一种烟草黑胫病菌选择性培养基及其制备方法与应用与流程

本发明属于微生物筛选，具体涉及一种烟草黑胫病菌选择性培养基及其制备方法与应用。

背景技术：

1、烟草是中国重要的经济作物，为国家和地方财政增收、经济发展作出积极贡献。随着烟草在我国大面积的种植，在中国已报道的烟草侵染性病害有60余种，包括烟草病毒病、赤星病、靶斑病、根腐病等。近几年来，烟草镰刀菌根腐病在我国主要种植烟区发生逐渐增多，容易与烟草黑胫病一起造成复合侵染，造成重大经济损失。

2、烟草镰刀菌根腐病是烟草主要根茎病害之一，通常由茄病镰刀菌(fusariumsolani)和尖孢镰刀菌(f.oxysporum)引起。烟草镰刀菌根腐病在烟草的幼苗期至大田期均可发病，有发病中心，且以大田期发病为主。该病主要侵染烟草根茎，造成根系维管束腐烂，使体内水分和营养运输受阻，从而导致烟株枯萎死亡。病菌主要以菌丝和孢子在烟株病残体、带病种子中越冬，或者在土壤中越冬，既可单独侵染，又和烟草黑胫病、青枯病等混合侵染，造成根部腐烂、烟株死亡、烟叶减产等。烟草黑胫病是由寄生疫霉(phytophthoraparasitica var.nicotianae)引起的土传真菌病害，烟草黑胫病在烟草的整个生育期均可发病，苗期发病相对较少，以大田期发病为主。发病部位主要是烟草根茎部，苗期烟苗基部受到侵染时会出现黑色病斑，由下至上侵染蔓延，严重时导致烟苗死亡。大田期烟株受到侵染主要表现“黑胫”、“穿大褂”、“黑膏药”、“碟片状”、“腰烂病“等症状。主要以菌丝体和厚垣孢子在病株残体、土壤肥料中越冬，是翌年初侵染的主要来源。该病菌主要通过雨水或灌溉水传播。游动孢子受根分泌物影响，在其表面聚集萌发，可以直接侵入或从伤口侵入完成初侵染。目前，烟草镰刀根腐病和烟草黑胫病在我国很多烟区复合侵染比较严重，造成对单一病害的研究比较困难。近年来，前人对烟草镰刀根腐病和烟草黑胫病的防治研究较多，但对烟草镰刀根腐病和烟草黑胫病复合侵染中对病害进行单菌株分离纯化的报道较少。

技术实现思路

1、本发明通过研究发现抑霉唑和戊唑醇在一定浓度下对烟草尖孢镰刀菌和烟草茄病镰刀菌具有显著的抑制作用，而对烟草疫霉的抑制效果较差。因此可基于这两种物质制备得到烟草黑胫病菌选择性培养基，通过有效抑制两种主要烟草镰刀菌，从烟草镰刀菌根腐病和烟草黑胫病复合侵染病株中精准分离出，导致烟草黑胫病的烟草疫霉(phytophthora parasitica var.nicotianae)，为后续烟草黑胫病的抗病和防控研究提供基础。

2、本发明提供了一种用于选择性培养烟草黑胫病病原菌的培养基，所述培养基包含基础培养基和头孢霉素、戊唑醇和/或抑霉唑，其中，戊唑醇的浓度不低于10mg/l、抑霉唑的浓度不低于5mg/l。

3、进一步地，戊唑醇的浓度为不低于50mg/l、抑霉唑的浓度为不低于20mg/l。

4、进一步地，所述基础培养基为燕麦培养基。

5、本发明还提供了一种分离烟草黑胫病病原菌的方法，利用上述任一所述培养基对样本进行培养。

6、进一步地，所述烟草黑胫病的病原菌为烟草疫霉(phytophthora parasiticavar.nicotianae)。

7、本发明还提供了戊唑醇和/或抑霉唑在制备分离和/或筛选烟草黑胫病病原菌试剂中的应用。

8、进一步地，所述戊唑醇的浓度为不低于50mg/l、所述抑霉唑的浓度为不低于20mg/l。

9、进一步地，所述烟草黑胫病的病原菌为烟草疫霉(phytophthora parasiticavar.nicotianae)。

10、本发明还提供了一种区分烟草疫霉和烟草镰刀菌的方法，将样本接种至上述任一所述培养基中进行培养。

11、本发明还提供了戊唑醇和/或抑霉唑在制备选择性区分和/或筛选烟草根腐病和烟草黑胫病病原菌试剂中的应用。

12、有益效果：本发明提供了一种可选择性培养/筛选烟草黑胫病病原菌的培养基，其可以有效抑制烟草镰刀菌，从而精准分离出烟草镰刀菌根腐病和烟草黑胫病复合侵染中的烟草疫霉(phytophthora parasitica var.nicotianae)，分离效果优异且具有操作简单、省时省力、对试验人员的要求不高等特点，具有广阔的应用前景，且为后续烟草黑胫病的抗病和防控研究提供基础。此外，本发明还筛选出了合适浓度的药剂用于田间试验，进而有效降低田间病害的发生。

技术特征：

1.一种用于选择性分离烟草黑胫病病原菌的培养基，其特征在于，所述培养基包含基础培养基和头孢霉素、戊唑醇和/或抑霉唑，其中，戊唑醇的浓度不低于10mg/l、抑霉唑的浓度不低于5mg/l。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，戊唑醇的浓度为不低于50mg/l、抑霉唑的浓度为不低于20mg/l。

3.根据权利要求1-2任一所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基为燕麦培养基。

4.一种分离烟草黑胫病病原菌的方法，其特征在于，利用权利要求1-3任一所述培养基对样本进行培养。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述烟草黑胫病的病原菌为烟草疫霉。

6.戊唑醇和/或抑霉唑在制备分离和/或筛选烟草黑胫病病原菌产品中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述戊唑醇的浓度为不低于50mg/l、所述抑霉唑的浓度为不低于20mg/l。

8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述烟草黑胫病的病原菌为烟草疫霉。

9.戊唑醇和/或抑霉唑在制备选择性区分烟草根腐病和烟草黑胫病病原菌试剂中的应用。

技术总结
本发明涉及一种烟草黑胫病菌选择性培养基及其制备方法与应用，本发明通过使用不同类型和不同浓度梯度的带毒燕麦培养基平板，分别测定根腐病主要致病菌尖孢镰刀菌、茄腐镰刀菌以及烟草疫霉在平板上生长抑制率，发现戊唑醇、抑霉唑对烟草根腐病的抑制效果最佳，并对烟草黑胫病的生长无影响，故可利用上述培养基筛选分离烟草黑胫病菌菌株。本发明提供的烟草黑胫病选择性培养基及筛选分离方法可用于对烟草黑胫病病株进行病原菌分离，特别是对于存在烟草根腐病复合侵染的植株，具有分离效果优异且操作简单，省时省力等特点，具有广阔的应用前景。

技术研发人员：刘天波,彭永辉,肖艳松,周向平,滕凯,郑露,蔡海林,肖志鹏,余贝,段淑辉
受保护的技术使用者：中国烟草总公司湖南省公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23