一种富集百部总生物碱的工艺的制作方法

专利名称：：一种富集百部总生物碱的工艺的制作方法
技术领域：
：本发明属于医药领域，具体说是涉及一种富集百部总生物碱的工艺
背景技术：
：百部为常用中药，始载于《名医别录》，列为中品。"微温，有小毒，主治咳喘上气。"以后历代医学文献都有记载，多用作杀虱、止咳药。如《本草述》"百部，乃先哲多谓其能治久嗽，损庵所云，治久嗽用以保肺者也。《本草纲目》"百部，亦天门冬之类，故皆治肺病杀虫"。《本草新编》"百部，杀虫而不耗气血，最有益于人，但其力甚微，用之不妨多也。然必与参、茯、芪、术同用为佳。""既益肺胃脾之气，又能杀虫。倘痨病有传尸之虫者，须同地骨皮、沙参、丹皮、熟地、山茱共用为好。"药典收载的法定用药为百部科直立百部Stemonasessilifolia(Miq.)Miq.、蔓生百部Stemonaj即onica(BUMiq.和对口十百部StemonatuberosaLour.的块根，主产于山东、安徽、江苏、湖南等地。性味甘、苦，微温，归肺经。具有润肺下气止咳、杀虫的功效。主治风寒咳嗽、百日咳、肺结核、老年咳喘、蛔虫病、蛲虫病、皮肤疥癣、湿疹。现代药理研究表明，百部生物碱有镇咳祛痰作用，临床报道，百部治疗百日咳各期及其它并发症者，疗效满意。治疗慢性支气管炎110例，有效率为87.27%。治疗结核性胸膜炎和肺结核均有不错疗效。查阅国内外关于百部的文献报道，发现关于百部总生物碱的提取方法较少，均采用醇提再用氯仿等有机溶剂萃取的方法，提取率低，安全性小，不利于规模化生产。
发明内容本发明的目的是在于提供一种应用膜分离技术与大孔树脂联用技术的一种富集百部总生物碱的提取纯化工艺，以克服上述不足。本发明的目的是由以下技术方案实现的—种富集百部总生物碱的工艺，其特点是所述的富集百部总生物碱的工艺，包括二少(1)、提取将百部药材粉碎成粗粉，并用70-95%乙醇或水提取，经1000-5000转/分离心0.5-2小时，得到离心液；(2)、精制分离将(1)步骤得到的离心液通过无机陶瓷膜或/和有机复合膜进行精制分离，得到的透析液；(3)、纯化将(2)步骤得到的透析液通过大孔树脂，洗脱出去水溶性杂质，以50-90%乙醇溶液洗脱，至碘化铋钾反应成阴性，停止洗脱，洗脱液减压回收成干膏，粉碎，得百部总生物碱提取物，百部生物碱有效部位含量在50%以上；所述(1)步骤中采用70-95%乙醇或水的提取方式为加热回流或渗漉，所述(1)步骤中采用的70-95%乙醇提取的次数和时间为提取3次，每次2小时，所述(2)步骤中采用的无机陶瓷膜可以是0.05-1iim孔径的氧化铝膜、氧化锆膜、氧化锑膜、聚砜膜、醋酸纤维膜、聚四氟乙烯膜、聚丙烯膜中的一种或几种。截留O.05ym以上的粒子，滤过压力为l-4Mpa，所述(3)步骤中采用3的大孔树脂为D101或XDA。本发明采用膜分离与大孔树脂联用的技术可高效率地去除百部粗提物中蛋白质、多糖等大分子杂质成分，能达到提高百部提取物中总生物碱的纯度和品质的目的，本发明工艺方法所得到的干膏，经过雷氏盐紫外法，测定总生物碱的含量，结果表明，采用本发明的工艺方法，总生物碱纯度大于50%，说明提取的有效成分得到了富集，进一步说明了发明本工艺的可行性和先进性，本发明的优点采用了可规模化生产的乙醇/水提取_膜分离_大孔树脂纯化的技术制备对百部总生物碱进行富集，百部生物碱有效部位含量在50%以上，整个提取、分离过程除乙醇外，没有使用其它有毒有机溶剂，膜分离效率好，在低温中进行，抗污染性强，易于再生清洗，有利于后续工艺采用大孔树脂进一步纯化，能提高产品的收率和品质，显著降低产品的制备成本，大孔树脂可以重复使用，工业化生产安全，成本低，制备的百部生物碱纯度高。下面结合实施例对本发明作进一步描述具体实施例方式实施例本发明采用膜分离技术是指以外界能量或化学位差为推动力，依靠膜的选择性透过作用进行物质分离、纯化与浓縮的一种技术，其实质近似于筛分过程，是根据滤膜孔径的大小或者所截留的物质分子量大小的差异，使物质透过或被膜截留，从而达到物质分离的目的，作为一种新兴的高效分离手段，膜分离技术被视为是21世纪最有发展前途的高新技术之一，已广泛应用于化工、食品、医药技术等领域，采用膜分离精制的工艺，有利于后续工艺采用大孔树脂进一步纯化，提高大孔树脂对主要药用活性成分的分离纯化效率，延长大孔树脂的使用寿命，提高产品的收率和品质，显著降低产品的制备成本，本发明采用膜分离与大孔树脂联用的技术可高效率地去除百部粗提物中蛋白质、多糖等大分子杂质成分，能达到明显提高百部提取物中总生物碱的纯度和品质的目的。实施例1取百部药材粗粉，加入10倍量90X乙醇，加热回流3次，每次2hr。提取液经4000rpm离心，离心液用截留孔径0.05ym的氧化铝陶瓷膜微滤，滤过压力3Mpa。收集透析液，过XAD-1大孔树脂，用水洗去水溶性杂质，再用90%乙醇洗脱，至碘化铋钾反应成阴性，停止洗脱，洗脱液减压回收至干，粉碎，得百部总生物碱提取物。实施例2取百部药材粗粉，加入10倍量85X乙醇，加热回流3次，每次2hr。提取液经4000rpm离心，离心液用截留孔径0.5iim的氧化铝陶瓷膜微滤，滤过压力2.5Mpa。收集透析液，过DIOI大孔树脂，用水洗去水溶性杂质，再用90%乙醇洗脱，至碘化铋钾反应成阴性，停止洗脱，洗脱液减压回收至干，粉碎，得百部总生物碱提取物。实施例3取百部药材粗粉，加入10倍量90X乙醇，加热回流3次，每次2hr。提取液经1500rpm离心，离心液用截留孔径0.8ym的氧化锆膜微滤，滤过压力lMPa，收集透析液，过D101大孔树脂，用水洗去水溶性杂质，再用90%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，至碘化铋钾反应4成阴性，停止洗脱，洗脱液减压回收至干，粉碎，得百部总生物碱提取物。实施例4取百部药材粗粉，加入10倍量90X乙醇，加热回流3次，每次2hr。提取液经4000rpm离心，离心液用0.8ym的氧化锆膜微滤，滤过压力1Mpa。收集滤液，经过聚砜类复合膜纳滤，截留分子量范围为100-300，滤液压力3Mpa。收集透析液，过DIOI大孔树脂，用水洗去水溶性杂质，再用90%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，至碘化铋钾反应成阴性，停止洗脱，洗脱液减压回收至干，粉碎，得百部总生物碱提取物。实施例5取百部药材粗粉，加入10倍量90X乙醇，加热回流3次，每次2hr。提取液经4000rpm离心，离心液用0.8ym的氧化锆膜微滤，滤过压力1Mpa。收集滤液，经过聚砜类复合膜纳滤，截留分子量范围为8000-10000，滤液压力2Mpa。收集透析液，过DIOI大孔树脂，用水洗去水溶性杂质，再用90%乙醇洗脱，收集醇洗脱液，至碘化铋钾反应成阴性，停止洗脱，洗脱液减压回收至干，粉碎，得百部总生物碱提取物。实施例6取百部药材粗粉，加入10倍量90X乙醇，加热回流3次，每次2hr。提取液经1500rpm离心，离心液用0.6ym的氧化锆膜微滤，滤过压力1.5Mpa。收集滤液，经过聚哌嗪酰胺复合有机膜纳滤，截留分子量范围为4000-5000，滤液压力3Mpa。收集透析液，过XAD-1大孔树脂，用水洗去水溶性杂质，再用90%乙醇洗脱，至碘化铋钾反应成阴性，停止洗脱，洗脱液减压回收至干，粉碎，得百部总生物碱提取物。实施例7取百部药材粗粉，加入10倍量90X乙醇，加热回流3次，每次2hr。提取液经4000rpm离心，离心液经过聚哌嗪酰胺复合有机膜纳滤，截留分子量范围为1000-2000，滤液压力4Mpa。收集透析液，滤液经过聚砜类复合膜纳滤，截留分子量范围为100-300，滤液压力4Mpa。收集未透析液，过XAD-1大孔树脂，用水洗去水溶性杂质，再用90%乙醇洗脱，至碘化铋钾反应成阴性，停止洗脱，洗脱液减压回收至干，粉碎，得百部总生物碱提取物。下面通过试验例说明本发明的有益成果。试验例百部有效总生物碱提取物中总碱的含量测定分别称取5份样品，按照上述实施例1-8所述方法平行进行处理分别得到5份百部总生物碱提取物，精密称定0.5g，加0.lmol/LHC1溶液水浴加热溶解，趁热过滤，再用0.lmol/LHCL溶液多次洗涤回收瓶和滤器，加入新鲜配制的2%雷氏盐饱和溶液5mL，摇匀，置冰浴中放置lh，用干燥滤纸抽滤得沉淀，沉淀物干燥后以丙酮溶解，定容于5mL容量瓶中，以丙酮为空白，在523nm处进行比色测定，并计算样品中总生物碱的含量。表1富集工艺总生物碱纯度和总生物碱转移率的测定结果样品总生物碱纯度(％)总生物碱转移率(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>从表1结果看出，富集工艺总生物碱的转移率平均为，综上所述，说明本发明的富集总生物碱工艺能有效地防止百部药材提取液中有效成分在杂质分离过程中损失，有效成分的转移率较高，杂质去除效果良好，且工艺简单可行，生产周期短，生产成本和安全风险低，具有产业化推广实施的价值。权利要求一种富集百部总生物碱的工艺，其特征在于所述的富集百部总生物碱的工艺，包括三步(1)、提取将百部药材粉碎成粗粉，并用70-95％乙醇或水提取，经1000-5000转/分离心0.5-2小时，得到离心液；(2)、精制分离将(1)步骤得到的离心液通过无机陶瓷膜或/和有机复合膜进行精制分离，得到的透析液；(3)、纯化将(2)步骤得到的透析液通过大孔树脂，洗脱出去水溶性杂质，以50-90％乙醇溶液洗脱，至碘化铋钾反应成阴性，停止洗脱，洗脱液减压回收成干膏，粉碎，得百部总生物碱提取物，百部生物碱有效部位含量在50％以上。2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于所述(1)步骤中采用70-95%乙醇或水的提取方式为加热回流或渗漉。3.根据权利要求l所述的工艺，其特征在于所述(1)步骤中采用的70-95%乙醇提取的次数和时间为提取3次，每次2小时。4.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于所述(2)步骤中采用的无机陶瓷膜可以是0.05-1iim孔径的氧化铝膜、氧化锆膜、氧化锑膜、聚砜膜、醋酸纤维膜、聚四氟乙烯膜、聚丙烯膜中的一种或几种。截留0.05ym以上的粒子，滤过压力为l-4Mpa。5.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于所述(3)步骤中采用的大孔树脂为D101或XDA。全文摘要本发明属于医药领域，具体说是涉及一种富集百部总生物碱的工艺，采用膜分离与大孔树脂联用技术提取纯化工艺，明显提高大孔树脂对主要药用活性成分的分离纯化效率，延长大孔树脂的使用寿命，提高产品的收率和品质，显著降低产品的制备成本，膜分离与大孔树脂联用的技术可高效率地去除百部粗提物中蛋白质、多糖等大分子杂质成分，明显提高百部提取物中总生物碱的纯度和品质的目的，整个提取、分离过程除乙醇外，没有使用其它有毒有机溶剂，膜分离效率好，在低温中进行，抗污染性强，易于再生清洗，有利于后续工艺采用大孔树脂进一步纯化，大孔树脂可以重复使用，工业化生产安全，成本低，制备的百部生物碱纯度高。文档编号A61P11/06GK101732633SQ20091026236公开日2010年6月16日申请日期2009年12月15日优先权日2009年12月15日发明者朱贺年,李卫民,贾金良,钟莹申请人:包头市千年健药物研究开发有限公司