂双分子层上。本发明的双药共载脂质体能够通过增强的通透性和滞留(epr)效应聚集于肿瘤微环境(tme)，将其中的m2 tams转变为m1 tams，激活适应性免疫反应，并改善免疫抑制性tme。

16、2、本发明提供的双药共载脂质体dox/r837@cl，利用epr效应，能将免疫治疗药物和免疫佐剂递送至免疫微环境(tme)，激活适应性免疫反应并改善免疫抑制性tme。释放的r837能将促进肿瘤生长的m2 tams重新极化为抗肿瘤的m1 tams，激活适应性免疫反应并改善免疫抑制性tme。同时，释放的dox可触发icd，增强肿瘤抗原性，协同促进抗肿瘤免疫疗法。

17、3、本发明可同时递送两种药物，提高载药效率。

18、4、本发明方法有望将纳米药物递送系统与免疫疗法相结合，推动癌症治疗的发展。

技术特征：

1.一种双药共载脂质体，其特征在于，所述双药共载脂质体是，将免疫治疗药物包载于脂质体内水相中，将免疫佐剂装载于脂质体磷脂双分子层上制得。

2.按照权利要求1所述的双药共载脂质体，其特征在于，所述免疫治疗药物是亲水性免疫治疗药物。

3.按照权利要求2所述的双药共载脂质体，其特征在于，所述亲水性免疫治疗药物是多柔比星。

4.按照权利要求1所述的双药共载脂质体，其特征在于，所述免疫佐剂是疏水性免疫佐剂。

5.按照权利要求4所述的双药共载脂质体，其特征在于，所述疏水性免疫佐剂是咪喹莫特。

6.权利要求1-5任一项所述的双药共载脂质体的制备方法，其特征在于，制备方法包括如下步骤：

7.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中，按质量比，磷脂:胆固醇:免疫佐剂＝9-11:3-5:1。

8.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，按质量比，磷脂:免疫治疗药物＝9-11:1。

9.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中，磷酸钠溶液浓度为0.4-0.6m。

10.权利要求1-5任一项所述的双药共载脂质体在制备抗肿瘤免疫疗法药物中的应用。

技术总结
本发明涉及一种双药共载脂质体及其制备方法和应用，属于药物制剂领域。DOX是一种亲水性药物，主要通过pH梯度载药法包载于脂质体内水相中；R837作为一种疏水性免疫佐剂，主要通过薄膜分散法装载于脂质体磷脂双分子层上；本发明提供的双药共载脂质体能够通过增强的通透性和滞留(EPR)效应聚集于肿瘤微环境(TME)，将其中的M2TAMs转变为M1TAMs，激活适应性免疫反应，并改善免疫抑制性TME。

技术研发人员：陈立江,张克鑫,李聪,王丽虹,李泽昊,王泽雨
受保护的技术使用者：辽宁大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23