一种心脏瓣膜病相关的生物标志物及其应用的制作方法

本发明涉及分子辅助诊断领域，具体而言，涉及一种心脏瓣膜病相关的生物标志物及其应用。

背景技术：

1、心脏瓣膜病(valvular heart disease，vhd)是一种由于先天性发育异常或其他各种病变所引起心脏瓣膜及其附属结构发生解剖结构或功能上的异常的疾病，会造成单个或多个瓣膜急性或慢性狭窄和(或)关闭不全，而导致心脏血流动力学显著变化，并出现一系列症状的临床综合征。天然心脏瓣膜(即主动脉瓣、肺动脉瓣、三尖瓣和二尖瓣)在确保通过心血管系统的充足血液供应的前向流动中起着关键作用。这些心脏瓣膜可能例如由于先天性畸形、炎性过程、感染性病症、疾病等而受损，并且因此导致有效性降低。瓣膜的此类损伤可能导致严重的心血管损害或死亡。

2、目前，医生通过临床表现(心功能不全的症状，如乏力、活动后心慌气短、阵发性憋气等)、体格检查(听诊，检查心脏是否有杂音)和辅助检查(心脏超声、心电图、胸片、血液检查等)进行诊断心脏瓣膜病，越来越多的证据表明影像技术的局限性，例如引起疼痛和焦虑、假阳性结果和辐射暴露风险，或者价格昂贵、成像复杂和周期长，或者依赖于医师的经验与技术，且存在分辨率低、特异性和敏感性无法保证等缺陷。此外，进行针对性治疗比较困难并且预后情况较差，这导致患者的生存率降低。因此，本领域迫切需要开发一种无创、且能够更早期地、敏感地和准确地发现早期心脏瓣膜病的生物标志物。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种新的心脏瓣膜病辅助检测工具。

2、为达成上述目的，本发明第一方面提供一种心脏瓣膜病相关的生物标志物，所述生物标志物为seq id no.1所示的hsa-mir-1183和seq id no.2所示的hsa-mir-1299的组合。

3、mirna(microrna)是近年来发现的一类在转录后水平调控基因表达的新机制，是调控心力衰竭进程中基因表达变化的独立因素。随着mirna相关研究的逐渐深入，发现mirna通过多种途径，由细胞内转移到细胞外，并于不同介质结合而稳定存在于细胞外液中，具有获取方便、可重复检测、稳定性号、灵敏度高等优势，成为近年来开发多种疾病诊断标记物的研究热点。

4、更优选地，所述hsa-mir-1183和hsa-mir-1299来源于人体血浆。

5、进一步地，本发明第二方面提供一种用于检测第一方面所述生物标志物的茎环引物对。所述茎环引物对包括seq id no.3所示的hsa-mir-1183-rt和seq id no.4所示的hsa-mir-1299-rt。

6、进一步地，本发明第三方面提供一种试剂盒，所述试剂盒包括第二方面所述的茎环引物对。

7、优选地，所述试剂盒还包括用于检测hsa-mir-1183的特异性引物对，包括seq idno.5所示的上游引物和seq id no.6所示的下游引物。

8、优选地，所述试剂盒还包括用于检测hsa-mir-1299的特异性引物对，包括seq idno.7所示的上游引物和seq id no.8所示的下游引物。

9、优选地，所述试剂盒还包括内参引物，所述内参引物为u6引物，包括seq id no.9所示的上游引物和seq id no.10所示的下游引物。

10、优选地，所述试剂盒还包括gdna wiper mix、rt mix、hiscript ii enzyme mix、mirna universal sybr qpcr master mix中的一种或多种。

11、进一步地，本发明第四方面提供一种第一方面所述的生物标志物、第二方面所述的茎环引物对或第三方面所述的试剂盒在心脏瓣膜病诊疗药物、预后产品的制备中的应用。

12、本发明具备的有益效果：本发明提供了一种新的心脏瓣膜病的生物标志物，并基于此提供了用于检测hsa-mir-1183和hsa-mir-1299的茎环引物对以及试剂盒，通过本发明提供的茎环引物对和试剂盒，可以准确、高效、灵敏地检测出样本中hsa-mir-1183和hsa-mir-1299的表达量，进而达成心脏瓣膜病辅助检测的目的，本发明提供的技术具有特异性强，灵敏度高，无创性，便捷性等特点，有助于心脏瓣膜病的诊断，具有潜在的临床应用价值。

技术特征：

1.一种心脏瓣膜病相关的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物为seq id no.1所示的hsa-mir-1183和seq id no.2所示的hsa-mir-1299的组合。

2.一种用于检测权利要求1所述生物标志物的茎环引物对，其特征在于，所述茎环引物对包括seq id no.3所示的hsa-mir-1183-rt和seq id no.4所示的hsa-mir-1299-rt。

3.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的茎环引物对。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于检测hsa-mir-1183的特异性引物对，包括seq id no.5所示的上游引物和seq id no.6所示的下游引物。

5.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于检测hsa-mir-1299的特异性引物对，包括seq id no.7所示的上游引物和seq id no.8所示的下游引物。

6.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括内参引物，所述内参引物为u6引物，包括seq id no.9所示的上游引物和seq id no.10所示的下游引物。

7.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括gdna wiper mix、rtmix、hiscript ii enzyme mix、mirna universal sybr qpcr master mix中的一种或多种。

8.一种权利要求1所述的生物标志物或权利要求2所述的茎环引物对或权利要求3～7任一所述试剂盒在心脏瓣膜病诊疗药物、预后产品的制备中的应用。

技术总结
本发明提供一种心脏瓣膜病相关的生物标志物及其应用，属于分子辅助诊断领域，所述生物标志物为SEQ ID No.1所示的hsa‑miR‑1183和SEQ ID No.2所示的hsa‑miR‑1299的组合，并基于此提供了用于检测hsa‑miR‑1183和hsa‑miR‑1299的茎环引物对以及试剂盒，通过本发明提供的茎环引物对和试剂盒，可以准确、高效、灵敏地检测出样本中hsa‑miR‑1183和hsa‑miR‑1299的表达量，进而达成心脏瓣膜病辅助检测的目的，本发明提供的技术具有特异性强，灵敏度高，无创性，便捷性等特点，有助于心脏瓣膜病的诊断，具有潜在的临床应用价值。

技术研发人员：邹继华,丁瑜,王小番,章力天,刘然
受保护的技术使用者：宁波美康盛德医学检验所有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23