一种风疹病毒IgG抗体检测体系的制作方法

本发明属于体外检测，涉及一种抗体检测体系，具体涉及一种风疹病毒igg抗体检测体系。

背景技术：

1、风疹病毒(rubella virus)是一种通过呼吸道传播的病毒，可引起风疹，这是一种通常症状轻微的急性呼吸道传染病。然而，风疹对孕妇和胎儿的潜在危害极大，尤其是在孕早期感染风疹病毒时，可能导致流产、死胎或胎儿感染，引发先天性风疹综合征(congenital rubella syndrome,crs)，包括白内障、神经性耳聋、先天性心脏病和智力低下等严重后果。因此，风疹病毒的实验室诊断对于确保优生优育具有重要意义，而风疹病毒igg抗体检测是评估个体免疫状态、诊断急性风疹感染及预防措施效果的关键。

2、目前，风疹病毒igg抗体的检测方法包括酶联免疫吸附法(elisa)、免疫印迹法(western blot,wb)、胶体金法、聚合酶链反应(pcr)等。这些方法各有优缺点：elisa操作简便、灵敏度较高，但定量准确性较差；wb操作复杂，不易掌控；胶体金法灵敏度较低，只能定性；pcr对检测条件和技术要求高，不适合常规临床检测。化学发光免疫分析法因其灵敏度高、定量准确、操作简单、检测时间短等优点而受到重视，比如专利cn112763721a、专利cn109444428a等都提供了igg抗体化学发光免疫检测试剂盒，这些试剂盒能够大大缩短临床检测所需的时间，且具有较高的检测精度。

3、对健康人而言，待测物质往往不存在，或含量极低，这也就意味着其医学决定水平往往不会很高。在igm或抗原的检测中尤为如此；另一方面，对急性感染的个体而言，又可能会出现很高的浓度水平，甚至超出试剂的检测上限，现有技术陷于单一的套用间接法、捕获法测定抗体，拘泥于通过优化配方、反应体系、反应参数来缓解，而非解决系统性的缺陷，在实际检验工作中，对于高值样本，将其适当预稀释后进行检测是较好的解决方案，但这对于临床检验而言较为繁琐，而对于低值样本，则只能依赖于试剂本身的灵敏度。

4、从研发角度，为了进一步拓宽试剂检测范围、增强对于高值样本的检测能力，研发人员往往会增加试剂的浓度。但这必然导致成本的上升，往往也会导致检测本底的升高，最终牺牲了低端部分的灵敏度。反之，为了确保低端具有较好的灵敏度，往往也会损失对高值样本的检测能力。

技术实现思路

1、本发明的术语和声明：

2、1、如本文所用，冠词"一个"、"一种"和"所述"：除非以其它方式明确地限定到一个(种)对象，否则包括复数的对象。

3、2、如本文所用，数值范围：除非以其他方式明确指出，本文中公开的所有范围或比率将会被理解为包括其中包含的任何和所有的子范围或子比率。例如，声明的1至30的范围或比率应当被认为包含在最小值1和最大值30之间，并且包括断端点在内的任何子范围或子比率、整数、小数或由整数或小数构成的子范围或子比率。

4、3、磁珠：化学发光免疫中常用的一种固相载体。

5、4、igg:具有特定特征，而被分类为g亚型的抗体。可识别特定抗原，并特异性的结合。

6、5、igm:具有特定特征，而被分类为m亚型的抗体。相对于igg，相对分子量较大，且可同时特异性的结合更多抗原。

7、6、抗人igg抗体：一种抗体，可特异性的识别人的igg。一般为来源于小鼠或其他动物的igg。

8、7、抗人igm抗体：一种抗体，可特异性的识别人的igm。一般为来源于小鼠或其他动物的igg。

9、8、ivd：体外检测(in vitro diagnosis)。泛指利用各种样本(血液，尿液等)在人体之外检测特定生理物质的技术。

10、10、化学发光：一种ivd检测体系，特征为通过抗原/抗体特异识别待测物质，通过标志物给出光信号，反馈待测物质的有无。

11、11、检测本底：试剂在测试不含目标物质的样本时，所报告的信号结果。一般而言信号越低，越有利于和病理样本进行区分。

12、12、免疫比浊：类似于化学发光，通过抗原抗体特异结合识别待测物质，但通过吸光度而非标记物进行信号反馈

13、13、crp：c反应蛋白(c-reactive protein)，一种标志物。

14、14、平衡位点：生化反应往往不一定反应完全，而是在将一定比例的原料转化为产物后便进入动态平衡，这个状态时原料和产物的所处的比例被称为平衡位点。

15、15、poct：即时检验(point-of-care testing)，指在病人旁边进行的临床检测及床边检测。是在采样现场即刻进行分析，省去标本在实验室检验时的复杂处理程序，快速得到检验结果的一类新方法。例如验孕棒

16、16、elisa:酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay)，指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法

17、17、蛋白a：一种细胞壁蛋白，可与人类大多数类型的igg(igg3除外)的fc段结合，但很少或几乎不与人类的igm结合。

18、18、cut off：也叫临界值，一个厂家提供的经验值。是用来判定检测结果是高于还是低于临床或者分析的决策点

19、19、sa磁珠：一种磁珠，表面修饰有链霉亲和素。

20、20、链霉亲和素：一种蛋白，可特异性的识别生物素，并与生物素结合。

21、21、生物素：一种物质。行业内存在大量以此为基底的试剂，已经公开且商业化。在特定反应条件下，可与目标物质结合。结合后，对目标物质的影响较小，且仍然可被链霉亲和素识别。

22、本发明中对于抗体含义的示例如下：

23、“igg抗体”也称为igg，是免疫球蛋白g(immunoglobulin g，igg)的缩写。igg抗体是血清中主要的抗体成分，病原体特异性igg抗体是人体的免疫细胞针对病原体所产生的一种蛋白质。如果单纯的病原体特异性igg抗体阳性，一般提示既往感染，如甲型肝炎病毒、风疹病毒或者巨细胞病毒的既往感染等。

24、“抗igg抗体”指能够与igg抗体(igg)发生特异性结合的抗体，在一些理解中，可以解释为一种二抗。抗体具有双重性，既可以作为抗体与相应抗原结合，也可以作为抗原再制备相应抗体，即常说的第二抗体。本发明所述“抗igg抗体”即当igg抗体作为抗原时对应的抗体。“抗人igg抗体”表示当人igg抗体作为抗原时对应的抗体。

25、本发明针对现有技术存在的问题，结合了捕获法和双抗原夹心法，并选择了更为合适的风疹病毒抗原、抗人igg抗体和抗人igm抗体，提供了一种风疹病毒igg抗体检测体系，该体系具有兼顾低端灵敏度和高值检测能力等优点。

26、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

27、一方面，本发明提供一种检测体系，该体系包括以下组分：

28、(1)连有风疹抗原1和抗人igg抗体的固相载体；

29、(2)含有抗人igm抗体的样本稀释液

30、(3)含检测标记的风疹抗原2，得到含标记的免疫复合物；

31、具体地，所述风疹抗原1购买自菲鹏生物股份有限公司，产品名为rv-ag-e3-001；所述风疹抗原2购买自北京科跃中楷生物技术有限公司，货号er01n001；所述抗人igg抗体购买自菲鹏生物股份有限公司，产品名为抗人igg-2#。

32、具体地，所述的连有风疹抗原1和抗人igg抗体的固相载体优选磁珠，风疹抗原1和抗人igg抗体通过生物素化与磁珠连接，风疹抗原1和抗人igg抗体可以偶联到同一个磁珠上，也可以偶联到两种磁珠上。

33、具体地，所述的检测标记优选吖啶酯。

34、另一方面，本发明提供一种该体系的使用方法，使用该检测体系检测风疹抗原igg包括以下步骤：

35、(1)风疹抗原1和抗人igg抗体通过生物素化与磁珠相连，得到磁珠组分；

36、(2)样本中加入含抗igm抗体的样本稀释液得稀释后样本；

37、(3)将稀释后样本同磁珠组分混合并进行孵育和洗涤；

38、(4)加入含吖啶酯标记的风疹抗原2，得到含标记的免疫复合物；

39、(5)测定免疫复合物发光强度检测igg抗体。

40、具体地，所述的磁珠与生物素化风疹抗原1的偶联质量比例在1000:1-1000:5之间，磁珠与生物素化抗人igg抗体的偶联质量比例在1000:1-1000:20之间，偶联后的成品磁珠工作浓度在0.1-0.5mg/ml之间。

41、具体地，抗人igm抗体的使用浓度在0.005-0.1mg/ml之间。

42、具体地，吖啶酯与风疹抗原2的质量比为1：10，含吖啶酯标记的风疹抗原2工作浓度在0.005-0.05μg/ml之间。

技术特征：

1.一种风疹病毒igg抗体检测体系，其特征在于：所述的风疹病毒igg抗体检测体系包括：连有风疹抗原1和抗人igg抗体的固相载体、含检测标记的风疹抗原2；所述的风疹抗原1购买自菲鹏生物股份有限公司，产品名为rv-ag-e3-001；所述的抗人igg抗体购买自菲鹏生物股份有限公司，产品名为抗人igg-2#；所述的风疹抗原2购买自北京科跃中楷生物技术有限公司，货号er01n001。

2.根据权利要求1所述的风疹病毒igg抗体检测体系，其特征在于，所述的检测标记为发光标记，所述的发光标记为化学发光标记，选自：鲁米诺、异鲁米诺、吖啶酯、三联吡啶钌中的任意一种或多种。

3.根据权利要求1所述的风疹病毒igg抗体检测体系，其特征在于：所述的固相载体为磁珠。

4.根据权利要求3所述的风疹病毒igg抗体检测体系，其特征在于：风疹抗原1和抗人igg抗体通过生物素化，与磁珠相连。

5.根据权利要求4所述的风疹病毒igg抗体检测体系，其特征在于：风疹抗原1和抗人igg抗体可以与同一个磁珠偶联或者分别与不同磁珠偶联。

6.根据权利要求5所述的风疹病毒igg抗体检测体系，其特征在于：所述的磁珠与生物素化的风疹抗原1的偶联质量比为1000:1-1000:5；所述的磁珠与生物素化的抗人igg抗体的偶联质量比为1000:1-1000:20；偶联后的成品磁珠工作浓度为0.1-0.5mg/ml。

7.根据权利要求1所述的风疹病毒igg抗体检测体系，其特征在于：还包括含抗人igm抗体的样本稀释液，所述的抗人igm抗体的使用浓度在0.005-0.1mg/ml。

8.根据权利要求2所述的一种风疹病毒igg抗体检测体系，其特征在于：所述的检测标记为吖啶酯，所述的含吖啶酯标记的风疹抗原2，吖啶酯与风疹抗原2的质量比为1：10；标记的风疹抗原2的工作浓度为0.005-0.05μg/ml。

9.权利要求1所述的风疹病毒igg抗体检测体系在制备用于检测风疹病毒igg抗体的试剂盒中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒的检测包括以下步骤：

11.一种试剂盒，其特征在于：包含权利要求1-8任一项所述的风疹病毒igg抗体检测体系。

12.权利要求11所述的试剂盒在非疾病诊断或治疗的风疹病毒igg抗体检测中的应用。

13.一种检测风疹病毒igg抗体的方法，其特征在于：所述的方法非疾病诊断或治疗方法，包括以下步骤：

技术总结
本发明提供了一种风疹病毒IgG抗体检测体系，涉及体外检测技术领域，所述体系包含偶联风疹抗原1和抗IgG抗体的固相载体以及含检测标记的风疹抗原2，该检测体系应用于风疹病毒IgG抗体检测能够兼顾低端灵敏度以及高值样本的检测能力。

技术研发人员：沈一如,薛雅坤,纪德欢
受保护的技术使用者：苏州颐坤生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23