一种用于禽腺病毒的灭活疫苗的制作方法
本发明属于生物，涉及一种用于禽腺病毒的灭活疫苗。
背景技术：
1、禽腺病毒(fowl adenovirus，fadv)是世界家禽、野禽常发的传染性疾病，感染后发病快、病死率高，易造成混合感染，给家禽养殖业造成了巨大的经济损失。最新的分类方法把禽腺病毒分为三个属，即禽腺病毒属、唾液腺病毒属和腺胸腺病毒属，对应原分类方法的i群、ii群和iii群。禽腺病毒属又细分5个种(a、b、c、d、e)，12个血清型(1-11型，其中8型分为8a、8b两个型)，其种型对应关系为：a(1)、b(5)、c(4、10)、d(2、3、9、11)和e(6、7、8a、8b)。
2、fadv为无囊膜的双股dna病毒，呈20面体对称的结构，表面由252个壳粒组成，中间包裹着直径为60-65nm的髓芯，即病毒核酸。
3、禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4，fadv-4)是家禽心包积液-肝炎综合症(hydropericardium-hepatitis syndrome，hhs)的主要病原体。该病毒主要感染3-5周龄鸡、5-10周龄品种鸭和鹅,感染的初期没有明显症状，一周后开始出现精神沉郁、腿软无力、拉白色或淡绿色稀粪等症状，解剖有明显的浅黄色透明的心包积液和肝脏肿大以及出血的现象。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种用于禽腺病毒的灭活疫苗。
2、本发明保护灭活后gx2019-014毒株在制备禽腺病毒疫苗中的应用。
3、本发明还保护灭活后gx2019-014毒株在制备用于预防和/或治疗家禽心包积液-肝炎综合症的药物中的应用。
4、本发明还保护一种禽腺病毒疫苗，其包括灭活后gx2019-014毒株。
5、本发明还保护一种油乳剂禽腺病毒疫苗，是由水相和油相制备得到的；所述水相中含有灭活后gx2019-014毒株。
6、具体的，所述水相由病毒灭活液和吐温组成。
7、具体的，所述吐温为吐温-80。
8、具体的，吐温在水相中的浓度为4g/100ml。
9、所述病毒灭活液是将gx2019-014毒株病毒液进行甲醛灭活得到的。
10、具体的，所述油相由白油和司班组成；
11、具体的，所述司班为司班-80。
12、具体的，所述白油为注射用白油。
13、具体的，所述白油为白油c-zs-004。
14、具体的，司班在油相中的浓度为6g/100ml。
15、具体的，水相和油相的体积配比为1:3。
16、具体的，所述gx2019-014毒株病毒液中的病毒含量为(1×105-1×1010)tcid50/ml。
17、具体的，所述油乳剂禽腺病毒疫苗的制备方法包括如下步骤：取gx2019-014毒株病毒灭活液，加吐温并使其浓度为4g/100ml，即为a液；取白油，加司班并使其浓度为6g/100ml，混匀并灭菌，即为b液；将3体积份b液和1体积份a液混匀，得到疫苗。
18、具体的，所述油乳剂禽腺病毒疫苗的制备方法包括如下步骤：取gx2019-014毒株病毒灭活液，加吐温-80并使其浓度为4g/100ml，即为a液；取白油，加司班-80并使其浓度为6g/100ml，混匀，121℃灭菌20min，即为b液；取组织匀浆罐，先加入3体积份b液，然后边搅拌边缓慢加入1体积份a液，然后继续搅拌30min，得到的产物即为疫苗。
19、具体的，罐内温度25℃-26℃，搅拌转速2900rpm。
20、具体的，所述gx2019-014毒株病毒灭活液的制备方法包括如下步骤：将gx2019-014毒株感染lmh细胞，培养，然后加入甲醛或甲醛溶液并使甲醛在体系中的质量百分含量为0.1％，然后孵育，得到病毒灭活液。
21、具体的，所述gx2019-014毒株病毒灭活液的制备方法包括如下步骤：将gx2019-014毒株感染单层lmh细胞(moi＝0.1)，采用dmem/f12培养基培养96h，然后加入甲醛或甲醛溶液并使甲醛在体系中的质量百分含量为0.1％，然后37℃孵育48h，即为病毒灭活液。
22、本发明还保护一种用于预防和/或治疗家禽心包积液-肝炎综合症的药物，其包括灭活后gx2019-014毒株。
23、gx2019-014毒株，分离自广西壮族自治区，属于血清4型，其全称为ⅰ群血清4型禽腺病毒gx2019-014株(avian adenovirus gx2019-014)，已于2023年6月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称cctcc；地址：中国武汉，武汉大学；邮编：430072)，保藏编号为cctcc no：v202353。
24、具体的，以上任一所述灭活的方法为甲醛灭活。
25、具体的，所述甲醛灭活指的是用工作浓度为0.1％(质量百分含量)的甲醛进行病毒灭活。
26、具体的，以上任一所述疫苗为灭活疫苗(即病毒灭活疫苗)。
27、具体的，以上任一所述疫苗为油乳剂疫苗(即剂型为油乳剂的疫苗)。
28、具体的，以上任一所述疫苗中，病毒含量为(1×105-1×1010)tcid50/ml。
29、具体的，以上任一所述疫苗中，病毒含量为(1×106-1×109)tcid50/ml。
30、具体的，以上任一所述疫苗中，病毒含量为0.25×108.88tcid50/ml。
31、具体的，以上任一所述疫苗中，病毒含量为2×107tcid50/ml。
32、具体的，以上任一所述疫苗中，病毒含量为2×106tcid50/ml。
33、病毒含量指的是gx2019-014毒株的含量。
34、病毒含量以灭活前的病毒含量计。
35、具体的，以上任一所述禽腺病毒疫苗为针对禽腺病毒血清4型的疫苗。
36、具体的，以上任一所述疫苗的作用对象为禽类，具体可为鸡。
37、具体的，以上任一所述药物的作用对象为禽类，具体可为鸡。
38、本发明对于禽腺病毒的防控具有重要的应用推广价值。
技术特征：
1.灭活病毒在制备禽腺病毒疫苗中的应用；所述病毒为ⅰ群血清4型禽腺病毒gx2019-014株，其保藏编号为cctcc no：v202353。
2.灭活病毒在制备用于预防和/或治疗家禽心包积液-肝炎综合症的药物中的应用；所述病毒为ⅰ群血清4型禽腺病毒gx2019-014株，其保藏编号为cctcc no：
3.一种禽腺病毒疫苗，其包括灭活病毒；所述病毒为ⅰ群血清4型禽腺病毒gx2019-014株，其保藏编号为cctcc no：v202353。
4.一种油乳剂禽腺病毒疫苗，是由水相和油相制备得到的；所述水相中含有灭活病毒；所述病毒为ⅰ群血清4型禽腺病毒gx2019-014株，其保藏编号为cctcc no：v202353。
5.一种用于预防和/或治疗家禽心包积液-肝炎综合症的药物，其包括灭活病毒；所述病毒为ⅰ群血清4型禽腺病毒gx2019-014株，其保藏编号为cctcc no：v202353。
技术总结
本发明公开了一种用于禽腺病毒的灭活疫苗。本发明提供了一种油乳剂禽腺病毒疫苗，是由水相和油相制备得到的；所述水相中含有灭活病毒；所述病毒为Ⅰ群血清4型禽腺病毒GX2019‑014株，其保藏编号为CCTCC NO：V202353。本发明对于禽腺病毒的防控具有重要的应用推广价值。
技术研发人员：谢芝勋,谢志勤,韦悠,邓显文
受保护的技术使用者：广西壮族自治区兽医研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23