一种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法

一种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法
【技术领域】
[0001] 本发明设及检测技术领域，更具体地，设及一种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射 法。
【背景技术】
[0002] 壳聚糖(CTS)是甲壳素脱乙酷基产物，其化学名称为聚葡萄糖胺（1,4)-2-氨基-2-脱氧-D-葡聚糖，是自然界含量仅次于纤维素的第二大天然有机高分子化合物。它是甲壳类 (邮、蟹）动物、昆虫的外骨骼的主要成分。壳聚糖及其衍生物是重要的生物活性物质，具有 抗肿瘤，抗凝血，减肥降脂和增强免疫力等功能，可作为医药保健品、食品、化妆品等的添加 剂及制备人造皮肤和手术缝合线等的重要原料。因此，壳聚糖在生物医学，环境卫生和食品 等领域都有着广阔的应用前景。
[0003] 随着壳聚糖广泛应用，壳聚糖的准确定量显得十分重要。目前，国内外用于壳聚糖 定量分析的方法主要集中在分光光度法和巧光法。目前，光谱法测定壳聚糖普遍忽略了壳 聚糖作为高分子天然产物，其分子量从几千到百万不等，当样品中壳聚糖分子量与标准品 差异较大时，可能会产生一定的系统误差，影响准确测定。

【发明内容】

[0004] 本发明为了克服现有技术的上述不足，提供活性红4在作为定量分析壳聚糖的探 针中的应用。
[000引本发明的另一个目的是提供一种W活性红4为探针的定量分析壳聚糖的方法。
[0006] 本发明的再一个目的是提供一种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法。
[0007] 为了实现上述目的，本发明是通过W下方案予W实现的： 本发明首先研究了弱酸环境下活性红4与壳聚糖缔合后的光谱特征，及其在壳聚糖定 量分析中的应用。结果表明在弱酸性B-R缓冲体系中，活性红4与壳聚糖的离子缔合物于λ= 342nm处产生强烈的共振瑞利散射特征峰，共振瑞利散射强度与壳聚糖浓度C呈良好线性关 系，在0.050 ~6.00yg/mL 的浓度范围内，线性方程为：ΔΙ = 682.31C+ 114.95(c，yg/mL)， R2=0.9991，检测限0.03化g/mL。据此，本发明要求保护活性红4在作为定量分析壳聚糖的探 针中的应用。
[0008] 另外，本发明还保护一种W活性红4为探针的定量分析壳聚糖的方法。
[0009] -种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法，包括W下步骤： 标准曲线的绘制:配置η个成梯度浓度的壳聚糖溶液和1个空白试剂，向η个成梯度浓度 的壳聚糖溶液和1个空白试剂中分别加入2倍体积的B-R缓冲溶液，然后再分别加入等体积 的活性红4溶液，混合均匀后得到稀释后的成浓度梯度的壳聚糖待测溶液，静置，检测壳聚 糖待测溶液的共振瑞利散射强度，具体为Κλθχ=λθπι进行同步扫描，记录RRS光谱，并于 342nm处分别测量离子缔合物的Irr沸试剂空白的1〇,绘制标准曲线，进一步得线性方程：Δ I = 682.31C+ 114.95(c，yg/mL) 式中 Δ I = Irrs-Io; 样品检测：向经过初步处理后的待测样品的上清液中，加入2倍体积的B-R缓冲溶液，然 后再加入等体积的活性红4溶液，混合均匀后静置，检测共振瑞利散射强度，由上述线性方 程计算出待测样品中壳聚糖的浓度。 优选地，所述静置的时间为120分钟W内。
[0010] 优选地，所述棘性红4溶液的浓度化.00乂1〇-4111〇1/1，8-1?缓冲溶液的抑为5.5。
[0011] 优选地，待测样品初步处理的步骤如下:将待测样品用0.5mol/L的醋酸溶液溶解， 待完全溶解后离屯、，得上清液，上清液稀释后用于巧光巧灭检测。
[0012] 更优选地，一种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法，包括W下步骤： 标准曲线的绘制:在一系列10.OOmL的比色管中，按先后顺序分别加入ImL浓度分别为 0.5、1、3、5、10、20、30、40、50、60yg/mL的壳聚糖溶液，P册.50的B-R缓冲液缓冲液2. OOmL， 1.00 X l(T4mol/L活性红4操作液1 .OOmL，W蒸馈水稀释至刻度线，摇匀得到浓度分别为 0.05、0.10、0.30、0. 50、1.00、2. 00、3.00、4, 00、5.00、6.00yg/mL的壳聚糖待测溶液，静 置15~120分钟，WAex=Aem进行同步扫描，记录RRS光谱，并于34化m处分别测量离子缔合 物的Irrs和试剂空白的1〇,绘制标准曲线，进一步得线性方程：ΔΙ = 682.31C+ 114.95(c，y g/mL) 式中 Δ I = Irrs-Io; 样品检测：将〇.4g待测样品用0.5mol/L的醋酸溶液溶解，定容至lOOmL，待完全溶解后 离屯、，取2.5mL上清液，并定容至lOOmL，作为样品操作液，取1血样品操作液，加入2mL的抑为 5.5的B-R缓冲溶液，再加入1血的1.00 X l〇-4mol/L活性红4溶液，用水定容至10血，混合均匀 后，静置15~120分钟，检测共振瑞利散射强度，由线性方程计算出待测样品中壳聚糖的浓 度。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 本发明首次研究了弱酸环境下活性红4与壳聚糖缔合后的光谱特征，及其在壳聚糖定 量分析中的应用。研究结果显示，在弱酸性B-R缓冲体系中，活性红4与壳聚糖的离子缔合物 于λ=342ηπι处产生强烈的共振瑞利散射特征峰，共振瑞利散射强度与壳聚糖浓度C呈良好线 性关系，在0.050~6.00yg/mL的浓度范围内，线性方程为：ΔΙ = 682.31C+ 114.95(c，yg/ mL)，R2=0.9991，检测限0.03化g/mL。据此本发明利用壳聚糖与活性红4的结合，建立了分析 壳聚糖的共振瑞利散射，该方法具有操作简单，快速，准确，灵敏度高等特点。
【附图说明】
[0013] 图1为紫外吸收光谱、巧光光谱W及共振瑞利散射光谱。
[0014] 图2为不同浓度壳聚糖的共振瑞利散射图谱；1.壳聚糖（2.Oyg /mL);2.活性红4 (1.0Xl〇-5mol/L); 3~7.活性红4 (1.0Xl〇-5mol/L)-壳聚糖（1.0，2.0，3.0，4.0， 5.化g /mL)复合物。
[001引图3为活性红浓度的影响。
[0016] 图4为缓冲溶液用量的影响。
[0017] 图5为低、中、高分子量壳聚糖的标准曲线W及模拟样品曲线；（)低分子量；（?) 中分子量;（▲)高分子量;（▼)中分子量模拟样品。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例 只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特 殊说明，均为常规方法;所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂 和材料。
[0019] 壳聚糖（CTS)标准（20°C时，1%溶解在1%醋酸溶液中）：低分子量为< 200 mPa. S;中分子量为200~400mPa. S;高分子量为400~lOOOmPa. S。壳聚糖(CTS)标准溶液:配 置方法为准确称取0.0400g壳聚糖溶于0.5mol/L醋酸溶液中，于容量瓶定容至lOOmL，得到 浓度为400.化g/mL的标准胆备液;吸取储备液2.50mL于100 mL的容量瓶中，W水定容到刻 度，得到10.0化g/mL的壳聚糖标准溶液，现配现用。
[0020] 活性红4操作液（1.00 X l〇-4mol/L):精密称取0.0250g活性红4(Sigma公司）染料， 用水溶解，于250mL容量瓶中定容，摇匀，备用。
[0021 ] Britton-Robinson(B-R)缓冲溶液：由0.04mol/L 混合酸[(2.71mL正憐酸 + 2.36mL冰乙酸+2.47g棚酸)/L]与0.2mol/L NaOH溶液按不同比例配制而成。
[0022] 实施例1 一、光谱分析:在lOmL的比色管中，加入ImL壳聚糖标准溶液 （10.0 Oyg/血）、pH为4.50的 B-R缓冲溶液2. OOmL、浓度为1.00 X l〇-4mol/L活性红4操作液1. OOmL，纯水定容至刻度，摇 匀。分别扫描紫外可见吸收光光图谱、激发光谱、巧光光谱W及共振瑞利散射光谱，结果见 图1。由图1可知，CTS-活性红4在激发波长285皿，巧光波长341皿处有最大巧光值，CTS-活性红4的瑞利散射光谱位于CTS-活性红4吸收光谱带，由于电子吸收电磁波的频率与散射 频率相同，电子因共振而强烈吸收光能并再次散射，产生强烈的共振瑞利散射，其散射强度 比单纯的瑞利散射提高几个数量级。
[0023] 巧光发射光谱位置与共振瑞利散射的最大散射位置有较大重叠，运也意味着在相 同频率下，能够在壳聚糖与活性红4之间互相产生共振和能量交换，导致共振瑞利散射增 强，其巧光发生相应的巧灭。
[0024] 二、共振瑞利散射图谱 在一系列lOmL的比色管中，依次加入ImL浓度分别为10、20、30、40、5化g/mL的壳聚糖溶 液、pH为5.50的B-R缓冲溶液2.00血、浓度为1.00 X l〇-4mol/L活性红4操作液1.00血，W水定 容，摇匀得到1、2、3、4、5yg/mL的壳聚糖待测溶液，放置10 min。在F-2500上，选择激发和发 射狭缝宽度均为5皿，WAex=Aem进行同步扫描，记录不同浓度壳聚糖溶液（l、2、3、4、5yg/ mL)的RRS光谱，并于342nm处分别测量离子缔合物的Irrs和试剂空白的1日，计算Δ Irrs=Irrs-1〇。结果见图2,由图2可知，壳聚糖和活性红4本身的共振散射非常弱，但是两者结合后共振 瑞利散射明显增强，运也由于在弱酸环境下，壳聚糖的氨基阳离子与活性红4的阴离子形成 缔合物时呈电中性，疏水性大大提高，可导致在结合产物与水之间形成界面而产生一种表 面增强的散射效应，有利于RRS增强，在342nm处呈特征性共振瑞利散射峰。此共振瑞利散射 强度与壳聚糖浓度呈线性相关。因此，后续实验选择该波长作为共振瑞利散射波长。
[0025] Ξ、共振瑞利散射法实验条件优化 1.缓冲溶液及pH的选择 在pH 1.8~6.5区间考察了B-R缓冲溶液、HAc-NaAc缓冲溶液、甘氨酸-盐酸和六次甲基 甲胺-盐酸缓冲溶液四种缓冲溶液对共振瑞利散射强度A Irrs的影响，发现在B-R和甘氨酸-盐酸两种缓冲溶液体系中，标准系列的线性关系较好。不过，采用甘氨酸-盐酸缓冲溶液时， 放置时间40min后试液中出现白色的沉淀物，且与甘氨酸-盐酸相比较，在抑3.50~6.50之 间，采用B-R缓冲溶液时，试液共振瑞利散射强度更稳定，在抑值为5.50时Δ I达到最大值。 故后续实验选择抑=5.50的B-R缓冲溶液。
[0026] 2.活性红4加入量的选择 取两组10.0 OmL的比色管，一组力日ImL浓度为5化g/mL的壳聚糖溶液，另一组为试剂空 白，固定活性红4浓度（1.00 X l〇-4mol/L)和B-R缓冲溶液抑值、加入量(pH=5.50，2. OOmL)， 改变活性红4操作液用量。W试剂空白为对照，测定相应活性红4加入量的共振瑞利散射 强度Irrs，试剂空白1〇，绘制Δ I-V曲线，测定结果见图3。实验表明，当活性红4溶液用量为 1. OOmL时，体系的共振瑞利散射强度差值Δ I最大。
[0027] 3.缓冲溶液加入量 取两组10.0 OmL的比色管，一组力日ImL浓度为4化g/mL的壳聚糖溶液，另一组为试剂空 白，分别加入1.00 X l〇-4mol/L活性红4溶液1.00血，B-R缓冲溶液固定抑=5.50，改变缓冲 溶液用量。测定相应缓冲溶液加入量的共振瑞利散射强度，测定结果见图4。由图4可知，当 缓冲溶液加入量为2 .OOmL时，共振瑞利散射强度Δ I最大。所W，选择最佳的缓冲溶液 2. OOmL作为实验条件。
[002引4.加入次序 试剂加入的顺序对物质的结合有一定的影响，所W加入次序可能会影响到共振瑞利散 射的强度。在Ξ组lOmL的比色管，分别代表Ξ种加入次序：1)壳聚糖-B-R缓冲溶液-活性红4 溶液;2)壳聚糖-活性红4溶液-B-R缓冲溶液;3化-R缓冲溶液-活性红4-壳聚糖;每加入一种 试剂必须充分摇匀后再加另外一种试剂，放置lOmin，测定Ξ组不同加入次序的RRS值。用 SPSS20.0做Ξ组的加入次序RRS的方差分析，P>0.05,说明此处加入次序对共振瑞利散射 的强度没有影响。W下实验均选择均选择第一方案作为加入次序。
[0029] 5.稳定时间 取9组10.0 OmL的比色管，先后加入ImL浓度为25yg/mL的壳聚糖溶液，2mL抑为5.50的 B-R缓冲溶液，ImL浓度为1.00X l〇-4mol/L活性红4溶液，摇匀，放置15min、25min、35min、 45111；[]1、6〇111；[]1、9〇111；[]1、12〇111；[]1、18〇111；[]1和24〇111；[]1，扣除试剂空白值，测定相应放置时间下的共 振瑞利散射强度A I。发现在120min内吸光度基本不发生变化，稳定性良好。
[0030] 四、线性关系与检出限：在一系列10.OOmL的比色管中，按先后顺序分别加入ImL 浓度分别为0.5、1、3、5、10、20、30、40、50、60yg/mL的壳聚糖溶液，P册.50的B-R缓冲液缓冲 液2.00血，1.00 X ΙΟΛιοΙ/L活性红4操作液1.00血，W蒸馈水稀释至刻度线，摇匀，得到浓度 为0.050、0.10、0.30、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.004邑/血的壳聚糖待测溶液。 在0.050~6.OOyg/mL范围内，共振瑞利散射强度与壳聚糖浓度C呈良好线性关系，线性方 程为：AI = 682.31c+114.95(CTS，yg/mL)，R2=0.9991，检测限0.03：Myg/mL。
[0031] 五、共存物质干扰：目前，市场上含有CTS的常见保健品如甲壳素胶囊，其主要辅 料成分有明胶、淀粉、糊精等。分别于壳聚糖质量浓度为2.OOyg/mL的溶液中，加入甲壳素胶 囊中可能的共存物质，进行干扰试验测定，与未加干扰物质的标准溶液测定结果对照，计算 产生约± 5%相对误差时加入各共存物质的浓度，结果见表1。
[0032] 表1.共存物质干扰试验结果_
结果表明，甲壳素胶囊中可能的共存物质如可溶性淀粉、巧樣酸、葡萄糖、甘氨酸及钟、 钢等微量元素对测定结果干扰较小，对样品中CTS含量测定的准确性影响相应也较小。部分 金属离子如Ca2\Mg 2+、Cu2+和Fe3+等对壳聚糖的测定影响较大，可W通过在样品测试液中加 入适量的邸TA掩蔽剂来消除金属离子的干扰。
[0033] 屯、壳聚糖分子量的影响：取Ξ组lOmL比色管，第一组加入低分子量壳聚糖标准， 第二组加入中分子量壳聚糖标准，第Ξ组加入高分子量壳聚糖标准。Ξ组不同分子量的壳 聚糖待测溶液的浓度均为0.05，0.10，0.20，0.30，0.50，1.00，2.0化g/血，同时制备试剂空 白，各平行3份。测定不同浓度的低、中、高Ξ种壳聚糖分子量的标准曲线。使用SPSS20.0对 Ξ条标准曲线进行斜率显著性检验，得P<0.05，可初步推断，W活性红4为探针的共振瑞利 散射法受壳聚糖分子量的影响。
[0034] 在此基础上，进一步考察壳聚糖模拟样品的样品曲线与上述Ξ种标准曲线之间的 差异性。壳聚糖模拟样品是在中分子量的壳聚糖标准液中加入葡萄糖1化g/mL、抗坏血酸5y g/mL和甘氨酸2化g/mL干扰物组成。按照前述标准曲线的浓度，配制一定浓度梯度的样品溶 液，平行3份，同时制备试剂空白。测定各模拟样品溶液的巧光强度，绘制线性方程，与Ξ种 分子量壳聚糖标准曲线相比较，结果见图5。由图5可见，模拟样品曲线与中分子量标准曲线 基本重合。
[0035] 采用SPSS进行斜率显著性检验，得出低、中、高分子量 的壳聚糖标准曲线与模拟样 品4条曲线之间存在差异(P<0.05)，而中分子量标准曲线和模拟样品曲线之间不存在差异 (P〉0.05)。
[0036] 模拟样品验证:取两组10ml比色管，模拟样品加入量分别为2.5化g/mL和3.5化g/ mL，各平行；份，同时制备试剂空白，测定RRS值。得A I分别W低、中、高分子量壳聚糖标准 曲线的回归方程计算模拟样品中壳聚糖含量，结果见表2。
[0037] 表2同一样品用Ξ条标准曲线计算结果
由表2数据得出，当采用中分子量壳聚糖标准曲线计算时，结果相对误差最小。依此进 一步验证，样品测定时，选择与样品曲线斜率接近的标准曲线作为计算基准可W最大程度 降低系统误差。
[003引应用例1 本发明建立的共振瑞利散射法在检测市场上常规壳聚糖药品中的应用，本应用例中使 用的常规药品W奥利维和艾得兰两个品牌为代表。奥利维购自威海南波湾生物技术有限公 司，艾得兰购自上海同济生物制品有限公司。两种药物的检测步骤如下： 1、样品预处理:分别准确称取0. 0400g壳聚糖胶囊粉末(奥利维和艾得兰两个品牌）， 用0.5mol/L的醋酸溶液溶解，定容至lOOmL，待完全溶解后于6000r/min离屯、15min，取2.5mL 上清液，加入0.Olmol/L的邸ΤΑ溶液ImL，后W纯水定容至100 mL，作为样品操作液。
[0039] 2、样品含量测定:首先，制备奥利维和艾得兰两种产品的样品曲线，发现两种样品 曲线均与低分子量壳聚糖标准曲线的斜率相当。因此，采用共振瑞利散射法检测运两种样 品中壳聚糖含量时，均选择低分子量壳聚糖为定量标准，制备标准曲线。
[0040] 在2个lOmL的比色管中，分别加入ImL奥利维和艾得兰两种产品的样品操作液，每 个管中再加入pH为5.50的B-R缓冲溶液2. OOmL、浓度为1.00 X ΙΟΛιοΙ/L的活性红4操作液 l.OOmUW水定容至刻度线，摇匀放置10 min。在F-2500上，选择激发和发射狭缝宽度均为 5nm，WAex=Aem进行同步扫描，记录RRS光谱，并于342nm处分别测量离子缔合物的Irrs和 试剂空白的1〇，计算A Irrs=Irrs-Io。
[0041 ] 3、精密度实验:按照步骤2的方法，在10 mL比色管中加入一定体积的样品操作液， 平行3份，同时制备试剂空白和低分子量壳聚糖标准曲线。计算样品操作液壳聚糖浓度，结 果见表3。
[0042]表3样品测定结果

共振瑞利散射法回收率实验:参照步骤2的方法，于两组lOmL比色管中，分别加入奥利 维壳聚糖样品操作液〇.50mL和艾得兰壳聚糖样品操作液1.50mL，然后向奥利维各管加入 10.0 Oyg/mL的CTS标准液0.30、0.50、1. OOmL，向艾得兰各管加入10.0 Oyg/mL的CTS标准液 0.50、1.00、2.00mL，各平行3份，同时制备空白，测定各管共振瑞利散射强度，计算加标回收 率。结果见表4，得此方法平均加标回收率为100.0%，精密度为3.29%。
[0043]表4.共振瑞利散射法加标回收率
本发明W活性红4作探针的共振瑞利散射法测定壳聚糖与现有共振瑞利散射法测定壳 聚糖研究相比，其灵敏度有较大提升。原因可能在于活性红4分子具有大的共辆结构，具有 由偶氮相连的刚性平面，与线性分子结构相比更有利于增大疏水分子团的体积，从而使RRS 响应值有明显的提升。关于壳聚糖分子量对样品测定结果准确性的影响，共振瑞利散射法 能反映出不同分子量的影响，因此，在样品测定时，可W选择与样品曲线斜率接近的壳聚糖 标准曲线作为定量计算标准，或者降低测试样品的浓度，W达到减小系统误差、准确定量的 目的。
【主权项】
1. 活性红4在作为定量分析壳聚糖的探针中的应用。2. 以活性红4为探针的定量分析壳聚糖的方法。3. -种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法，其特征在于，包括以下步骤： 标准曲线的绘制:配置η个成梯度浓度的壳聚糖溶液和1个空白试剂，向η个成梯度浓度 的壳聚糖溶液和1个空白试剂中分别加入2倍体积的B-R缓冲溶液，然后再分别加入等体积 的活性红4溶液，混合均匀后得到稀释后的成浓度梯度的壳聚糖待测溶液，静置，检测壳聚 糖待测溶液的共振瑞利散射强度，具体为以λeX=λem进行同步扫描，记录RRS光谱，并于 342nm处分别测量离子缔合物的IRRS和试剂空白的1〇,绘制标准曲线，进一步得线性方程：Δ I= 682.31c+ 114.95(c,yg/mL) 式中ΔI=Irrs-Io; 样品检测：向经过初步处理后的待测样品的上清液中，加入2倍体积的B-R缓冲溶液，然 后再加入等体积的活性红4溶液，混合均匀后静置，检测共振瑞利散射强度，由上述线性方 程计算出待测样品中壳聚糖的浓度。4. 根据权利要求3所述的共振瑞利散射法，其特征在于，所述静置的时间为120分钟以 内。5. 根据权利要求4所述的共振瑞利散射法，其特征在于，所述活性红4溶液的浓度为 1.00 X10-4mo1/L，B-R缓冲溶液的pH为 5.5。6. 根据权利要求5所述的共振瑞利散射法，其特征在于，待测样品初步处理的步骤如 下:将待测样品用〇.5mol/L的醋酸溶液溶解，待完全溶解后离心，得上清液，上清液稀释后 用于荧光猝灭检测。7. -种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法，其特征在于，包括以下步骤： 标准曲线的绘制:在一系列10 .OOmL的比色管中，按先后顺序分别加入lmL浓度分别为 0·5、1、3、5、10、20、30、40、50、60yg/mL的壳聚糖溶液，pH5·50的B-R缓冲液缓冲液2·OOmL， 1.00 Xl(T4m〇l/L活性红4操作液1.00mL，以蒸馏水稀释至刻度线，摇匀得到浓度分别为 0·05、0·10、0·30、0· 50、1·00、2· 00、3.00、4. 00、5.00、6.00yg/mL的壳聚糖待测溶液，静 置15~120分钟，以Aex=Aem进行同步扫描，记录RRS光谱，并于342nm处分别测量离子缔合 物的Irrs和试剂空白的1〇,绘制标准曲线，进一步得线性方程：ΔΙ= 682.31c+ 114.95(c，y g/mL) 式中ΔI=Irrs-Io; 样品检测：将〇.4g待测样品用0.5mol/L的醋酸溶液溶解，定容至100mL，待完全溶解后 离心，取2.5mL上清液，并定容至100mL，作为样品操作液，取lmL样品操作液，加入2mL的pH为 5.5的B-R缓冲溶液，再加入lmL的1.00XΙθΛιοΙ/L活性红4溶液，用水定容至10mL，混合均匀 后，静置15~120分钟，检测共振瑞利散射强度，由线性方程计算出待测样品中壳聚糖的浓 度。
【专利摘要】本发明属于检测技术领域，具体公开了一种定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法。本发明研究发现，在弱酸性B-R缓冲体系中，活性红4与壳聚糖的离子缔合物于λ=342nm处产生强烈的共振瑞利散射特征峰，共振瑞利散射强度与壳聚糖浓度<i>c</i>呈良好线性关系，在0.050～6.00μg/mL的浓度范围内，线性方程为：<i>ΔI</i>=682.31<i>c</i>+114.95（<i>c</i>，μg/mL），<i>R</i>2=0.9991，检测限0.033μg/mL。据此，建立了以活性红4为探针定量分析壳聚糖的共振瑞利散射法，该方法的回收率为95.85～104.8%。
【IPC分类】G01N21/31
【公开号】CN105486648
【申请号】CN201510776317
【发明人】白研, 苏政权, 张伟爱, 马彩娟, 李建强
【申请人】广东药学院
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年11月13日