一种海洋真菌来源的甾体类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用

本发明属于药物化合物。更具体地，涉及一类海洋真菌来源的甾体类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术：

1、根据who报告，2020年全球因癌症死亡人数达到上千万，表明癌症仍是导致全球疾病死亡的主要原因。然而，目前大多数临床抗肿瘤药物都有很大的副作用，同时也存在肿瘤耐药和复发的可能性。因此为解决抗肿瘤药物的耐受性及不良反应，寻找新的抗肿瘤药物以及相关新颖骨架类型的药物成为抗肿瘤药物研究领域的热点。

2、天然产物是药物先导化合物的重要来源。海洋真菌来源的天然产物，具有可持续性，对环境友好，代谢产物丰富多样等特点，一直是药物筛选的重要源头。目前已有多个新骨架化合物从海洋真菌中被发现，这些新型骨架的天然产物不仅具有独特的化学结构和显著的药理活性，还可能在体内结合新的蛋白或者靶点，进而帮助研究人员发现与现有药物不同的作用机制，从而助力于新药研发。

3、因此，探索海洋真菌来源的新骨架化合物并对于抗肿瘤药物研究意义重大。

技术实现思路

1、本发明旨在从天然产物中开发新的抗肿瘤药物新选择，研究获得了一种海洋真菌来源的甾体类化合物，该化合物具有显著抑制多种肿瘤细胞增殖的作用。

2、本发明的第一个目的是提供一种海洋真菌来源的甾体类化合物。

3、本发明的第二个目的是提供一株talaromyces sp.jnqqj-4菌株及其应用。

4、本发明的第三个目的是提供上述甾体类化合物的制备方法。

5、本发明的第四个目的是提供上述甾体类化合物和上述菌株的应用。

6、本发明的第五个目的是提供一种抗肿瘤药物。

7、本发明上述目的通过以下技术方案实现：

8、本发明从广东湛江金牛岛红树林植物秋茄(kandelia candel)的新鲜叶子中分离得到一株海洋蓝状菌属真菌talaromyces sp.jnqqj-4，并经过大量研究，进一步从该菌株的发酵产物中研究分离得到一种新型的甾体类化合物。该化合物具有显著抑制多种肿瘤细胞增殖的作用。

9、因此，本发明提供一株talaromyces sp.jnqqj-4菌株，所述talaromycessp.jnqqj-4菌株于2024年5月24日保藏于在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno：64682。

10、进一步，本发明提供一种甾体类化合物，所述甾体类化合物的结构式如式(i)所示：

11、

12、本发明还提供talaromyces sp.jnqqj-4菌株在制备上述甾体类化合物中的应用。

13、本发明还提供上述甾体类化合物的制备方法，所述方法为由上述talaromycessp.jnqqj-4菌株的发酵产物中分离获得所述甾体类化合物。

14、作为一种可选择的实施方案，所述甾体类化合物的制备方法包括如下步骤：

15、s1.将所述talaromyces sp.jnqqj-4菌株接入种子培养基中进行培养，得到种子培养液；

16、s2.将s1所得种子培养液接入发酵培养基中进行培养，得到发酵产物；

17、s3.将发酵产物过滤得到菌体，菌体用甲醇提取获得提取液，浓缩提取液得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯粗提物，将乙酸乙酯粗提物用硅胶正相色谱层析进行分离；用石油醚/乙酸乙酯进行洗脱，收集40％～60％乙酸乙酯/石油醚部分，再依次以凝胶、硅胶、nd正相柱层析分离技术进行分离，即得到式i所示的甾体类化合物。

18、作为可选择的实施方案，所述种子培养基的组成按重量比为：葡萄糖0.2～0.4％，酵母提取物0.05～0.15％，蛋白胨0.1％～0.5％，氯化钠1.5％～4％，水94.95～98.15％。优选地，所述种子培养基的组成按重量比为：葡萄糖0.3％，酵母提取物0.1％，蛋白胨0.5％，氯化钠3％，水96.1％。

19、作为可选择的实施方案，步骤s1中所述培养的条件为170～200rpm，28～35℃培养4～7天。优选地，步骤s1中所述培养的条件为180rpm，30℃培养6天。

20、作为优选的实施方案，所述发酵培养基为固体大米发酵培养基，其制备方法为大米与海水按照(6～8)：(2～4)的质量比混合，更优选地，大米与海水按照7：3的质量比混合。

21、作为可选择的实施方案，步骤s2中所述培养的条件为在25～35℃静置25～30天。优选在30℃静置30天。

22、优选地，步骤s3中所述石油醚/乙酸乙酯进行洗脱为梯度洗脱。

23、更优选地，步骤s3中所述石油醚/乙酸乙酯进行梯度洗脱过程中，石油醚在洗脱过程中体积分数变化为：90％→80％→70％→60％→50％→40％→30％；乙酸乙酯在洗脱过程中体积分数变化为：10％→20％→30％→40％→50％→60％→70％。

24、优选地，步骤s3中所述依次以凝胶、硅胶、nd正相柱层析分离技术进行分离的具体方法为：将收集的组分用甲醇溶解后，用二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂(二氯甲烷与甲醇的体积比为1：1)，经sephadex lh-20凝胶色谱柱分离，所得组分按由先到后顺序依次标记为组分1和2(经薄层层析tlc检测)；所得组分2经溶解(用二氯甲烷/甲醇溶解)用硅胶拌样后装柱，用二氯甲烷/甲醇(二氯甲烷与甲醇的体积比为100：1)洗脱，所得组分顺序由极性从大到小依次标记为组分fr.2.1、fr.2.2、fr.2.3(经薄层层析tlc检测)，组分fr.2.2即为化合物i粗样。将化合物i粗样用正己烷/异丙醇溶解后，以正己烷/异丙醇(v/v 70：30，flow＝1.0ml/min)作为洗脱剂，经半制备高效液相(nd手性柱)纯化，即得到式i所示的甾体类化合物。

25、本发明研究显示，从talaromyces sp.jnqqj-4菌株发酵产物中分离得到的甾体类化合物具有显著抑制多种肿瘤细胞的作用，因此本发明还提供以下应用方案：

26、上述甾体类化合物或上述菌株或上述菌株的发酵产物在制备抗肿瘤药物中的应用。

27、上述甾体类化合物或上述菌株或上述菌株的发酵产物在制备抗黑色素瘤药物中的应用。

28、上述甾体类化合物或上述菌株或上述菌株的发酵产物在制备抗肝癌药物中的应用。

29、上述甾体类化合物或上述菌株或上述菌株的发酵产物在制备抗卵巢癌药物中的应用。

30、上述甾体类化合物或上述菌株或上述菌株的发酵产物在制备抗肺癌药物中的应用。

31、本发明提供一种抗肿瘤药物，其含有上述甾体类化合物或上述talaromycessp.jnqqj-4菌株的发酵产物。

32、本发明具有以下有益效果：

33、本发明提供一种海洋真菌来源的甾体类化合物，该化合物具有显著抑制mda-mb-435s，hepg2，skov3，skov3r，a2780和a549等多种肿瘤细胞增殖的作用，其ic50可分别达到11.11μm，27.22μm，28.47μm，32.66μm，21.31μm和19.19μm，可用于制备抗黑色素瘤、肝癌、卵巢癌和肺癌的药物，为多种肿瘤的治疗提供了一种新的药物。

34、另外，该化合物来源于天然微生物，可通过微生物发酵即可获得，制备方法简单。

35、因此，本发明提供的甾体类化合物具有很好的抗肿瘤治疗的临床应用潜力，具有重要的应用价值。

技术特征：

1.一种甾体类化合物，其特征在于，所述甾体类化合物的结构式如式(i)所示：

2.一株talaromyces sp.jnqqj-4菌株，其特征在于，所述talaromyces sp.jnqqj-4菌株于2024年5月24日保藏于在广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmcc no：64682。

3.权利要求2所述talaromyces sp.jnqqj-4菌株在制备权利要求1所述甾体类化合物中的应用。

4.权利要求1所述甾体类化合物的制备方法，其特征在于，由权利要求2所述talaromyces sp.jnqqj-4菌株的发酵产物中分离获得所述甾体类化合物。

5.权利要求1所述甾体类化合物或权利要求2所述菌株或所述菌株的发酵产物在制备抗肿瘤药物中的应用。

6.权利要求1所述甾体类化合物或权利要求2所述菌株或所述菌株的发酵产物在制备抗黑色素瘤药物中的应用。

7.权利要求1所述甾体类化合物或权利要求2所述菌株或所述菌株的发酵产物在制备抗肝癌药物中的应用。

8.权利要求1所述甾体类化合物或权利要求2所述菌株或所述菌株的发酵产物在制备抗卵巢癌药物中的应用。

9.权利要求1所述甾体类化合物或权利要求2所述菌株或所述菌株的发酵产物在制备抗肺癌药物中的应用。

10.一种抗肿瘤药物，其特征在于，含有权利要求1所述甾体类化合物或权利要求2所述talaromyces sp.jnqqj-4菌株的发酵产物。

技术总结
本发明公开了一种海洋真菌来源的甾体类化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。所述甾体类化合物的结构式如式(I)所示，该化合物对MDA‑MB‑435S、HepG2、SKOV3、SKOV3R、A2780、A549等多种肿瘤细胞具有很强的抗增殖作用，可用于制备抗肿瘤药物，尤其是抗黑色素瘤、肝癌、卵巢癌和肺癌药物，为多种肿瘤的治疗提供了一种新的药物。另外，该化合物来源于天然微生物，可通过微生物发酵即可获得，制备方法简单。因此，本发明提供的甾体类化合物具有很好的抗肿瘤治疗的临床应用潜力，具有重要的应用价值。

技术研发人员：佘志刚,王贵声,袁洁,萧旭汉
受保护的技术使用者：中山大学
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23