用于大规模反相高效液相色谱纯化的新型固定相的制作方法

本发明涉及具有1至250埃的细孔尺寸并且包含硅烷基团的二氧化硅颗粒，所述硅烷基团包含两个各自独立地选自烷基、芳基、烷基芳基、杂烷基、杂芳基和杂烷基芳基的基团。本发明还涉及制备此类二氧化硅颗粒的方法以及此类二氧化硅颗粒作为固定相用于纯化经修饰的缀合肽诸如glp-1激动剂或glp-2类似物的用途。

背景技术：

1、反相hplc(高效液相色谱)是一种用于分离、鉴定和定量给定混合物中所含的所有组分的常用技术。在药物领域，hplc特别适合于实现药物、特别是具有较高分子量的药物诸如经修饰的缀合肽的所需高级纯化。hplc的基本原理是，将待纯化的混合物与液体溶剂一起在压力下泵送到填充有固体吸附剂材料(即所谓的固定相，通常为基于二氧化硅的材料)的柱中。待分离的混合物的每种组分与吸附剂材料的相互作用略有不同，这通常是由于这些组分与吸附剂材料表面和/或吸附剂材料孔尺寸或多或少显著的物理-化学相互作用。这种相互作用导致不同组分的流速不同并导致混合物组分的分离。当不同组分从柱中流出时，它们可以不同的级分收集。

2、有许多不同的吸附剂材料可用于现有的hplc柱。二氧化硅颗粒受到特别关注，已发现从分离结果、成本和原材料可得性的角度来看，二氧化硅颗粒是非常合适的。在优化这些针对hplc用途的二氧化硅颗粒时，特别关注的是颗粒尺寸以及颗粒的孔尺寸。然而，也已做出一些努力来用官能团改性二氧化硅颗粒以微调固定相中的吸附剂材料与待分离的混合物中的任何潜在组分的物理-化学相互作用。例如，us 9,670,067 b2描述了用包含卤代醇基团的有机基团对二氧化硅颗粒进行改性。同样，us10,690,6365b2公开了用c8或c18基团改性的二氧化硅颗粒。在us 7,537,703 b2中，已用正丁基对二氧化硅颗粒进行改性。

3、已发现经修饰的缀合肽在其纯化方面具有挑战性。据推测，这是由于它们的分子量相对较高，这使得从分子量有些相似的杂质肽中分离所需肽变得繁琐。为了纯化此类缀合肽，通常需要不止一个纯化步骤。然而，从商业角度来看，纯化步骤的数目理想地应限制为仅两个，同时获得商业上高度纯化的缀合肽的可接受的收率。在药物领域，通常目标纯度(即选择性)至少为>99.5％。因此，商业上合适的用于固定相的二氧化硅应该适合于实现将混合物的组分分离成理想情况下仅含有一种纯组分的级分(即纯度至少>99.5％)，从而同时实现该一种纯化合物的高选择性和高回收率(即总收率)。换句话说，对于商业上合适的hplc固定相来说，某些级分可能含有高纯度的化合物是不够的。相反，这种高纯度化合物的总收率也是一个重要因素。商业相关的总收率例如至少为70％；优选至少75％，甚至更优选至少80％。

4、具有药物意义的缀合肽的实例例如是glp-1(胰高血糖素样肽1)受体激动剂和glp-2(胰高血糖素样肽2)类似物。这些类型的缀合肽用于肥胖治疗。商业相关的glp-1受体激动剂例如是索马鲁肽(semaglutide)，其是一种用于治疗2型糖尿病的抗糖尿病药物以及作为用于长期体重管理的抗肥胖药物。另一种商业相关的glp-1受体激动剂是利拉鲁肽(liraglutide)(n-ε-(γ-glu(n-α-十六烷酰基)))-lys26arg34-glp-1(7-37)，也称为nn2211。利拉鲁肽已批准用于治疗2型糖尿病和用于治疗成人肥胖症。

5、然而，除了上面已经描述的在纯化缀合肽时通常遇到的问题之外，还发现胰高血糖素样肽的纯化特别有要求，因为它们倾向于形成聚集体，特别是在酸性ph下。

6、总之，仍然需要改进的用于hplc应用的固定相，特别是用于纯化药物诸如高分子量分子，例如经修饰的缀合肽如glp-1受体激动剂和glp-2类似物，特别是用于利拉鲁肽和索马鲁肽。特别是，需要改进的用于hplc应用的二氧化硅颗粒，其在选择性(即纯度)和回收率(即收率)方面具有改进的分离性能，并且同时理想地容易获得、易于利用并且对环境无害。此外，还需要提供用于制备此类改进的二氧化硅颗粒的方法，该二氧化硅颗粒可用于hplc应用以成功且有效地纯化经修饰的缀合肽如glp-1受体激动剂和glp-2类似物。

7、因此，本发明涉及寻找此类改进的二氧化硅颗粒及其生产方法。已经发现，上述问题可以通过改进的二氧化硅颗粒来解决，所述二氧化硅颗粒具有1至250埃的细孔尺寸并且包含硅烷基团，所述硅烷基团包含两个各自独立地选自烷基、芳基、烷基芳基、杂烷基、杂芳基和杂烷基芳基的基团。

技术实现思路

1、在第一方面，本发明涉及一种二氧化硅颗粒，其具有1至250埃的细孔尺寸并且包含根据下式的硅烷基团：

2、

3、其中r1和r2各自独立地选自烷基、芳基、烷基芳基、杂烷基、杂芳基和杂烷基芳基；r为氢或二氧化硅；并且sio2为二氧化硅。

4、在第二方面，本发明还涉及一种用于制备二氧化硅颗粒的方法，其包括以下步骤：

5、(i)提供具有1至250埃的细孔尺寸的二氧化硅颗粒；和

6、(ii)用具有下式的化合物对二氧化硅颗粒进行改性

7、

8、其中r1和r2各自独立地选自烷基、芳基、烷基芳基、杂烷基、杂芳基和杂烷基芳基；并且x1和x2独立地为卤素或烷氧基。

9、本发明甚至还涉及根据第一方面的二氧化硅颗粒或通过根据第二方面的方法获得的二氧化硅颗粒作为固定相用于纯化经修饰的缀合肽、优选glp-1激动剂或glp-2类似物的用途。

技术特征：

1.一种二氧化硅颗粒，其具有1至的细孔尺寸并且包含根据下式的硅烷基团：

2.根据权利要求1所述的二氧化硅颗粒，其中所述细孔尺寸为50至

3.根据权利要求1或2所述的二氧化硅颗粒，其中r1和r2相同。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的二氧化硅颗粒，其中r1和r2为烷基，优选c2-c20支化或非支化的烷基。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的二氧化硅颗粒，其中r1和r2为c2-c10非支化的烷基，优选c4-c8非支化的烷基。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的二氧化硅颗粒，其中所述二氧化硅颗粒的平均粒径为0.1μm至100μm，优选1μm至50μm。

7.一种用于制备二氧化硅颗粒的方法，其包括以下步骤：

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述细孔尺寸为50埃至

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中r1和r2相同。

10.根据权利要求7-9中任一项所述的方法，其中r1和r2为烷基，优选c2-c20支化或非支化的烷基，更优选c2-c10非支化的烷基，甚至更优选c4-c8非支化的烷基。

11.根据权利要求7-10中任一项所述的方法，其中x1和x2为氯。

12.通过根据权利要求7-11中任一项所述的方法获得的二氧化硅颗粒。

13.色谱分离柱，其包含根据权利要求1-6中任一项所述的二氧化硅颗粒或通过根据权利要求7-11中任一项的方法获得的二氧化硅颗粒。

14.根据权利要求1-6中任一项所述的二氧化硅颗粒或通过权利要求7-11中任一项所述的方法获得的二氧化硅颗粒作为固定相用于纯化经修饰的缀合肽、优选glp-1激动剂或glp-2类似物的用途。

15.根据权利要求14所述的用途，其中所述经修饰的缀合肽为索马鲁肽或利拉鲁肽。

技术总结
本发明涉及具有1至250埃的细孔尺寸并且包含硅烷基团的二氧化硅颗粒，所述硅烷基团包含两个各自独立地选自烷基、芳基、烷基芳基、杂烷基、杂芳基和杂烷基芳基的基团。本发明还涉及制备此类二氧化硅颗粒的方法以及此类二氧化硅颗粒作为固定相用于纯化经修饰的缀合肽诸如GLP‑1激动剂或GLP‑2类似物的用途。

技术研发人员：T·勒·宾·德兰,B·西格瓦德·佩尔森
受保护的技术使用者：诺力昂化学品国际有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23