用于合成Trizepatide的组合物及Trizepatide的合成方法与流程
本技术涉及多肽合成领域，特别涉及一种用于合成trizepatide的组合物及trizepatide的合成方法。
背景技术：
1、trizepatide是一种glp和glp-1双激动剂，其肽序结构如下：h-tyr-aib-glu-gly-thr-phe-thr-ser-asp-tyr-ser-ile-aib-leu-asp-lys-ile-ala-gln-lys(二十烷二酸-rglu-aeea-aeea)-ala-phe-val-gln-trp-leu-ile-ala-gly-gly-pro-ser-ser-gly-ala-pro-pro-pro-ser-nh2。
2、trizepatide可改善β细胞功能，提高胰岛素的敏感性，对初始使用剂量较低且后续剂量增幅较小的患者显示出疗效和耐受性的双重改善。trizepatide的临床数据表明，trizepatide对ⅱ型糖尿病患者的a1c和体重水平可带来有意义的降低，同时该药物也可以治疗其它代谢疾病。
3、由于trizepatide含有39个氨基酸组成，序列较长且肽序里面含有较多的疏水氨基酸，若采用单个氨基酸逐步缩合的方法合成时，生产周期较长，随着合成的过程中肽链不断增长，容易产生缺失肽，导致杂质增加，且这些缺失肽的杂质与产物的性质比较相似，导致合成得到的trizepatide粗品在后期的纯化过程中困难。造成收率低。
4、因此，开发一种收率高，周期短，杂质少的trizepatide合成方法具有重要的现实意义。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的上述技术问题，本技术提供了一种新的用于合成trizepatide的组合物及trizepatide合成方法来解决现有合成过程中所存在的杂质多，纯度和收率低，不利于后续进一步工业化放大的生产问题。
2、第一方面，本技术提供了一种用于合成trizepatide的组合物，其包括第一肽片段和第二肽片段，其中，第一肽片段为fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh（seq id no:1），第二肽片段为boc-z-aib-w-gly-oh，
3、其中，x代表具有侧链保护基tbu的ser（ser(tbu)），y代表具有侧链保护基otbu的asp（asp(otbu)），z代表具有侧链保护基tbu的tyr（tyr(tbu)），w代表具有侧链保护基otbu的glu（glu(otbu)）。
4、在一些实施方式中，x代表ser(tbu)。在一些实施方式中，y代表asp(otbu)。在一些实施方式中，z代表tyr(tbu)。在一些实施方式中，w代表glu(otbu)。
5、在一些实施方式中，所述组合物还包括氨基酸fmoc-(hmb)gly-oh，氨基酸fmoc-lys(dde)-oh和/或肽链c20-otbu-rglu(otbu)-aeea-aeea-oh，c20代表二十烷二酸。
6、在一些实施方式中，第一肽片段的合成包括：以ctc树脂为起始树脂，通过固相合成方法，在所述ctc树脂上依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸，得到具有如下结构的fmoc-x-ile-aib-leu-y-第一肽树脂，将所述第一肽树脂进行酸解，纯化，得到第一肽片段fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh，其中x和y具有本文所述的定义。
7、在一些实施方式中，第二肽片段的合成包括：以ctc树脂为起始树脂，通过固相合成方法，在所述ctc树脂上依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸，得到具有如下结构的boc-z-aib-w-gly-第二肽树脂，将所述第二肽树脂进行酸解，纯化，得到第二肽片段boc-z-aib-w-gly-oh。
8、在一些实施方式中，第一肽片段的合成中，所述ctc树脂的摩尔量与所述n端fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)，例如为1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9或它们之间的任意值。
9、在一些实施方式中，第二肽片段的合成中，所述ctc树脂的摩尔量与所述n端fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)，例如为1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9或它们之间的任意值。
10、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，偶联的缩合剂选自n,n-二异丙基碳二亚胺（dic）、1-羟基苯并三唑（hobt）、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯（hbtu）、n,n-二异丙基乙胺（diea）、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷（pybop）和n,n-二异丙基乙胺（diea）中的一种或多种。
11、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，采用的溶剂选自二氯甲烷（dcm）、n,n-二甲基甲酰胺（dmf）和n-甲基吡咯烷酮（nmp）中的一种或多种。
12、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，反应中采用的fmoc脱除试剂为哌啶/n,n-二甲基甲酰胺溶液。
13、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，酸解时采用的为三氟乙酸/二氯甲烷溶液。在一些实施方式中，三氟乙酸/二氯甲烷溶液中，三氟乙酸的体积含量为0.5%-3%，例如为0.7%、0.9%、1.0%、1.3%、1.5%、1.7%、2.0%、2.3%、2.5%或2.7%。在一些实施方式中，酸解时采用的为1%三氟乙酸/二氯甲烷溶液（v/v）。
14、在一些实施方式中，第一肽片段的合成包括以下具体步骤：
15、（1）将ctc树脂加入到固相合成反应器中，加入dmf溶胀树脂，随后将fmoc-asp(otbu)-oh溶于dmf并加入diea后混匀加入到固相反应器中，反应，抽干，dmf洗涤4次。加入dmf后继续加入甲醇及diea继续反应，抽干，dmf洗涤。
16、固相反应器中肽树脂用20%哌啶/dmf（v/v）溶液脱fmoc两次，完成后dmf洗涤，茚三酮检测结果呈阳性。称取fmoc-leu-oh和hobt溶于dmf并加入dic活化，活化后将溶液加入到固相反应器中进行反应，茚三酮检测结果呈阴性，抽干，洗涤。
17、重复上述步骤，按照肽序偶联剩余氨基酸，得到片段1：fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh肽树脂 ；
18、（2）上述肽树脂用1%tfa/dcm反应，过滤，收集滤液，加入纯化水萃取，得到有机层滤液加入无水硫酸钠干燥，过滤得到滤液后浓缩至干得到片段1：fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh。
19、在一些实施方式中，第二肽片段的合成包括以下具体步骤：
20、（1）将ctc树脂加入到固相合成反应器中，加入dmf溶胀树脂，随后将fmoc-gly-oh溶于dmf并加入diea后混匀加入到固相反应器中，反应，抽干，dmf洗涤。加入dmf后继续加入甲醇及diea继续反应，抽干，dmf洗涤。
21、固相反应器中肽树脂用20%哌啶/dmf（v/v）溶液脱fmoc两次，完成后dmf洗涤，茚三酮检测结果呈阳性。称取fmoc-glu(otbu)-oh和hobt溶于dmf并加入dic活化，活化后将溶液加入到固相反应器中进行反应，茚三酮检测结果呈阴性，抽干，dmf洗。
22、重复上述步骤，按照肽序偶联剩余氨基酸，得到片段2：boc-z-aib-w-gly-oh肽树脂。
23、（2）上述肽树脂用1%tfa/dcm反应，过滤，收集滤液，加入适量纯化水萃取，得到有机层滤液加入无水硫酸钠干燥，滤液过滤后浓缩至干得到片段2：boc-z-aib-w-gly-oh。
24、第二方面，本技术提供了一种trizepatide的合成方法，其包括：
25、步骤s2：通过固相合成方法，将第一肽片段偶联至片段a上，得到如下片段b：
26、fmoc-x-ile-aib-leu-y-a1-ile-ala-a2-a3-ala-phe-val-a2-a4-leu-ile-ala-a5-gly-pro-x-x-gly-ala-pro-pro-pro-x-氨基树脂（seq id no:3），
27、其中，第一肽片段为：fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh；
28、步骤s3：通过固相合成方法，继续依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸，得到如下片段c：
29、fmoc-a6-phe-a6-x-y-z-x-ile-aib-leu-y-a1-ile-ala-a2-a3-ala-phe-val-a2-a4-leu-ile-ala-a5-gly-pro-x-x-gly-ala-pro-pro-pro-x-氨基树脂（seq id no:4）；
30、步骤s4：通过固相合成方法，将第二肽片段偶联至片段c上，得到如下全保护肽树脂：
31、boc-z-aib-w-gly-a6-phe-a6-x-y-z-x-ile-aib-leu-y-a1-ile-ala-a2-a3-ala-phe-val-a2-a4-leu-ile-ala-a5-gly-pro-x-x-gly-ala-pro-pro-pro-x-氨基树脂（seqid no:5），
32、其中，第二肽片段为：boc-z-aib-w-gly-oh，
33、其中，x代表具有侧链保护基tbu的ser（ser(tbu)），y代表具有侧链保护基otbu的asp（asp(otbu)），z代表具有侧链保护基tbu的tyr（tyr(tbu)），w代表具有侧链保护基otbu的glu（glu(otbu)），a1代表具有侧链保护基boc的lys（lys(boc)），a2代表具有侧链保护基trt的gln（gln(trt)），a3代表具有侧链保护基dde的lys（lys(dde)），a4代表具有侧链保护基boc的trp（trp(boc)），a5代表具有侧链保护基hmb的gly（(hmb)gly），a6代表具有侧链保护基tbu的thr（thr(tbu)）。
34、在一些实施方式中，x代表ser(tbu)。在一些实施方式中，y代表asp(otbu)。在一些实施方式中，z代表tyr(tbu)。在一些实施方式中，w代表glu(otbu)。在一些实施方式中， a1代表lys(boc)。在一些实施方式中，a2代表gln(trt)。在一些实施方式中，a3代表lys(dde)。在一些实施方式中，a4代表trp(boc)。在一些实施方式中，a5代表(hmb)gly。在一些实施方式中，a6代表thr(tbu)。
35、本技术在合成trizepatide肽树脂的过程中采用了常规的保护氨基酸后，还采用了上述特定的片段以及特殊氨基酸fmoc-(hmb)gly-oh和fmoc-lys(dde)-oh，可以减少在偶联过程中由于偶联困难从而导致缺失肽的产生，极大的提高了粗肽的纯度，提高了纯化收率。
36、在一些实施方式中，所述片段a通过如下步骤s1制备得到，
37、步骤s1：以氨基树脂为起始树脂，通过固相合成方法，按trizepatide的c端至n端顺序，在所述氨基树脂上依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸，得到如下片段a：
38、fmoc-a1-ile-ala-a2-a3-ala-phe-val-a2-a4-leu-ile-ala-a5-gly-pro-x-x-gly-ala-pro-pro-pro-x-氨基树脂（seq id no:2），其中，x、a1、a2、a3、a4和a5具有本文所述的定义。
39、在一些实施方式中，本技术提供的合成方法还包括以下步骤：
40、步骤s5：脱除第20位lys的保护基dde后，在lys侧链偶联肽链c20-otbu-rglu(otbu)-aeea-aeea-oh，得到trizepatide全保护肽树脂，结构为
41、boc-z-aib-w-gly-a6-phe-a6-x-y-z-x-ile-aib-leu-y-a1-ile-ala-a2-lys(c20-otbu-rglu(otbu)-aeea-aeea)-ala-phe-val-a2-a4-leu-ile-ala-a5-gly-pro-x-x-gly-ala-pro-pro-pro-x-氨基树脂（seq id no:6）。
42、在一些实施方式中，本技术提供的合成方法还包括以下步骤：
43、步骤s6：将步骤s5的trizepatide全保护肽树脂与裂解液混合后，进行裂解，得到裂解产物，将裂解产物进行过滤，滤液进行处理后，得到trizepatide粗品。
44、在一些实施方式中，本技术提供的合成方法还包括以下步骤：
45、步骤s7：将步骤s6的trizepatide粗品进行纯化，得到trizepatide精品。
46、在一些实施方式中，所述氨基树脂选自rink am树脂、rink mbha树脂和rinkamide am树脂中的一种或多种。
47、在一些实施方式中，所述氨基树脂的氨基取代度为0.3-0.4mmol/g树脂，例如为0.31mmol/g树脂、0.32mmol/g树脂、0.33mmol/g树脂、0.34mmol/g树脂、0.35mmol/g树脂、0.36mmol/g树脂、0.37mmol/g树脂、0.38mmol/g树脂或0.39mmol/g树脂。
48、在一些实施方式中，所述氨基树脂的摩尔量与所述n端fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)，例如为1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9或它们之间的任意值。
49、在一些实施方式中，步骤s1至步骤s5中，偶联的缩合剂选自n,n-二异丙基碳二亚胺（dic）、1-羟基苯并三唑（hobt）、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯（hbtu）、n,n-二异丙基乙胺（diea）、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷（pybop）和n,n-二异丙基乙胺（diea）中的一种或多种。
50、在一些实施方式中，步骤s1至步骤s5中，反应中采用的溶剂选自二氯甲烷（dcm）、n-甲基吡咯烷酮（nmp）和n,n-二甲基甲酰胺（dmf）中的一种或多种。
51、在一些实施方式中，步骤s1至步骤s4中，反应中采用的fmoc脱除试剂为哌啶/n,n-二甲基甲酰胺溶液。在一些实施方式中，哌啶/n,n-二甲基甲酰胺溶液中，哌啶的体积含量为10%-30%，例如为13%、15%、17%、20%、23%、25%或27%。在一些实施方式中，fmoc脱除试剂为20%哌啶/dmf溶液（v/v）。
52、在一些实施方式中，步骤s5中，采用水合肼/n,n-二甲基甲酰胺溶液脱除保护基dde。在一些实施方式中，水合肼/n,n-二甲基甲酰胺溶液中，水合肼的体积含量为0.5%-3%，例如为0.7%、0.9%、1.0%、1.3%、1.5%、1.7%、2.0%、2.3%、2.5%或2.7%。在一些实施方式中，采用1%水合肼/n,n-二甲基甲酰胺溶液脱除保护基dde。
53、在一些实施方式中，步骤s6中，所述裂解液包括三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯酚和水。
54、在一些实施方式中，步骤s6中，所述裂解液体积与trizepatide全保护肽树脂的质量比值为体积5ml:1g-15 ml:1g，例如为6ml:1g、7ml:1g、8ml:1g、9ml:1g、10ml:1g、11ml:1g、12ml:1g、13ml:1g或14ml:1g。
55、在一些实施方式中，步骤s6，滤液的处理包括，将滤液用甲基叔丁基醚进行沉降、离心，得到固体，将固体进行洗涤干燥。
56、在一些实施方式中，步骤s6中，所述裂解液由三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯酚和水组成。在一些实施方式中，三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯酚和水的体积比为(90-95):(2-5):(1-3):(1-3)。在一些实施方式中，三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯酚和水的体积比93:3:2:2。
57、在一些实施方式中，所述甲基叔丁基醚体积与trizepatide全保护肽树脂的质量比值为体积50ml:1g-150ml:1g，例如为60ml:1g、70ml:1g、80ml:1g、90ml:1g、100ml:1g、110ml:1g、120ml:1g、130ml:1g或140ml:1g。
58、在一些实施方式中，步骤s7中，所述纯化采用高效液相色谱法，其中，固定相为十八烷基合硅胶，流动相为三氟乙酸水溶液和乙腈。
59、在一些实施方式中，所述合成方法包括以下具体步骤：
60、（1）trizepatide肽树脂的合成
61、称取rink am resin树脂加入到固相合成反应器中，加入dmf溶胀树脂；抽干溶剂，加入20%哌啶/dmf溶液，脱保护反应。抽干，加入dmf洗涤；茚检结果树脂呈阳性。称取fmoc-ser(tbu)-oh和hobt加入dmf溶解澄清后再加入dic活化后加入到装有rink am resin反应器溶剂中，进行反应，反应后茚检检测结果呈阴性后，抽干；加入dmf洗涤。
62、重复以上步骤，按照多肽固相合成的方式进行偶联以下氨基酸序列：
63、s38:fmoc-pro-oh,s37:fmoc-pro-oh,s36:fmoc-pro-oh,s35:fmoc-ala-oh,
64、s34:fmoc-gly-oh,s33: fmoc-x-oh（fmoc-ser(tbu)-oh）,
65、s32:fmoc-x-oh（fmoc-ser(tbu)-oh）,s31:fmoc-pro-oh,
66、s30: fmoc-a5-oh（fmoc-(hmb)gly-oh）,s29:fmoc-gly-oh,
67、s28:fmoc-ala-oh,s27:fmoc-ile-oh,s26:fmoc-leu-oh,
68、s25: fmoc-a4-oh（fmoc-trp(boc)-oh）,
69、s24: fmoc-a2-oh（fmoc-gln(trt)-oh）,s23:fmoc-val-oh,
70、s22:fmoc-phe-oh,s21:fmoc-ala-oh,s20:fmoc-a3-oh（fmoc-lys(dde)-oh）,
71、s19: fmoc-a2-oh（fmoc-gln(trt)-oh）,s18:fmoc-ala-oh,s17:fmoc-ile-oh,
72、s16: fmoc-a1-oh（fmoc-lys(boc)-oh）,
73、片段1：fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh,
74、s10: fmoc-z-oh（fmoc-tyr(tbu)-oh）,s9: fmoc-y-oh（fmoc-asp(otbu)-oh）,
75、s8: fmoc-x-oh（fmoc-ser(tbu)-oh）,
76、s7: fmoc-a6-oh（fmoc-thr(tbu)-oh）,
77、s6:fmoc-phe-oh,s5:fmoc-a6-oh（fmoc-thr(tbu)-oh）,
78、片段2：boc-z-aib-w-gly-oh,
79、c20-otbu-rglu(otbu)-aeea-aeea-oh进行偶联反应；
80、偶联反应完成后，用dmf洗涤肽树脂后再用二氯甲烷/甲醇交替洗涤肽树脂；洗涤完成后进行真空干燥，得到trizepatide肽树脂。
81、（2）trizepatide肽树脂裂解
82、将肽树脂10.0g加入到反应器中，根据肽树脂的重量，按照体积配制裂解试剂tfa/tis/h2o/苯酚=93%/3.0%/2.0%/2.0% 100ml，配制完成后冰浴至5-10 ℃后加入到肽树脂中并将温度上升至25-30℃进行室温搅拌反反应结束后将树脂过滤，滤液用甲基叔丁基醚沉降，析出固体。沉降液离心得到固体，得到固体继续用甲基叔丁基醚洗涤后进一步干燥成trizepatide粗品。
83、（3）trizepatide精品制备
84、将得到的trizepatide粗品用少量氨水溶解澄清，过滤。以十八烷基合硅胶为固定相，用tfa水溶液及乙腈为流动相，对trizepatide粗品溶液进行hplc梯度洗脱，收集trizepatide馏分，得到trizepatide一次纯化溶液。trizepatide一次纯化溶液再次用十八烷基合硅胶为固定相，用乙酸钠水溶液及乙腈为流动相进行hplc梯度洗脱，得到trizepatide合格馏分，除去乙腈，进行冻干，得到trizepatide精肽。
85、在一些实施方式中，第一肽片段的合成包括：以ctc树脂为起始树脂，通过固相合成方法，在所述ctc树脂上依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸，得到具有如下结构的fmoc-x-ile-aib-leu-y-第一肽树脂，将所述第一肽树脂进行酸解，纯化，得到第一肽片段fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh。
86、在一些实施方式中，第二肽片段的合成包括：以ctc树脂为起始树脂，通过固相合成方法，在所述ctc树脂上依次偶联具有n端fmoc保护的氨基酸，得到具有如下结构的boc-z-aib-w-gly-第二肽树脂，将所述第二肽树脂进行酸解，纯化，得到第二肽片段boc-z-aib-w-gly-oh。
87、在一些实施方式中，第一肽片段的合成中，所述ctc树脂的摩尔量与所述n端fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)，例如为1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9或它们之间的任意值。
88、在一些实施方式中，第二肽片段的合成中，所述ctc树脂的摩尔量与所述n端fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)，例如为1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9或它们之间的任意值。
89、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，偶联的缩合剂选自n,n-二异丙基碳二亚胺（dic）、1-羟基苯并三唑（hobt）、o-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯（hbtu）、n,n-二异丙基乙胺（diea）、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷（pybop）和n,n-二异丙基乙胺（diea）中的一种或多种。
90、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，采用的溶剂选自二氯甲烷（dcm）、n,n-二甲基甲酰胺（dmf）和n-甲基吡咯烷酮（nmp）中的一种或多种。
91、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，反应中采用的fmoc脱除试剂为哌啶/n,n-二甲基甲酰胺溶液。
92、在一些实施方式中，第一肽片段和的第二肽片段合成中，酸解时采用的为三氟乙酸/二氯甲烷溶液。在一些实施方式中，三氟乙酸/二氯甲烷溶液中，三氟乙酸的体积含量为0.5%-3%，例如为0.7%、0.9%、1.0%、1.3%、1.5%、1.7%、2.0%、2.3%、2.5%或2.7%。在一些实施方式中，酸解时采用的为1%三氟乙酸/二氯甲烷溶液（v/v）。
93、在一些实施方式中，第一肽片段的合成包括以下具体步骤：
94、（1）将ctc树脂加入到固相合成反应器中，加入dmf溶胀树脂，随后将fmoc-asp(otbu)-oh溶于dmf并加入diea后混匀加入到固相反应器中，反应，抽干，dmf洗涤4次。加入dmf后继续加入甲醇及diea继续反应，抽干，dmf洗涤。
95、固相反应器中肽树脂用20%哌啶/dmf（v/v）溶液脱fmoc两次，完成后dmf洗涤，茚三酮检测结果呈阳性。称取fmoc-leu-oh和hobt溶于dmf并加入dic活化，活化后将溶液加入到固相反应器中进行反应，茚三酮检测结果呈阴性，抽干，洗涤。
96、重复上述步骤，按照肽序偶联剩余氨基酸，得到片段1：fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh肽树脂
97、（2）上述肽树脂用1%tfa/dcm反应，过滤，收集滤液，加入纯化水萃取，得到有机层滤液加入无水硫酸钠干燥，过滤得到滤液后浓缩至干得到片段1：fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh。
98、在一些实施方式中，第二肽片段的合成包括以下具体步骤：
99、（1）将ctc树脂加入到固相合成反应器中，加入dmf溶胀树脂，随后将fmoc-gly-oh溶于dmf并加入diea后混匀加入到固相反应器中，反应，抽干，dmf洗涤。加入dmf后继续加入甲醇及diea继续反应，抽干，dmf洗涤。
100、固相反应器中肽树脂用20%哌啶/dmf（v/v）溶液脱fmoc两次，完成后dmf洗涤，茚三酮检测结果呈阳性。称取fmoc-glu(otbu)-oh和hobt溶于dmf并加入dic活化，活化后将溶液加入到固相反应器中进行反应，茚三酮检测结果呈阴性，抽干，dmf洗。
101、重复上述步骤，按照肽序偶联剩余氨基酸，得到片段2：boc-z-aib-w-gly-oh肽树脂。
102、（2）上述肽树脂用1%tfa/dcm反应，过滤，收集滤液，加入适量纯化水萃取，得到有机层滤液加入无水硫酸钠干燥，滤液过滤后浓缩至干得到片段2：boc-z-aib-w-gly-oh。
103、本技术的有益效果是：本技术在trizepatide的合成中采用特定的片段和氨基酸，可以减少在偶联过程中由于偶联困难从而导致缺失肽的产生，极大的提高了粗肽的纯度，提高了纯化收率。
技术特征：
1.一种用于合成trizepatide的组合物，其包括第一肽片段和第二肽片段，其中第一肽片段为fmoc-x-ile-aib-leu-y-oh（seq id no:1），第二肽片段为boc-z-aib-w-gly-oh，
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括氨基酸fmoc-(hmb)gly-oh，氨基酸fmoc-lys(dde)-oh和/或肽链c20-otbu-rglu(otbu)-aeea-aeea-oh，c20代表二十烷二酸；和/或
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，第一肽片段的合成中，所述ctc树脂的摩尔量与所述n端fmoc保护的氨基酸的总摩尔量的比值为1:(2-3)；和/或
4.一种trizepatide的合成方法，其采用权利要求1-3中任一项所述的组合物，包括以下步骤：
5. 根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，所述氨基树脂选自rink am树脂、rink mbha树脂和rink amide am树脂中的一种或多种；和/或
6. 根据权利要求4或5所述的合成方法，其特征在于，
7. 根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，
8. 根据权利要求7所述的合成方法，其特征在于，步骤s6中，所述裂解液由三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯酚和水组成，其中，三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯酚和水的体积比为(90-95):(2-5):(1-3):(1-3)；和/或
技术总结
本申请涉及一种用于合成Trizepatide的组合物及Trizepatide的合成方法。本申请提供的用于合成Trizepatide的组合物包括第一肽片段和第二肽片段，其中，第一肽片段为Fmoc‑X‑Ile‑Aib‑Leu‑Y‑OH，第二肽片段为Boc‑Z‑Aib‑W‑Gly‑OH。本申请在Trizepatide的合成中采用特定的片段和氨基酸，可以减少在偶联过程中由于偶联困难从而导致缺失肽的产生，极大的提高了粗肽的纯度，提高了纯化收率。
技术研发人员：骆亚,李广华,伍月龄
受保护的技术使用者：深圳佳肽生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23