一种细胞膜包覆脂质体纳米药物及其制备方法与应用
本发明涉及药物控制释放和生物材料，具体为一种细胞膜包覆脂质体纳米药物及其制备方法与应用。
背景技术：
1、骨关节炎(oa)是最常见的关节炎形式，也是成人残疾的重要原因之一。随着全球人口老龄化和肥胖率的增加，oa的经济和社会负担显著增加，给全球医疗系统带来了巨大压力。最近的研究显示铁死亡与oa的发生和进展之间的显著相关性。靶向抑制软骨细胞铁死亡被认为是治疗oa的一种有前途的方法。然而诸多抑制细胞发生铁死亡的药物存在有溶解度差、生物利用度低和选择性不佳等不足，导致干预效果差，极大地限制了其临床应用。与此同时，经关节腔注射oa治疗相关药物易通过滑膜毛细血管和淋巴管迅速从关节腔中排出，滞留时间仅为几个h，为维持药效需频繁给药，不免增加关节腔感染风险。此外空间密集的软骨细胞外基质，阻碍了药物渗透并被软骨细胞内化。因而，针对oa的治疗亟需一种理想药物输送平台，具有软骨细胞靶向、体内长滞留、深入软骨渗透等特性。
2、仿生脂质体是近年来利用细胞膜仿生工程技术发展起来的一种靶向脂质体。它通过天然细胞膜或人工改造后的细胞膜均匀地“涂抹”至脂质体等纳米药物表面，达到“伪装”效果，躲避免疫系统识别，实现纳米药物安全、高效、靶向地递送。目前，包括正常的红细胞、血小板、免疫细胞、肿瘤细胞等在内的多种细胞膜已被修饰、装配至不同的纳米药物表面用于恶性肿瘤、炎症、病毒及细菌感染等疾病的高效治疗。
技术实现思路
1、本发明针对现有技术中存在的缺点和不足，本发明提供了一种软骨同源靶向、体内长滞留、缓释效果优越、稳定性佳、生物相容性高的抗铁死亡载药脂质体的细胞膜包覆脂质体纳米药物及其制备方法与应用。
2、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：本发明提供的软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体的制备方法，软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体的制备方法，包括具体步骤如下：将软骨细胞膜和抗铁死亡载药脂质体混匀后，将该混合溶液用装有聚碳酸酯膜的脂质体挤压器挤压，并将得到的溶液透析去除游离的软骨细胞膜后，得到软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体。
3、优选的，软骨细胞膜包括但不限于从人或动物体内所获的正常软骨细胞膜，或动物正常软骨细胞膜经功能修饰后所获工程化软骨细胞膜。
4、优选的，软骨细胞膜和抗铁死亡载药脂质体按照膜蛋白:脂质体的添加量质量比为1:0.5-8的比例混合。
5、优选的，抗铁死亡载药脂质体的制备方法为采用薄膜水化法制备，具体步骤如下：
6、称取胆固醇、大豆卵磷脂和抗铁死亡药物溶解于二氯甲烷溶液中，在蒸馏烧瓶中充分混匀，在旋蒸仪上蒸干成膜后，再加入10ml双蒸水水化薄膜，将所获溶液经过装有聚碳酸酯膜的脂质体挤压器反复挤压，后用透析法除去游离的抗铁死亡药物；
7、优选的，抗铁死亡药物包括但不限于以罗格列酮、丹皮酚、青霉胺、褪黑素、去铁胺和姜黄素其中任何一种；
8、胆固醇、大豆卵磷脂和抗铁死亡药物添加量的质量比为10-40:80:1-30。优选的，还包括软骨细胞膜的制备及提取，具体步骤如下：
9、经消化、收集软骨细胞，离心后使用预冷的ib-1缓冲液重悬细胞；冰浴下超声破碎处理，超声功率70w，超声3s，间隔3s，总时间1min；
10、其后800g，4℃离心10min，去除未破碎细胞和分裂的细胞核，收集上清液；进一步将所获上清液分别在10000g，4℃离心20min，并收集上清液；而后将所获上清液继续在100000g，4℃离心60min，收集沉淀物，1ml pbs重悬后，得到提取的软骨细胞膜。
11、优选的，ib-1缓冲液含0.5％牛血清白蛋白、225mm甘露醇、30mm tris-hcl、0.5mmedta、0.5mm蔗糖、1mm cocktail蛋白酶抑制剂，ph 7.4；
12、获得提取的软骨细胞膜采用bca法测定所获软骨细胞膜的蛋白质浓度，随后-80℃保存。
13、优选的，脂质体挤压器挤压处理方法均为将溶液依次经过装有膜孔径分别为400nm和200nm的装有聚碳酸酯膜的脂质体挤压器挤压10-40次。
14、细胞膜包覆脂质体纳米药物，上述细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法制得的软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体。
15、上述细胞膜包覆脂质体纳米药物的应用，具体为软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体在治疗软骨相关疾病中的应用。
16、本发明提供了一种细胞膜包覆脂质体纳米药物及其制备方法与应用。具备以下有益效果：
17、本发明的细胞膜包覆脂质体纳米药物及其制备方法与应用，方法步骤简单，操作方便，且稳定性好。该抗铁死亡载药脂质体具有以下优点：软骨同源靶向、体内长滞留、缓释效果优越、稳定性佳、生物相容性高。
18、本发明细胞膜包覆脂质体纳米药物，即软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体，该药物递送体系能够有效地避免巨噬细胞吞噬，同源靶向软骨细胞，将抗铁死亡药物高效地递送至预定靶点；在治疗骨关节炎中的应用，该应用通过抗铁死亡药物有效缓解软骨细胞的损伤，缓解骨关节炎进展效果显著。
技术特征：
1.一种细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法，其特征在于，具体为软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体的制备方法，包括具体步骤如下：将软骨细胞膜和抗铁死亡载药脂质体混匀后，将该混合溶液用装有聚碳酸酯膜的脂质体挤压器挤压，并将得到的溶液透析去除游离的软骨细胞膜后，得到软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体。
2.根据权利要求1所述的一种细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法，其特征在于，软骨细胞膜包括但不限于从人或动物体内所获的正常软骨细胞膜，或动物正常软骨细胞膜经功能修饰后所获工程化软骨细胞膜。
3.根据权利要求1所述的一种细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法，其特征在于，所述软骨细胞膜和抗铁死亡载药脂质体按照膜蛋白:脂质体的添加量质量比为1:0.5-8的比例混合。
4.根据权利要求1所述的一种细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法，其特征在于，所述抗铁死亡载药脂质体的制备方法为采用薄膜水化法制备，具体步骤如下：
5.根据权利要求4所述的一种细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法，其特征在于，所述抗铁死亡药物包括但不限于以罗格列酮、丹皮酚、青霉胺、褪黑素、去铁胺和姜黄素其中任何一种；
6.根据权利要求1所述的一种细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法，其特征在于，还包括软骨细胞膜的制备及提取，具体步骤如下：
7.根据权利要求6所述的一种细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法，其特征在于，所述ib-1缓冲液含0.5％牛血清白蛋白、225mm甘露醇、30mm tris-hcl、0.5mm edta、0.5mm蔗糖、1mm cocktail蛋白酶抑制剂，ph 7.4；
8.根据权利要求4所述的一种细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法，其特征在于，所述脂质体挤压器挤压处理方法均为将溶液依次经过装有膜孔径分别为400nm和200nm的装有聚碳酸酯膜的脂质体挤压器挤压10-40次。
9.一种细胞膜包覆脂质体纳米药物，其特征在于，根据权利要求1-8任何一项所述的一种细胞膜包覆脂质体纳米药物的制备方法制得的软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体。
10.根据权利要求1-9任何一项所述的细胞膜包覆脂质体纳米药物的应用，具体为软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体在治疗软骨相关疾病中的应用。
技术总结
本发明公开了一种细胞膜包覆脂质体纳米药物及其制备方法与应用，属于药物控制释放和生物材料技术领域,解决现有技术中靶向抑制软骨细胞铁死亡时药物溶解度差、生物利用度低和选择性不佳，导致干预效果差，限制其临床应用的技术问题。具体为软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体的制备方法，包括具体步骤：将软骨细胞膜和抗铁死亡载药脂质体混匀后，将该混合溶液用装有聚碳酸酯膜的脂质体挤压器挤压，并将得到的溶液透析去除游离的软骨细胞膜后，得到软骨细胞膜仿生抗铁死亡载药脂质体。本发明细胞膜包覆脂质体纳米药物具有软骨同源靶向、体内长滞留、缓释效果优越、稳定性佳、生物相容性高、抗铁死亡载药脂质体。
技术研发人员：刘朋,曹思旸,魏懿浩,翁鉴,于斐,陈英奇,林健静,曾晖
受保护的技术使用者：北京大学深圳医院
技术研发日：
技术公布日：2024/9/23