一种消癥止痛颗粒中三七的含量测定方法
一种消癥止痛颗粒中三七的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及到的是一种中药复方质量控制的领域，具体涉及一种消癒止痛颗粒中 的Η走含量测定方法。
【背景技术】
[0002] 消癒止痛颗粒原方来源于名老中医验方，由丹参、川写、Η走等9味药材组成，具 有巧癒消癒、行气止痛的功效。该方不仅能明显缩减子宫内膜异位症患者的盆腔包块，消除 和减轻患者的痛经，同时还能有效缓解胸胁、乳房胀痛，舒缓情志等。
[0003] 复方中Η走的现有测定方法主要采用高效液相色谱梯度洗脱系统，采用紫外检测 器进行测定，检测波长在203nm。供试液的制备采用正了醇提取法、甲醇提取结合正了醇 萃取法、己醇提取结合正了醇萃取法、大孔树脂除杂法、大孔树脂结合正了醇萃取法等方法 制备供试液，上述送些方法都存在供试液制备方法步骤重复操作，过程兀长的问题，同时， 203nm处为紫外末端吸收，也是杂质和溶剂峰的吸收波长，故上述测定方法重复性、准确度 均较低。
[0004] 《中国药典》2010年版收载的品种如：S走血伤宁胶囊、云南白药胶囊、 沈阳红药胶囊、乳癖消胶囊、珍黄胶囊和消栓通络胶囊等，丹義妇康煎膏国家标准 WS-10227狂D0227) 2002中均含有Η走，且均采用了正了醇提取或萃取的样品制备过程，运 用高效液相色谱-紫外检测器，在203nm处进行测定，除Η走止血胶囊测定了人参皂巧Rgi 和化1两个指标，其它品种仅测定了人参皂巧Rgi，表明采用高效液相色谱-紫外检测器的 测定方法，难W同时测定Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi和人参皂巧化1的含量。
[0005] 本处方药味多，成分复杂，对上述通用方法进行了认真考察，同时对流动相系统进 行了详细优化，在采用紫外检测器的条件下，运用高效液相色谱法同时测定上述方法制备 样品中的Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi和人参皂巧化1的含量，色谱基线起伏较大，杂质和溶 剂对目标峰存在明显干扰，实验重复性差，准确度低。表明采用W上方法均不能对本品中的 Η走进行准确测定。
[0006] 蒸发光散射检测器是一种新型的通用型检测器，样品流入检测器后，经过雾化、蒸 发溶剂、激光束检测后，能消除掉溶剂和部分杂质的紫外吸收影响，基线平整。
[0007] 基于W上情况，本发明W蒸发光散射检测器代替紫外检测器，对消癒止痛颗粒中 的Η走进行了含量测定研究，对各种供试液制备方法进行了实验，最终，我们选择了最简单 的超声处理法制备供试液和最简单的流动相洗脱系统进行测定。该方法简单，专属性和重 复性好，准确度高。
【发明内容】
[0008] 本发明提供了一种消癒止痛颗粒中Η走的含量测定方法，该方法利用高效液相色 谱-蒸发光散射检测器法，同时测定颗粒中的Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi和人参皂巧化1的 含量。本发明包括W下步骤。
[0009] 1、对照品溶液的制备；精密称取Η走皂巧Ri对照品、人参皂巧Rgi对照品及人参皂 巧抓1对照品适量，加甲醇制成混合对照品溶液，即得。配置成高低两种不同浓度的对照品 溶液。
[0010] 2、供试品溶液的制备；取本品适量，研细，取约l.Og，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入30 %己腊25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用30 %己腊补足 减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0011] 3、色谱条件；W十八烷基娃焼键合硅胶为填充剂；W己腊-水为流动相，按表1 中的规定进行梯度洗脱；应用蒸发光散射检测器，漂移管温度100~11(TC，载气流速为 2. 0~3.化/min,流速1.0ml/min。优选的漂移管温度106°C，载气流速为3.化/min。
[0012] 4、样品分析；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪， 测定，W外标两点法对数方程计算结果，即得。
[0013] 有益效果：
[0014] 本发明采用蒸发光散射检测器代替紫外检测器同时测定本品中有效成分Η走皂 巧Ri、人参皂巧Rgi和人参皂巧化1的含量，可明显提高测定方法的准确度、显著缩短检测时 间等，同时供试液的制备方法更加简单。两种方法比较结果见下表。本发明具有较强的专 属性和良好的重现性。真正体现了本药品安全、有效、质量可控。两种测定方法中的部分图 谱见图1~9。
[0015] 表1两种方法测定本品的结果比较
[0016]
【附图说明】
[0017] 图1 Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1对照品的HPLC图谱（VWD)
[001引图2缺Η走阴性HPLC图谱（VWD)-大孔树脂法制备供试液 [001引图3样品HPLC图谱（VWD)-大孔树脂法巧[J备供试液
[0020] 图4 Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1对照品的HPLC图谱（VWD)
[0021] 图5缺Η走阴性HPLC图谱（VWD)-正了醇萃取法制备供试液
[0022] 图6样品HPLC图谱（VWD)-正了醇萃取法制备供试液
[0023] 图7 Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1对照品的HPLC图谱巧LSD)
[0024] 图8缺Η走阴性HPLC图谱巧LSD)-超声处理法制备供试液
[002引图9样品HPLC图谱巧LSD)-超声处理法巧[J备供试液
[0026] 图10 Η走皂巧Ri线性关系图
[0027] 图11人参皂巧帖线性关系图 [002引图12人参皂巧抓1线性关系图
【具体实施方式】
[0029] 实施例1
[0030] 1、仪器、试药及样品
[0031] 仪器；Agilentl260高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器（Alltech ELSD2000E巧。 Sartorius型电子天平；KQ-300E超声波清洗器（频率40KHZ，功率300W)，Cis色谱柱（Luna， 250 X 4. 6mm，5 μ m)。
[003引试药；己腊和甲醇（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司），超纯水，其余试剂均为 分析纯。
[003引对照品；S走皂巧Ri (含量测定化批号：110745-200617)、人参皂巧Rgi(含量测 定用，批号；110703-201027)、人参皂巧化1 (含量测定用，批号；110704-201122)，均由中国 药品生物制品检定所提供。
[0034] 样品；消癒止痛颗粒（120402、120403、120404、120901、120902、120903)
[0035] 2、系统适用性实验；对流动相系统进行了筛选和优化，分别考察了 W甲醇-水、己 腊-水、己腊-磯酸（均采用梯度洗脱方式），最终采用己腊-水系统（系统比例见表2)， 该洗脱条件峰分离度好，时间短。
[0036] 表2 Η屯含量测定的流动相条件
[0037]
[003引 实施例2
[0039] 供试品溶液的制备；取本品颗粒适量，研细，取约l.Og，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入30 %己腊25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用30 %己腊补 足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0040] 实施例3
[0041] 系统适用性实验；根据表2的流动相条件，对漂移管温度和载气流速进行了考察， 漂移管温度在l〇(TC，载气流速为3.化/min时，测定本品中Η走的含量取得了良好的测定 效果。
[004引 实施例4
[0043] 系统适用性实验；根据表2的流动相条件，对漂移管温度和载气流速进行了考察， 漂移管温度在11(TC，载气流速为2.化/min时，测定本品中Η走的含量取得了良好的测定 效果。
[0044] 实施例5
[0045] 系统适用性实验；根据表2的流动相条件，对漂移管温度和载气流速进行了考察， 选择漂移管温度l〇6°C，载气流速为3.化/min的条件，测定本品中Η走的含量，取得了良好 的测定结果。试验结果稳定，简便可行。
[0046] 实施例6
[0047] 线性关系考察：精密称取Η走皂巧Ri对照品14. 14mg，置25ml量瓶内，用30%己腊 溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0. 5656mg的溶液，作为Η走皂巧R1对照品溶液。
[0048] 精密量取Η走皂巧Ri对照品溶液5ml，置25ml量瓶中；精密称取人参皂巧 Rgill. 26mg(纯度96. 3 % )、人参皂巧化i8. 15mg(纯度92. 9 % )，置同一 25ml量瓶中， 用30 %己腊溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含Η走皂巧Ri〇. 1131mg、含人参皂巧 Rgi〇. 4337mg(按纯度折算后）、含人参皂巧化1〇. 3029mg(按纯度折算后），作为对照品溶液 胆备液；自胆备液中分别精密量取2ml、3ml、5ml、6ml、7ml，分别置不同的10ml量瓶中，分别 加30 %己腊稀释至刻度，摇匀，得相应对照品溶液①、②、⑨、④、⑤；胆备液作为对照品溶 液⑧。分别精密吸取上述对照品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪，测定Η走皂巧Ri、人 参皂巧Rgi、人参皂巧化1色谱峰面积积分值。
[0049] 走皂巧Ri进样量的常用对数为横坐标，其峰面积积分值的常用对数为纵坐 标，绘制标准曲线，计算得Η走皂巧Ri的回归方程：
[0050] Y = 1. 8113X+2. 809，r2 = 0. 9998。说明Η走皂巧 Ri 进样量在 0. 226 ~1. 131 μ g 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
[0051] W人参皂巧Rgi进样量的常用对数为横坐标，其峰面积积分值的常用对数为纵坐 标，绘制标准曲线，计算得Η走皂巧Rgi的回归方程：
[0052] Υ= 1.7748X巧.8653，r2 = 0. 998。说明人参皂巧 Rgi 进样量在 0. 867 ~4. 337ug 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
[0053] W人参皂巧化1进样量的常用对数为横坐标，其峰面积积分值的常用对数为纵坐 标，绘制标准曲线，计算得Η走皂巧化1的回归方程：
[0054] Υ= 1.8219Χ+2. 964，r2 = 0. 9988。说明人参皂巧化1 进样量在 0. 606 ~3. 029ug 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
[00财 实施例7
[0056] 重复性试验；取同一批样品，共6份，各精密称定，照供试品溶液制备方法制备供 试液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μ 1注入液相色谱仪，分别测定并计算 含量，平均含量为11. 65mg/g，RSD为0. 56%，表明重复性好，本发明方法稳定。
[0057] 表3重复性试验结果
[0058]
[00则 实施例8
[0060] 中间精密度；取同一批样品粉末，共6份，各精密称定，根据不同日期、不同操作人 员进行试验，照供试品溶液制备方法制备供试液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液 各10 μ 1注入液相色谱化分别测定并计算含量。平均含量为11. 62mg/g，RSD值为0. 33%， 表明本发明方法稳定。
[0061] 表4中间精密度试验
[0062]
[006引 实施例9
[0064] 供试液稳定性试验；取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8小时各进样1次，测定 Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1的峰面积积分值，计算其常用对数值。结果稳定。
[0065] 表5供试液稳定性试验结果
[0066]
[0067] 实施例10
[006引准确度试验；取样品粉末约0.5g，共6份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分 别精密加入Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1混合对照品（每1ml含Η走皂巧 Ri0. 0283mg、人参皂巧Rgi0. 1232mg、人参皂巧化10. 0829mg) 25ml，称定重量，超声处理20分 钟，放至室温，再称定重量，用30 %己腊补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，测定含量并 计算回收率，Η走皂巧Ri平均回收率为105. 91 %，RSD为2. 13%，人参皂巧R&平均回收率 为96. 83%，RSD为0. 88 %，人参皂巧化1平均回收率为91. 68%，RSD为0. 72%，方法准确 度较好。结果见表6、7、8。
[0069] 表6 Η走皂巧Ri准确度试验
[0070]
[0071] 表7人参皂巧Rgl准确度试验
[0072]
[00巧]实施例11
[0076] 样品含量测定：根据优选的方法对6批样品进行含量测定，结果见表9,符合规定， 表明本发明方法稳定。
[0077] 表9样品中Η走含量测定
[0078]
【主权项】
1. 一种消癥止痛颗粒中三七的含量测定方法，其特征主要包括以下步骤： (1) 供试品溶液的制备：取本品颗粒适量，研细，取约l.Og，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入30 %乙腈25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用30 %乙腈补 足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (2) 对照品溶液的制备：精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rgl对照品及人 参皂苷Rbl对照品适量，加甲醇制成混合对照品溶液；高浓度对照品溶液为含三七皂苷 RIO. 06787mg/ml、人参皂苷RglO. 2603mg/ml、人参皂苷RblO. 1817mg/ml，低浓度对照品溶 液为含三七皂苷RIO. 〇5656mg/ml、人参皂苷RglO. 2169mg/ml、人参皂苷RblO. 1514mg/ml， 即得； (3) 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相，进行梯度洗 脱；应用蒸发光散射检测器进行检测； (4) 分析方法：分别精密吸取两种不同浓度的对照品溶液、供试品溶液各10μ1注入液 相色谱仪，使用蒸发光散射检测器测定含量，使用外标两点法对数方程计算，即得。2. 如权利要求1所述的蒸发光检测器测定方法，其特征在于，漂移管温度100~ 110°C，载气流速为 2. 0 ~3. 5L/min，流速 1. 0ml/min。3. 如权利要求2所述的蒸发光检测器测定方法，其特征在于，漂移管温度106°C，载气 流速为3. 2L/min。4. 如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于流动相为乙腈：水，采用梯 度洗脱，系统条件为：〇 ~20min(20 - 40 : 80 - 60)，20 ~25min(40 : 60)，25 ~ 30min(40 - 20 : 60 - 80)。
【专利摘要】本发明公开了一种消癥止痛复方颗粒中三七的含量测定方法，该方法通过高效液相色谱法(HPLC-ELSD)对成品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量同时进行测定。本发明的含量测定方法，方法简单，专属性和重复性好，准确度高，可较好的控制本品的质量。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/06, G01N30/74
【公开号】CN105486765
【申请号】CN201410531490
【发明人】朱绪民, 侯亚会, 胡鹃, 黄雅洁, 李存勇
【申请人】四川滇虹医药开发有限公司, 滇虹药业集团股份有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年10月10日
【技术领域】
[0001] 本发明涉及到的是一种中药复方质量控制的领域，具体涉及一种消癒止痛颗粒中 的Η走含量测定方法。
【背景技术】
[0002] 消癒止痛颗粒原方来源于名老中医验方，由丹参、川写、Η走等9味药材组成，具 有巧癒消癒、行气止痛的功效。该方不仅能明显缩减子宫内膜异位症患者的盆腔包块，消除 和减轻患者的痛经，同时还能有效缓解胸胁、乳房胀痛，舒缓情志等。
[0003] 复方中Η走的现有测定方法主要采用高效液相色谱梯度洗脱系统，采用紫外检测 器进行测定，检测波长在203nm。供试液的制备采用正了醇提取法、甲醇提取结合正了醇 萃取法、己醇提取结合正了醇萃取法、大孔树脂除杂法、大孔树脂结合正了醇萃取法等方法 制备供试液，上述送些方法都存在供试液制备方法步骤重复操作，过程兀长的问题，同时， 203nm处为紫外末端吸收，也是杂质和溶剂峰的吸收波长，故上述测定方法重复性、准确度 均较低。
[0004] 《中国药典》2010年版收载的品种如：S走血伤宁胶囊、云南白药胶囊、 沈阳红药胶囊、乳癖消胶囊、珍黄胶囊和消栓通络胶囊等，丹義妇康煎膏国家标准 WS-10227狂D0227) 2002中均含有Η走，且均采用了正了醇提取或萃取的样品制备过程，运 用高效液相色谱-紫外检测器，在203nm处进行测定，除Η走止血胶囊测定了人参皂巧Rgi 和化1两个指标，其它品种仅测定了人参皂巧Rgi，表明采用高效液相色谱-紫外检测器的 测定方法，难W同时测定Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi和人参皂巧化1的含量。
[0005] 本处方药味多，成分复杂，对上述通用方法进行了认真考察，同时对流动相系统进 行了详细优化，在采用紫外检测器的条件下，运用高效液相色谱法同时测定上述方法制备 样品中的Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi和人参皂巧化1的含量，色谱基线起伏较大，杂质和溶 剂对目标峰存在明显干扰，实验重复性差，准确度低。表明采用W上方法均不能对本品中的 Η走进行准确测定。
[0006] 蒸发光散射检测器是一种新型的通用型检测器，样品流入检测器后，经过雾化、蒸 发溶剂、激光束检测后，能消除掉溶剂和部分杂质的紫外吸收影响，基线平整。
[0007] 基于W上情况，本发明W蒸发光散射检测器代替紫外检测器，对消癒止痛颗粒中 的Η走进行了含量测定研究，对各种供试液制备方法进行了实验，最终，我们选择了最简单 的超声处理法制备供试液和最简单的流动相洗脱系统进行测定。该方法简单，专属性和重 复性好，准确度高。
【发明内容】
[0008] 本发明提供了一种消癒止痛颗粒中Η走的含量测定方法，该方法利用高效液相色 谱-蒸发光散射检测器法，同时测定颗粒中的Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi和人参皂巧化1的 含量。本发明包括W下步骤。
[0009] 1、对照品溶液的制备；精密称取Η走皂巧Ri对照品、人参皂巧Rgi对照品及人参皂 巧抓1对照品适量，加甲醇制成混合对照品溶液，即得。配置成高低两种不同浓度的对照品 溶液。
[0010] 2、供试品溶液的制备；取本品适量，研细，取约l.Og，精密称定，置具塞锥形瓶中， 精密加入30 %己腊25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用30 %己腊补足 减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0011] 3、色谱条件；W十八烷基娃焼键合硅胶为填充剂；W己腊-水为流动相，按表1 中的规定进行梯度洗脱；应用蒸发光散射检测器，漂移管温度100~11(TC，载气流速为 2. 0~3.化/min,流速1.0ml/min。优选的漂移管温度106°C，载气流速为3.化/min。
[0012] 4、样品分析；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪， 测定，W外标两点法对数方程计算结果，即得。
[0013] 有益效果：
[0014] 本发明采用蒸发光散射检测器代替紫外检测器同时测定本品中有效成分Η走皂 巧Ri、人参皂巧Rgi和人参皂巧化1的含量，可明显提高测定方法的准确度、显著缩短检测时 间等，同时供试液的制备方法更加简单。两种方法比较结果见下表。本发明具有较强的专 属性和良好的重现性。真正体现了本药品安全、有效、质量可控。两种测定方法中的部分图 谱见图1~9。
[0015] 表1两种方法测定本品的结果比较
[0016]
【附图说明】
[0017] 图1 Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1对照品的HPLC图谱（VWD)
[001引图2缺Η走阴性HPLC图谱（VWD)-大孔树脂法制备供试液 [001引图3样品HPLC图谱（VWD)-大孔树脂法巧[J备供试液
[0020] 图4 Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1对照品的HPLC图谱（VWD)
[0021] 图5缺Η走阴性HPLC图谱（VWD)-正了醇萃取法制备供试液
[0022] 图6样品HPLC图谱（VWD)-正了醇萃取法制备供试液
[0023] 图7 Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1对照品的HPLC图谱巧LSD)
[0024] 图8缺Η走阴性HPLC图谱巧LSD)-超声处理法制备供试液
[002引图9样品HPLC图谱巧LSD)-超声处理法巧[J备供试液
[0026] 图10 Η走皂巧Ri线性关系图
[0027] 图11人参皂巧帖线性关系图 [002引图12人参皂巧抓1线性关系图
【具体实施方式】
[0029] 实施例1
[0030] 1、仪器、试药及样品
[0031] 仪器；Agilentl260高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器（Alltech ELSD2000E巧。 Sartorius型电子天平；KQ-300E超声波清洗器（频率40KHZ，功率300W)，Cis色谱柱（Luna， 250 X 4. 6mm，5 μ m)。
[003引试药；己腊和甲醇（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司），超纯水，其余试剂均为 分析纯。
[003引对照品；S走皂巧Ri (含量测定化批号：110745-200617)、人参皂巧Rgi(含量测 定用，批号；110703-201027)、人参皂巧化1 (含量测定用，批号；110704-201122)，均由中国 药品生物制品检定所提供。
[0034] 样品；消癒止痛颗粒（120402、120403、120404、120901、120902、120903)
[0035] 2、系统适用性实验；对流动相系统进行了筛选和优化，分别考察了 W甲醇-水、己 腊-水、己腊-磯酸（均采用梯度洗脱方式），最终采用己腊-水系统（系统比例见表2)， 该洗脱条件峰分离度好，时间短。
[0036] 表2 Η屯含量测定的流动相条件
[0037]
[003引 实施例2
[0039] 供试品溶液的制备；取本品颗粒适量，研细，取约l.Og，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入30 %己腊25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用30 %己腊补 足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0040] 实施例3
[0041] 系统适用性实验；根据表2的流动相条件，对漂移管温度和载气流速进行了考察， 漂移管温度在l〇(TC，载气流速为3.化/min时，测定本品中Η走的含量取得了良好的测定 效果。
[004引 实施例4
[0043] 系统适用性实验；根据表2的流动相条件，对漂移管温度和载气流速进行了考察， 漂移管温度在11(TC，载气流速为2.化/min时，测定本品中Η走的含量取得了良好的测定 效果。
[0044] 实施例5
[0045] 系统适用性实验；根据表2的流动相条件，对漂移管温度和载气流速进行了考察， 选择漂移管温度l〇6°C，载气流速为3.化/min的条件，测定本品中Η走的含量，取得了良好 的测定结果。试验结果稳定，简便可行。
[0046] 实施例6
[0047] 线性关系考察：精密称取Η走皂巧Ri对照品14. 14mg，置25ml量瓶内，用30%己腊 溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0. 5656mg的溶液，作为Η走皂巧R1对照品溶液。
[0048] 精密量取Η走皂巧Ri对照品溶液5ml，置25ml量瓶中；精密称取人参皂巧 Rgill. 26mg(纯度96. 3 % )、人参皂巧化i8. 15mg(纯度92. 9 % )，置同一 25ml量瓶中， 用30 %己腊溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含Η走皂巧Ri〇. 1131mg、含人参皂巧 Rgi〇. 4337mg(按纯度折算后）、含人参皂巧化1〇. 3029mg(按纯度折算后），作为对照品溶液 胆备液；自胆备液中分别精密量取2ml、3ml、5ml、6ml、7ml，分别置不同的10ml量瓶中，分别 加30 %己腊稀释至刻度，摇匀，得相应对照品溶液①、②、⑨、④、⑤；胆备液作为对照品溶 液⑧。分别精密吸取上述对照品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪，测定Η走皂巧Ri、人 参皂巧Rgi、人参皂巧化1色谱峰面积积分值。
[0049] 走皂巧Ri进样量的常用对数为横坐标，其峰面积积分值的常用对数为纵坐 标，绘制标准曲线，计算得Η走皂巧Ri的回归方程：
[0050] Y = 1. 8113X+2. 809，r2 = 0. 9998。说明Η走皂巧 Ri 进样量在 0. 226 ~1. 131 μ g 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
[0051] W人参皂巧Rgi进样量的常用对数为横坐标，其峰面积积分值的常用对数为纵坐 标，绘制标准曲线，计算得Η走皂巧Rgi的回归方程：
[0052] Υ= 1.7748X巧.8653，r2 = 0. 998。说明人参皂巧 Rgi 进样量在 0. 867 ~4. 337ug 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
[0053] W人参皂巧化1进样量的常用对数为横坐标，其峰面积积分值的常用对数为纵坐 标，绘制标准曲线，计算得Η走皂巧化1的回归方程：
[0054] Υ= 1.8219Χ+2. 964，r2 = 0. 9988。说明人参皂巧化1 进样量在 0. 606 ~3. 029ug 范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
[00财 实施例7
[0056] 重复性试验；取同一批样品，共6份，各精密称定，照供试品溶液制备方法制备供 试液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μ 1注入液相色谱仪，分别测定并计算 含量，平均含量为11. 65mg/g，RSD为0. 56%，表明重复性好，本发明方法稳定。
[0057] 表3重复性试验结果
[0058]
[00则 实施例8
[0060] 中间精密度；取同一批样品粉末，共6份，各精密称定，根据不同日期、不同操作人 员进行试验，照供试品溶液制备方法制备供试液，分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液 各10 μ 1注入液相色谱化分别测定并计算含量。平均含量为11. 62mg/g，RSD值为0. 33%， 表明本发明方法稳定。
[0061] 表4中间精密度试验
[0062]
[006引 实施例9
[0064] 供试液稳定性试验；取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8小时各进样1次，测定 Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1的峰面积积分值，计算其常用对数值。结果稳定。
[0065] 表5供试液稳定性试验结果
[0066]
[0067] 实施例10
[006引准确度试验；取样品粉末约0.5g，共6份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，分 别精密加入Η走皂巧Ri、人参皂巧Rgi、人参皂巧化1混合对照品（每1ml含Η走皂巧 Ri0. 0283mg、人参皂巧Rgi0. 1232mg、人参皂巧化10. 0829mg) 25ml，称定重量，超声处理20分 钟，放至室温，再称定重量，用30 %己腊补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，测定含量并 计算回收率，Η走皂巧Ri平均回收率为105. 91 %，RSD为2. 13%，人参皂巧R&平均回收率 为96. 83%，RSD为0. 88 %，人参皂巧化1平均回收率为91. 68%，RSD为0. 72%，方法准确 度较好。结果见表6、7、8。
[0069] 表6 Η走皂巧Ri准确度试验
[0070]
[0071] 表7人参皂巧Rgl准确度试验
[0072]
[00巧]实施例11
[0076] 样品含量测定：根据优选的方法对6批样品进行含量测定，结果见表9,符合规定， 表明本发明方法稳定。
[0077] 表9样品中Η走含量测定
[0078]
【主权项】
1. 一种消癥止痛颗粒中三七的含量测定方法，其特征主要包括以下步骤： (1) 供试品溶液的制备：取本品颗粒适量，研细，取约l.Og，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入30 %乙腈25ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用30 %乙腈补 足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得； (2) 对照品溶液的制备：精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rgl对照品及人 参皂苷Rbl对照品适量，加甲醇制成混合对照品溶液；高浓度对照品溶液为含三七皂苷 RIO. 06787mg/ml、人参皂苷RglO. 2603mg/ml、人参皂苷RblO. 1817mg/ml，低浓度对照品溶 液为含三七皂苷RIO. 〇5656mg/ml、人参皂苷RglO. 2169mg/ml、人参皂苷RblO. 1514mg/ml， 即得； (3) 色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水为流动相，进行梯度洗 脱；应用蒸发光散射检测器进行检测； (4) 分析方法：分别精密吸取两种不同浓度的对照品溶液、供试品溶液各10μ1注入液 相色谱仪，使用蒸发光散射检测器测定含量，使用外标两点法对数方程计算，即得。2. 如权利要求1所述的蒸发光检测器测定方法，其特征在于，漂移管温度100~ 110°C，载气流速为 2. 0 ~3. 5L/min，流速 1. 0ml/min。3. 如权利要求2所述的蒸发光检测器测定方法，其特征在于，漂移管温度106°C，载气 流速为3. 2L/min。4. 如权利要求1所述的含量测定方法，其特征在于流动相为乙腈：水，采用梯 度洗脱，系统条件为：〇 ~20min(20 - 40 : 80 - 60)，20 ~25min(40 : 60)，25 ~ 30min(40 - 20 : 60 - 80)。
【专利摘要】本发明公开了一种消癥止痛复方颗粒中三七的含量测定方法，该方法通过高效液相色谱法(HPLC-ELSD)对成品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量同时进行测定。本发明的含量测定方法，方法简单，专属性和重复性好，准确度高，可较好的控制本品的质量。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/06, G01N30/74
【公开号】CN105486765
【申请号】CN201410531490
【发明人】朱绪民, 侯亚会, 胡鹃, 黄雅洁, 李存勇
【申请人】四川滇虹医药开发有限公司, 滇虹药业集团股份有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年10月10日
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